国家高技术研究发展计划(2004AA213101)
- 作品数：4 被引量：41H指数：4
- 相关作者：扈荣良张守峰李海涛涂长春肖跃强更多>>
- 相关机构：军事医学科学院沈阳农业大学新疆农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 狂犬病病毒核蛋白基因重组犬2型腺病毒的构建研究被引量：4
- 2005年
- 目的获得具有感染性的狂犬病病毒核蛋白犬2型腺病毒,并对重组病毒生物学和免疫学特性进行初步探讨。方法对克隆的犬2型腺病毒全基因组E3区进行部分缺失后,插入由CMV启动子、狂犬病病毒SRV9株核蛋白基因和牛生长激素polyA构成的长2392bp的表达盒,然后通过AscⅠ和PvuⅠ双酶切,游离重组全基因组,转染犬肾细胞系。结果盲传5代后,细胞产生典型病变。经鉴定,确定得到了狂犬病病毒核蛋白重组犬2型腺病毒(CAV2RN)。Westernblot检测表明,狂犬病病毒核蛋白在重组犬2型腺病毒中得到了表达。结论重组病毒可以诱导受试犬产生针对犬2型腺病毒和狂犬病病毒核蛋白的特异性抗体。
- 李海涛扈荣良张守峰肖跃强袁慧君涂长春
- 关键词：狂犬病病毒核蛋白犬2型腺病毒重组病毒
- 表达狂犬病病毒糖蛋白膜外区重组犬2型腺病毒的构建及其免疫原性研究被引量：8
- 2005年
- 为研制 1种以犬 2型腺病毒为载体的狂犬病疫苗 ,以狂犬病病毒SRV9株基因组为模板 ,通过RT_PCR技术扩增得到狂犬病病毒糖蛋白膜外区序列 ;以其为目的基因构建以CMV为启动子、SV4 0polyA为终止信号的表达盒。将犬 2型腺病毒的E3区克隆入中间质粒中 ,然后对其进行部分缺失 ,并将表达盒克隆入缺失处 ,再以此重组的E3区置换犬 2型腺病毒的E3区。以重组的犬 2型腺病毒基因组转染MDCK细胞 ,最终获得了表达盒分正向和反向插入E3区的重组犬 2型腺病毒。用两株重组腺病毒免疫幼犬 ,均在犬体内产生了针对狂犬病病毒的抗体。
- 王永志张守峰扈荣良王莘肖跃强
- 关键词：犬2型腺病毒蛋白膜RT-PCR技术MDCK细胞SV40
- 猪霍乱沙门氏菌载体介导猪瘟病毒DNA免疫研究
- 将编码猪瘟病毒(CSFV)主要保护性抗原的E2基因克隆至真核表达载体pVAX1,构建了含CSFV E2基因的真核表达质粒pVAXE2。将其电转化猪霍乱沙门氏菌C500疫苗株,构建了携带pVAXE2质粒的重组菌S.C500...
- 乔红伟孙金福韩文瑜涂长春
- 关键词：猪瘟病毒猪霍乱沙门菌E2蛋白
- 文献传递
- 狂犬病毒核蛋白单抗和荧光抗体中和试验的建立与应用被引量：18
- 2006年
- 目的建立狂犬病毒血清中和抗体效价的快速检测方法,以实现狂犬疫苗免疫效果的定量评价,指导高危人群及动物种群的免疫预防。方法采用常规方法建立杂交瘤细胞株并制备抗狂犬病毒核蛋白单抗,以亲和层析法进行纯化,异硫氰酸荧光黄标记制备荧光抗体;以BHK-21细胞系培养狂犬病毒细胞适应株CVS-11,以染毒细胞测定荧光抗体的工作浓度后,通过荧光抗体染色法测定CVS-11细胞半数感染量(TCID50);利用狂犬病毒灭活疫苗免疫犬制备抗狂犬病毒血清,并以国际兽疫局标准品进行标定;参考世界卫生组织及国际兽疫局推荐方法,确定中和试验程序,对51份样品血清进行测定,并与国际狂犬病参考实验室的检测结果进行比较,评价其精确及可靠程度。以Kaber法公式和MicrosoftExcel软件为基础,设计被测样品中和效价计算方法。结果制备的抗狂犬病毒核蛋白单抗的亚型为IgG2a;纯化、标记后的荧光抗体工作浓度为1∶400;CVS-11株的使用量为每孔100TCID50;本研究建立的检测程序对51份人及犬血清测得的中和效价结果与国际参考实验室的测定结果一致;自行设计的计算方法操作简便,计算快捷。结论成功建立了与国际标准相当的狂犬病毒中和抗体效价测定和计算方法。
- 张守峰曹亮张菲李海涛李清竹扈荣良
- 关键词：狂犬病毒杂交瘤荧光抗体技术
- 猪霍乱沙门菌载体介导猪瘟病毒DNA免疫研究被引量：13
- 2005年
- 构建了猪瘟病毒(CSFV)主要保护性抗原E2基因的真核表达质粒pVAXE2。将其电转化猪霍乱沙门氏菌C500疫苗株,得到了携带pVAXE2质粒的猪霍乱沙门氏菌工程菌株S.C500pVAXE2,对该菌株的特征、培养特性和生化特性进行了鉴定。分别用1×108CFU、2×109CFUS.C500pVAXE2经口服或肌肉注射免疫小鼠和家兔,间接ELISA检测免疫动物的特异性抗体,在第三次免疫后2周用20ID50猪瘟兔化弱毒和致死量猪霍乱沙门氏菌强毒株对免疫兔进行攻击。结果表明,S.C500pVAXE2保持了猪霍乱沙门氏菌原有形态特征、培养特性和生化特性,免疫鼠和兔都产生了抗CSFV和猪霍乱沙门菌的ELISA抗体,免疫家兔能抵抗猪瘟兔化弱毒株和猪霍乱沙门氏菌强毒株的攻击。显示了以S.C500为DNA运输载体构建二联或多联猪用疫苗的可行性。
- 乔红伟孙金福韩文瑜李作生余兴龙涂长春
- 关键词：猪瘟病毒DNA免疫
