西京医院科技创新基金(XJCX05M15)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：张健崔志利刘新平惠玲周健更多>>
- 相关机构：西安市北方医院第四军医大学第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：西京医院科技创新基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 稳定表达MRG15基因的人晶状体上皮细胞株的建立被引量：1
- 2006年
- 目的:克隆人15号染色体上死亡相关因子(MORF4-re-latedgeneonchromosome15,MRG15)基因的编码区全长,构建真核表达载体,建立稳定表达MRG15的人晶状体上皮细胞株,为MRG15在年龄相关性白内障(agerelatedcataract,ARC)发生中相关功能的研究奠定基础。方法:采用RT-PCR由人ARC晶状体前囊膜标本中扩增MRG15的编码区全长,克隆至pMD18-T载体并测序,结果正确后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,采用脂质体法对培养人晶状体上皮细胞进行稳定转染,挑取单克隆,用Westernblot进行MRG15表达的鉴定。结果:测序证实,由ARC晶状体前囊膜中扩增出的MRG15编码区全长序列正确。重组质粒pcDNA3.1(+)-MRG15经酶切后释放出与理论长度相符的片段。培养人晶状体上皮细胞稳定转染挑取单克隆后,经Westernblot检测,30个克隆中有19个MRG15的表达量明显增高。结论:克隆了人MRG15的编码区全长,成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-MRG15,并建立了稳定表达MRG15的人晶状体上皮细胞株。
- 张自峰张健周健惠延年惠玲刘新平药立波王雨生崔志利
- 关键词：年龄相关性白内障晶状体上皮细胞克隆
