国家自然科学基金(30871893)
- 作品数：6 被引量：17H指数：2
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- 谷氨酰胺诱导小鼠热休克蛋白70表达的研究被引量：9
- 2009年
- 【目的】研究谷氨酰胺(Gln)对小鼠肝脏、子宫、卵巢组织热休克蛋白70(Hsp70)表达以及对小鼠早期胚胎体外发育的影响。【方法】选取24只8w健康的雌性昆明小白鼠并随机分成4组,Ⅰ组为对照组,尾静脉注射生理盐水,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别注射不同剂量的Gln,注射后4h处死,取肝脏、子宫和卵巢,采用RT-PCR和WesternBlot法检测HSP70mRNA和HSP70的表达;用添加不同浓度Gln的葡萄糖-CZB培养液对小鼠早期胚胎进行体外培养,观察囊胚发育率和孵出率,用WesternBlot方法检测小鼠囊胚Hsp70的表达。【结果】Gln注射组鼠组织中Hsp70表达量均高于对照组,且Hsp70表达量随着Gln注射量的增加而增加。Ⅱ组鼠肝脏、子宫和卵巢组织中Hsp70蛋白表达量比对照组分别增加了9.49%、5.49%和4.84%(P>0.05);Ⅲ组鼠各组织中Hsp70比对照组分别显著(P<0.05)增加了23.56%、21.10%和14.30%;Ⅳ组肝脏组织中HSP70比对照组显著增加了35.33%(P<0.05),子宫和卵巢比对照组分别极显著(P<0.01)增加了33.94%和33.77%;Gln为6和10mmol·L-1的胚胎培养液中小鼠囊胚孵出率分别为73.21%和76.41%,显著(P<0.05)高于对照组(61.88%)。【结论】Gln能诱导小鼠肝脏、子宫、卵巢组织和囊胚Hsp70的表达,并且Hsp70表达量随着Gln剂量的加大而增加;Gln对体外培养的小鼠早期胚胎的发育有明显促进作用。
- 张志宏田文儒李辉辉张启耀高善颂
- 关键词：谷氨酰胺
- TAT-Hsp70融合蛋白表达载体的构建及表达
- 2009年
- 为了得到Hsp70与TAT-PTD(protein transduction domain)的融合蛋白,利用PCR的方法先将9个TAT基因序列置于Hsp70基因序列之前,再克隆到pEASY-E1载体上。pEASY-E1/TAT-Hsp70重组子在大肠杆菌Transetta(DE3)内诱导表达,纯化后经Western blot鉴定,证明其是具有生物学活性的目的蛋白。试验成功得到了可溶性TAT-Hsp70融合蛋白,为应用蛋白转导技术进一步研究Hsp70对细胞的热保护机制奠定了基础。
- 王恺田文儒高善颂姜斐斐王小伟
- 关键词：热休克蛋白TAT蛋白原核表达
- 牛诱导型热休克蛋白72多克隆抗体的制备被引量：1
- 2010年
- 将扩增的诱导型Hsp72的部分基因片段克隆到pMD-18Tvector中测序。将阳性克隆的PCR产物克隆到质粒pET-32a-c(+)中,并将重组表达载体转化E.coliBL21(DE3)。重组表达载体酶切鉴定,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达有活性的可溶性蛋白。采用纯化后的Hsp72免疫家兔,制备抗血清,Western-blot检测重组抗原的反应原性。Western-blot检测证明,所制备的多克隆抗体可以与Hsp72特异性结合。
- 姜斐斐田文儒高善颂王恺王小伟
- 关键词：原核表达
- TCZB培养液提高小鼠早期胚胎热耐受性的研究
- 2010年
- 【目的】研究改良的CZB培养液(TCZB)对小鼠早期胚胎发育的影响,寻找一种可以提高动物胚胎热耐受性的新型培养液。【方法】利用原核表达的方法得到TAT蛋白和小鼠Hsp70的串联表达体—Tat-Hsp70,通过在CZB培养液中添加Tat-Hsp70蛋白,配制成TCZB培养液。比较热应激组及对照组胚胎发育率和囊胚孵出率的不同。【结果】小鼠胚胎经39℃热应激处理后,CZB组、TCZB组及对照组的囊胚发育率及囊胚孵出率无显著差异。41℃热应激处理后各组则有显著差异,对照组囊胚发育率及囊胚孵出率(83.7±6.1和75.6±4.5)显著高于TCZB组(81.3±4.5和76.5±7.6)(P<0.05),TCZB组显著高于CZB组(80.2±5.4和73.4±6.2)(P<0.05)。【结论】TCZB培养液可以提高小鼠早期胚胎在41℃强烈热应激条件下的发育率,提高小鼠胚胎的热耐受性。
- 王恺田文儒高善颂
- 关键词：热休克蛋白小鼠胚胎
- 不同强度热应激预处理对胎鼠发育及组织SOD、GSH-Px活性和MDA含量的研究被引量：5
- 2010年
- 王小伟田文儒王恺姜斐斐高善颂
- 关键词：MDA含量GSH胎鼠
- 预热诱导HSP70表达对高温引致胚胎损伤的保护作用被引量：2
- 2009年
- 用37℃2 h条件下体外培养的小鼠囊胚作为对照,将体外培养至囊胚期的小鼠胚胎分别施以38℃2 h、39℃2 h、40℃2 h的预热应激处理,以观察热休克蛋白70(HSP70)表达对高温所致胚胎损伤的影响。用W estern-b lot技术检测小鼠胚胎内HSP70的表达,然后分别将预热胚胎和对照组胚胎置于42℃高温下处理3 h,用台盼兰拒染法检测胚胎存活率,判断HSP70表达对胚胎抵抗高温损伤有无保护作用。结果显示:39℃热应激处理2 h后,HSP70表达量达到最高水平,与对照组差异极显著(P<0.01);38℃热应激处理2 h和40℃热应激处理2 h组HSP70表达与对照组相比均有显著(P<0.05)增加;预热诱导组胚胎存活率明显(P<0.05)高于对照组,其中以39℃2 h组最高。提示HSP70的高表达可以抵抗胚胎对外界不良因素的刺激。
- 张启耀田文儒高善颂张志宏侯春霞李辉辉
- 关键词：热应激小鼠囊胚HSP70
