国家自然科学基金(30570048)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 相关作者：武波陈钢陆祖军曹永强唐美琼更多>>
- 相关机构：广西大学广西亚热带生物资源保护利用重点实验室广西药用植物园更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 费氏中华根瘤菌ntrBC基因突变株的构建及其特性被引量：2
- 2007年
- 从费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)HN01基因文库的重组质粒pGXHN300上获得ntrB、ntrC基因完整序列.通过自杀质粒pK18mob同源单交换的方法,分别获得了HN01菌株的ntrB和ntrC基因的突变株GXHNB、GXHNC.功能检测证明GXHNB、GXHNC能以硝酸盐为唯一氮源进行正常生长,但不能以铵源作为唯一氮源进行正常生长.
- 龚焘陆祖军陈钢曹永强武波
- 关键词：费氏中华根瘤菌突变体
- 费氏中华根瘤菌lrp基因的克隆、突变与功能
- 2008年
- 通过分子克隆技术,从费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)HN01基因组文库中克隆到一个lrp基因.该基因与已报道的苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)1021的lrp基因在核苷酸水平上有89%相似性,在氨基酸水平上有99%相似性.利用自杀质粒pK18mob构建含有lrp基因部分片段的重组质粒,通过三亲本结合后导入原始菌株HN01中,经过同源单交换,获得发生正向插入突变的突变株GXHNLTA和反向插入突变的突变株GXHNLTB.将lrp基因ORF连接到载体pLAFR3上,获得用于互补的质粒pGXHNL100,将该质粒通过三亲本接合导入突变株中,获得互补株GXHNWA、GXHNWB.对野生型菌株、突变株、互补株进一步研究发现,在以脯氨酸、亮氨酸、丝氨酸等氨基酸为唯一碳、氮源的MM培养基中培养时,突变体GXHNLTA、GXHNLTB的生长均滞后于出发菌株HN01.植株试验表明,突变菌株GXHNLTA、GXHNLB比野生菌株HN01开始结瘤的时间提前1d,在结瘤效率、单株瘤数、瘤重、固氮酶活性方面并无显著差别.
- 陈钢唐美琼孙云许兢武波
- 关键词：SINORHIZOBIUMFREDIILRP基因突变
- 费氏中华根瘤菌HN01的putA基因克隆
- 2010年
- 从快生型大豆根瘤菌费氏中华根瘤菌HN01的基因组文库中克隆到一个putA(脯氨酸脱氢酶)基因,该基因与已报道的苜蓿中华根瘤菌1021中putA基因在核苷酸和氨基酸水平上分别有82%和86%相似性.利用自杀性质粒pK18mob构建含有putA基因部分片段的重组质粒,通过三亲本结合导入出发菌株HN01中,获得正向插入的极性突变体GXHNPA和反向插入非极性突变体GXHNPB.将putA基因完整的ORF连接到广宿主载体pLAFRJ上,获得用于互补的质粒pGXHN37,通过三亲接合,将pLAFRJ导入GXHNPA和GXHNPB获得互补菌株GXHNPHA和GXHNPHB.对出发菌株、突变菌株、互补菌株进一步的研究发现,以脯氨酸为唯一C、N源的MM培养基中培养时,突变体均不能生长,互补菌株和野生型HN01没有差异,而在完全培养基YMB中培养时,突变菌株生长不受影响.植株实验发现,突变体均能有效结瘤,但是固氮酶活与出发菌株相比有所下降,结瘤时间延迟1d,竞争结瘤能力下降,而互补菌株与野生型HN01没有明显的差异.
- 唐美琼申佩弘许兢蒋承建陈钢武波
- 关键词：克隆突变体结瘤
- 费氏中华根瘤菌HN01pmrA所在基因簇的结构分析
- 2007年
- 经原位杂交,从费氏中华根瘤菌HN01基因组文库中钓出含有pmrA基因的阳性克隆pGXHN 300,对其进行亚克隆测序得到pm rA两翼6.8 kb的DNA序列。生物信息学分析显示,该序列包括6个完整的ORF和1个不完整ORF。pm rA所在的基因簇含有4个ORF:ORF a、ORFb、ORF c、ORFd(pm rA)。其中,ORF a与Rh izobium etli的cy sG(CAA 04958.1)在氨基酸水平一致性为79%,相似性为87%。对ORF c序列分析发现与亚硫酸及亚硝酸还原相关的保守结构域。通过融合PCR方法,将两个潜在的启动子序列分别连在gus上游,以pTR102为载体导入HN 01中。在完全培养基YMA上两个启动子均不表达,在以硝酸钠为氮源,亚硫酸钠、硫酸钠或甲硫氨酸分别为硫源的MM培养基上生长均表达出GU S活性,表明这两个潜在的启动子与硫、氮代谢相关。
- 曹永强隆文杰梁善范陈钢陆祖军武波
- 关键词：费氏中华根瘤菌基因文库启动子
