国家自然科学基金(30871704)
- 作品数：7 被引量：25H指数：3
- 相关作者：胡向阳李婉莎杨永平刘德团杨君更多>>
- 相关机构：中国科学院黑龙江八一农垦大学中国科学院研究生院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国科学院“百人计划”黑龙江省研究生创新科研项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 激活标签法构建拟南芥突变体库及其表型分析被引量：5
- 2010年
- 以拟南芥(Arabidopsis thaliana)野生生态型(Columbia)植株为实验材料,以含有激活标记双元质粒pCB260的农杆菌进行转化,并以抗除草剂Basta为筛选标记,构建了拟南芥激活标签突变体库,所用pCB260双元质粒含有两个Ds位点、一个GFP标记基因与一个抗basta标记基因,可以方便高效地筛选转基因植物。目前经初步筛选获得了约10000个独立转化株系(T1代),其中约50个株系具有明显的表型变化,包括花期改变、株型变异、叶形特异、育性降低、花发育异常、种子颜色变浅等。运用TAIL-PCR技术,成功获得了其中10个表型特异株系的T-DNA侧翼序列,分别分布于拟南芥基因组的5条染色体上。
- 关艳龙李婉莎殷奎德杨永平胡向阳
- 关键词：拟南芥突变体TAIL-PCR
- 应用分子伴侣共表达系统表达pfu基因及酶活性测定被引量：8
- 2009年
- 将通过In-fution方法构建的pET32a-pfu质粒与可以促进可溶性表达的HG-PGRO7质粒一起转入大肠杆菌BL21(DE3)共表达,以pET32a-pfu单独在BL21(DE3)中表达作为对照。用热变性和(NH4)2SO4沉淀去除部分杂蛋白,再经Ni-NAT亲和层析柱纯化分离pfu蛋白,SDS-PAGE检测结果表明目的蛋白大小约为90kD,与预计的分子量大小一致。最后对其酶活性测定结果表明分子伴侣能够促进pfu基因表达,并能够提高酶活性。
- 张海军杨君刘晓光胡向阳
- 关键词：PFU分子伴侣蛋白纯化酶活测定
- 拟耧斗菜昼夜差异表达ESTs的分离与分析被引量：1
- 2011年
- 应用磁珠介导的抑制消减杂交方法,以青藏高原白马雪山流石滩地区植物拟耧斗菜为实验材料,分别在白天与夜晚采样,以白天样品为目标,晚上样品为驱动样品,分离昼夜差异表达的基因。随机挑选了96个差异ES-Ts克隆并进行测序,测序结果进行b lastx网上数据库比对、B last2go功能注释和KEGG代谢路径分析。结果表明:绝大部分ESTs功能与物质能量代谢、生物合成、蛋白和核酸结合、转移酶活性相关,还有少数与逆境胁迫相关等。这为进一步研究高山植物逆境适应的分子机制奠定了基础。
- 刘德团李婉莎查宏光杨永平胡向阳
- 关键词：高山植物胁迫抑制消减杂交
- 云南栽培种及野生种芋头的AFLP指纹分析被引量：1
- 2011年
- 目的:分析云南芋头种质资源遗传多样性。方法:应用扩增片段长度多态性(AFLP)指纹技术,用3对AFLP引物对采集自云南省的9份芋头栽培品种及1份野生品种进行研究,分离AFLP多态性条带。结果:共分离到60个AFLP多态性条带,AFLP多态位点百分率为96.77%,云南芋头种质资源在DNA分子水平上表现出丰富的遗传多样性。聚类分析将10份芋头品种分为2组,遗传距离为0.101～0.908。结论:AFLP指纹技术是筛选品种间差异基因的有效方法,研究结果为云南省芋头品种鉴定、遗传相关性分析、特殊功能基因的分离等工作提供了一定的理论基础。
- 李婉莎刘德团胡向阳
- 关键词：芋头扩增片段长度多态性指纹分析
- 箭毒木种子蛋白质样品制备及双向电泳改良方法被引量：10
- 2009年
- 建立箭毒木(Antiaris toxicaria)种子总蛋白的提取方法,以及可以对其蛋白质组进行分析的双向电泳条件。通过各种条件的优化与组合,建立了以TCA-丙酮为基础的Tris-HCl提取法提取总蛋白,第1向电泳为固相pH梯度等电聚焦,第2向电泳为垂直平板SDS-PAGE的双向电泳体系。通过对样品制备、样品溶解、等电聚焦电泳、SDS——聚丙烯酰胺凝胶电泳以及染色方法等关键步骤进行分析,获得了满意的双向电泳图谱。在探索适合箭毒木种子蛋白质组学研究双向电泳方法中,比较了三氯乙酸-丙酮沉淀法、和Tris-HCl法,以及对双向电泳过程中的关键步骤的改良,认为Tris-HCl法为最适方法,所得图谱背景清晰,蛋白质信息量最大,为箭毒木属植物的差异蛋白质组学的后续研究打下了坚实的基础。
- 杨君杨云强杨永平胡向阳
- 关键词：箭毒木双向电泳
- 狭果葶苈高温响应表达序列标签的分离与初步分析
- 2011年
- 目的:分离与分析白马雪山流石滩地区植物狭果葶苈高温响应基因,研究高山植物高温耐受机制。方法:应用磁珠介导的抑制消减杂交分离差异表达序列标签(EST),通过测序与Blastx比对,用Blast2go程序进行功能注释和代谢路径分析。结果:大部分EST功能与物质能量代谢、生物合成、蛋白和脂肪结合、转移酶活性相关,还有一些胁迫响应的基因。结论:狭果葶苈高温胁迫应答机制是非常复杂的,需要众多基因的参与。
- 刘德团李婉莎杨永平胡向阳
- 关键词：抑制消减杂交表达序列标签注释
- 宽果苁菔适应昼夜变化ESTs的分离与分析
- 2012年
- 以流石滩地区植物广布种宽果苁菔为实验材料,应用磁珠介导的抑制消减杂交方法,分离昼夜差异基因。随机挑选了136个差异ESTs克隆并进行测序,测序结果使用Blast2go程序进行功能注释和分析。结果表明绝大部分ESTs功能与稳定细胞状态和抗性响应相关,其次与物质能量代谢和信号传导相关,宽果苁菔适应昼夜变化过程的机制非常复杂,本研究为进一步研究高山植物适应流石滩恶劣环境的机制奠定了基础。
- 刘德团李婉莎胡向阳
- 关键词：表达序列标签抑制消减杂交
