国家教育部博士点基金(20030183006)
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
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- 氯化镉诱导大鼠心肌细胞H9c2凋亡的作用机制被引量：5
- 2007年
- 目的:研究不同浓度氯化镉(CdCl2)引起大鼠心肌细胞H9c2凋亡及机制。方法:将培养的大鼠心肌细胞H9c2分为阴性对照组和镉处理组,阴性对照组为DMEM培养液,镉处理组分别暴露于5、10、30、50和80μmol.L-1CdCl2作用6、12和24 h,采用MTT法检测细胞存活率;AnnexinⅤ-FITC/propidium iodide (PI)流式细胞技术(FCM)、丫啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)双荧光染色法检测细胞凋亡情况。结果:镉处理组细胞存活率随着剂量的加大及时间延长明显下降,与阴性对照比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01);CdCl2可引起H9c2细胞凋亡,各剂量组凋亡率明显高于阴性对照组(P<0.001),各剂量组之间凋亡率差异无显著性(P>0.05);AO/EB染色镜下可见H9c2细胞呈典型早期凋亡形态学改变。结论:H9c2细胞对CdCl2的作用较敏感,低剂量、短时间作用即可引起细胞凋亡,但H9c2细胞对CdCl2有一定耐受性。
- 王华黄渭孙磊郭彩霞金明华刘晓梅王雯孙志伟
- 关键词：氯化镉心肌细胞H9C2细胞凋亡
- 镉致大鼠心肌细胞H9c2凋亡作用被引量：4
- 2009年
- 目的研究不同浓度氯化镉(CdCl2)引起大鼠心肌细胞H9c2凋亡作用。方法采用姬姆萨染色法观察氯化镉对细胞毒作用的形态学改变;采用Annexin V-FITC/propidium iodide(PI)流式细胞技术(flowcytometric,FCM)检测氯化镉对H9c2细胞凋亡的影响;采用流式细胞术法检测线粒体膜电位(MMP)的变化;采用免疫细胞化学法检测细胞色素C表达。结果5,10,30,50,80μmol/L的氯化镉分别作用H9c2细胞6,12,24 h可以诱导细胞凋亡;随着镉剂量的加大及作用时间的延长,线粒体膜电位明显下降,与阴性对照比较,差异有统计学意义(P<0.05);随着镉剂量增加,CytC表达增强。结论镉可以通过线粒体途径诱导H9c2细胞凋亡。
- 黄渭王华郭彩霞金明华孙磊杜海英刘晓梅孙志伟
- 关键词：氯化镉H9C2细胞色素C
- 大鼠Smac基因的克隆及其在心肌细胞H9C2中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的:克隆大鼠促凋亡基因Smac,构建真核表达载体pcDNA3.1+-rSmac,并在心肌细胞中表达。方法:应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从大鼠肾组织中扩增到大鼠Smac基因的CDs片段,构建含Smac基因的真核表达载体pcDNA3.1+-rSmac,并将此重组质粒、空载体pcDNA3.1+、pcDNA3.1+-EGFP通过脂质体介导转染大鼠心肌细胞H9C2,荧光显微镜、流式细胞术间接检测转染效率,RT-PCR法检测外源基因的表达。结果:经测序目的基因序列与GenBank(NM_001008292)公布的结果一致,所构建的重组质粒pcDNA3.1+-rSmac经PCR和酶切鉴定所释放的片段大小与预期结果相符。荧光显微镜和流式细胞术检测,细胞转染有效,转染效率达38.36%。转染重组载体pcDNA3.1+-rSmac 48 h后,H9C2细胞Smac的mRNA水平明显升高。其中,对照组Smac/-βactin为1.19,空载体组Smac/-βactin为1.31,二者之间差异无显著性(P>0.05);转染pcDNA3.1+-rSmac组Smac/-βactin为1.67,与对照组比较差异具有显著性(P<0.01)。结论:克隆大鼠Smac基因成功,成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1+-rSmac,并在转染后的心肌细胞中表达,为研究Smac基因在心肌细胞凋亡过程中的调控作用奠定基础。
- 郭彩霞李艳博王华冯星黄渭孙志伟
- 关键词：SMAC基因转染真核表达
