广东省自然科学基金(034617)
- 作品数：4 被引量：20H指数：3
- 相关作者：何韶衡陶爱林张利达李东栋陈章权更多>>
- 相关机构：汕头大学上海交通大学广州医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 葎草及豚草过敏原嵌合基因的创建及其抗原性评价被引量：3
- 2006年
- 目的构建一种嵌合过敏原,同时保有草和豚草过敏原的特征,而其抗原性得到改变。方法以业经克隆到草和豚草过敏原基因片段的混合物为模板,利用桥式PCR和重叠引物法,扩增得到嵌合基因,利用测序、蛋白表达及抗原性分析软件对所得嵌合基因编码蛋白与MHCⅡ类分子的结合表位进行评价。结果通过以上方法获得嵌合基因3例,序列分析表明,3例嵌合基因AL03-1、AL03-2及AD03-4分别与原始克隆LCM9、LCS13(LCM20)及D03具有较高的同源性,而其抗原性分别比相似的原始克隆略强、略强及明显增强,融合表达带型与原始克隆的也基本一致。结论采用桥式PCR及重叠引物法,嵌合基因及其表达载体得到成功构建,所得的嵌合基因将满足不同体质或不同免疫力的人群、不同免疫治疗阶段的脱敏治疗的临床需要。
- 陶爱林何韶衡
- 关键词：嵌合基因抗原性
- 采用简并引物克隆葎草花粉过敏原全长同源cDNA被引量：9
- 2004年
- 目的 :建立一套稳定可靠的方法 ,对过敏原性物种中的过敏原同源基因进行快速克隆。方法 :在分析生物信息数据库中积累的大量过敏原序列同源性的基础上 ,设计简并引物 ,基于高质量草花粉RNA ,逆转录合成cDNA。采用Touch down方式在cDNA池中进行选择性PCR扩增。同时借助梯度PCR程序 ,对引物扩增的简并性作进一步强化 ,并结合RACE技术获取全长cDNA ,进而对草花粉中的过敏原同源基因进行克隆。结果 :成功地获得 3个全长cDNA克隆。序列分析显示 ,这些基因与已知过敏原的基因序列相似性高达79%～ 85 % ,初步认定其为泛过敏原肌球蛋白抑制蛋白 (pro filin)的同源基因。对比RACE技术获得的相应基因的全长序列发现 ,这些序列在引物结合处与简并引物序列之间存在 4个碱基的差异 ,提示采用Touchdown方式的梯度PCR程序 ,可使引物的简并性得到进一步扩展。结论 :简并引物与Touch down梯度PCR相结合的方法 。
- 陶爱林何韶衡张利达陈章权李东栋
- 关键词：基因克隆同源基因
- 豚草花粉泛过敏原同源基因克隆与序列分析被引量：11
- 2004年
- 目的 克隆豚草花粉泛过敏原同源基因。方法 采用生物信息学分析方法对众多的花粉过敏原基因进行序列同源性比较 ,以序列保守区域为依据设计合成简并引物 ,在特殊的RT PCR条件下 ,结合RACE技术对豚草花粉中的过敏原全长基因进行克隆 ;通过Northern杂交及序列分析初步确定基因产物是否为花粉过敏原。结果 获得了 3个新的全长基因。序列分析显示 :所得过敏原同源基因与数十种不同种属来源的过敏原肌动蛋白结合蛋白 (profilin)具有较高的同源性 ,初步认定其为泛过敏原 ,并暂命名为Amba 8(t)。Northern杂交证实该基因在花粉中表达。结论 采用本研究方法成功地在豚草花粉中克隆到 3个泛过敏原基因 。
- 陶爱林何韶衡
- 关键词：基因克隆豚草同源基因生物信息学RACE技术
