国家教育部博士点基金(200802551026)
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
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- 高剪接活性断裂蛋白质内含子的体内切割被引量：1
- 2011年
- 蛋白质内含子介导的断裂(切割)反应被用于蛋白质纯化、连接和环化等,但目前仍存在断裂效率低、断裂反应的不可控、产物复杂等问题。蛋白质内含子的定点突变可导致其N端或C端断裂。其末位氨基酸突变则剪接反应第3步天冬酰胺环化无法进行,发生N端断裂;其首位氨基酸发生突变则剪接反应第一步酰基重排及其后续步骤均无法进行,而天冬酰胺环化仍可进行,发生C端断裂。利用已获得的高剪接活性的S1和S11型断裂蛋白质内含子Ssp GyrB,分别将其参与剪接反应的首位半胱氨酸或末位天冬酰胺突变为丙氨酸,构建能够发生一端断裂的断裂蛋白质内含子。研究结果表明,突变后断裂蛋白质内含子的剪接反应几乎不发生,其断裂活性有不同程度的提高,获得了在大肠杆菌体内具有较高效断裂活性的断裂蛋白质内含子。这将为进一步研究其体外可控性剪接、构建高效的蛋白纯化系统和深入研究蛋白质内含子的剪接机制提供基础。
- 林瑛周倩荀启静孟清
- 关键词：蛋白质内含子定点突变
- 力戒“满堂看”,减轻“视觉疲劳”
- 2009年
- 目前高校广泛采用的课件教学形式往往会形成＂满堂看＂。但通过字体＂变＂、色彩＂多＂、图像＂活＂、设计＂巧＂等手段,可有效地调动学生各种感官的接受积极性,从而减轻视觉负担,提高课堂教学的综合接受效果。
- 林瑛孟清
- 关键词：课件教学视觉疲劳
- 定向进化提高微小蛋白质内含子Ter DnaE-3剪接活性的研究
- 2012年
- 目前,蛋白质内含子在蛋白质工程领域中得到越来越广泛的应用。为提高微小蛋白质内含子Ter DnaE-3(Trichodesmium erythraeum)在异源宿主中的剪接活性,采用易错PCR技术,通过改变反应体系中dNTP、Mg2+、Mn2+的浓度等手段,借助依赖卡那霉素的蛋白质内含子筛选系统进行筛选。Western印迹结果表明:通过定向进化,其中5号突变体的剪接活性从原始的约20%提高至约85%;9号突变体能够避免发生剪接副反应,即N端断裂反应。氨基酸突变位点与剪接活性变化的相关性分析表明:参与α-helix形成的氨基酸的突变极有可能影响蛋白质内含子的断裂反应,参与β-sheet形成的氨基酸的突变则有可能影响蛋白质内含子结构的紧凑性。通过定向进化提高微小蛋白质内含子Ter DnaE-3在异源宿主中的剪接活性,进一步验证依赖卡那霉素抗性的筛选系统的可行性,为扩大蛋白质内含子的应用范围奠定基础。
- 荀启静林瑛邱沛然孟清
- 关键词：蛋白质内含子定向进化蛋白质剪接
- 新型断裂内含肽介导的可控性C端断裂(英文)
- 2011年
- 内含肽介导的蛋白质断裂被广泛地应用于蛋白质纯化、连接和环化.但目前的方法都是用传统的连续的内含肽来介导蛋白质断裂反应,因而往往存在自发性断裂、产率低等问题.本实验选择3个S1型新型断裂内含肽Ter ThyX、Ssp GryB和Rma DnaB来实现蛋白质断裂反应的可控性.在可控性C端断裂反应中,S1型断裂内含肽的C端片段(IC)与硫氧还蛋白(T)融合作为前体蛋白,加入化学合成的Ssp DnaB S1型断裂内含肽的N端小肽与二硫苏糖醇(DTT)共同诱导C端断裂反应.结果表明,该小肽可以诱导这3个不同的S1型断裂内含肽的前体蛋白发生C端断裂反应.该方法为利用内含肽C端断裂介导的蛋白质纯化提供了更多的选择,并为内含肽的结构与功能的关系研究提供了有用的线索.
- 齐兴梅林瑛孟清
- 关键词：内含肽蛋白质剪接
