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钴离子处理对麦冬类囊体膜PSⅡ活性和多肽组分的影响被引量：7: 2006年; Effects of Co2+ on fluoresence emission spectra at room temperature,activity of DCIP photoreduction and polypeptide compositions of thylakoid membrane were studied.The results showed that fluoresence emission spectra at room temperature was changed after Co2+treatment: intrinsic fluoresence spectra at room temperature upon excitation at 278 nm and 295 nm was decreased at the Co2+concentration below 15 mmol/L and increased at the Co2+concentration above 15 mmol/L;Chlorophyll fluoresence spectra at room temperature upon excitation at 436 nm and 475 nm was decreased;The inhibition of DCIP photoreduction activity and the changes of polypeptide compositons of the thylakoid membrane were observed as a result of Co2+ treatment.; 陈艺文薛薇袁瀚张年辉杜林方; 关键词：类囊体膜钴离子麦冬色素蛋白复合物

拟南芥STN7和STN8蛋白激酶的结构预测和功能分析被引量：3: 2008年; STN7和STN8蛋白激酶分别参与了LHCⅡ蛋白和PSⅡ核心蛋白的磷酸化。作者用折叠识别的方法建立了拟南芥蛋白激酶STN7和STN8核心结构域的三维结构,同时结合其他生物信息学方法对STN7和STN8蛋白的结构和作用机制进行了探讨,选择特异位点合成多肽,并制备抗体。结果表明STN7和STN8蛋白激酶活性区域的电荷和形状互补性决定了两者作用底物蛋白的差异,蛋白印迹结果显示分别制备得到了STN7特异抗体和STN8特异抗体,证实结构预测的正确。; 胡源杜林方蒋佳宏; 关键词：蛋白磷酸化

小鼠TAp63γ及两种突变体的原核表达、纯化和DNA结合活性: 2008年; 采用PCR扩增法得到小鼠TAp63γ野生型及两种缺失突变体的cDNA,3种cDNA与表达载体pGEX-2TK重组构建成GST融合表达质粒并转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导了小鼠TAp63γ野生型及两种缺失突变体的可溶性表达。诱导表达的菌液经离心收集菌体、超声破碎及Triton X-100增溶后获得可溶性表达蛋白粗提液。利用Glutathione Sepharose 4 Fast Flow亲合层析纯化出电泳均一的3种GST融合蛋白。凝胶滞留分析证实仅野生型小鼠TAp63γ蛋白能特异结合p53靶序列,经序列比对及同源建模分析,表明小鼠TAp63γDBD结合区的完整性、关键氨基酸的保守性及三维结构的相似性可能是其DNA结合活性所必需的。; 严君喜黄新河杜林方Zhi-Xiong Jim Xiao; 关键词：融合蛋白缺失突变原核表达同源建模

拟南芥TAK蛋白激酶的结构预测与功能分析被引量：3: 2009年; TAK1、TAK2和TAK3属于TAK蛋白激酶家族,由拟南芥核基因编码,其中TAK1参与了主要捕光色素复合物LHCⅡ蛋白磷酸化调控与光系统的状态转移.本文使用生物信息学手段对TAK1、TAK2和TAK3蛋白进行了较为系统的分析,发现TAK1、TAK2和TAK3为单次跨膜蛋白,具有保守的激酶活性域、疏水性强的N端跨越类囊体膜、亲水性高的C端处于基质中等特点.在PDB中找到了不少与TAK1、TAK2和TAK3同源性大于30%的蛋白序列,其中大部分也带有酪氨酸激酶保守域,使用同源建模的方法,建立了拟南芥蛋白激酶TAKs核心结构域的三维结构,围绕蛋白激酶的结构和作用机制关系进行了探讨,设计出多肽抗体,并进行蛋白印迹检测抗体的专一性,为TAKs蛋白激酶进一步的功能研究奠定了基础.; 蒋佳宏王东胡源杜林方; 关键词：磷酸化 LHCII 同源建模

温度对拟南芥STN7激酶表达及LHCⅡ蛋白磷酸化的影响: 2008年; 拟南芥STN7蛋白激酶参与了LHCⅡ蛋白的磷酸化和状态转换过程.本研究根据STN7激酶的蛋白序列,合成了一段含11个氨基酸的亲水肽段,与牛血清蛋白BSA偶联后,免疫家兔制备得到合成多肽的抗体,免疫双扩散和Western blot检测表明该多肽抗体效价和特异性较高.借助该多肽抗体、磷酸化抗体和低温(77K)荧光,研究了温度对拟南芥LHCⅡ蛋白的磷酸化、状态转换和STN7激酶表达的影响.结果表明,温度不仅调节LHCⅡ蛋白的磷酸化水平,而且还调节STN7激酶的表达水平.另外,LHCⅡ蛋白的磷酸化随温度的变化趋势与STN7激酶表达量的变化趋势相对一致,并且与状态转换密切相关,为LHCⅡ蛋白磷酸化及STN7激酶表达调控机理研究提供了有用的信息.; 胡源高秀蒋佳宏冉艳杜林方; 关键词：合成多肽温度影响

TMV感染烟草叶片类囊体膜对热胁迫更敏感: 2010年; 分别利用吸收光谱、荧光发射光谱、温和电泳和SDS-PAGE的方法分析比较热胁迫(35～65℃)对TMV感染或未感染TMV的烟草叶片类囊体膜结构和功能的影响.结果表明,未感染TMV的叶片类囊体膜可见光区吸收峰强度在25～45℃温度范围内随处理温度升高而增加,而TMV感染的几乎没有变化;未感染TMV的叶片类囊体膜叶绿素a荧光发射峰强度也随处理温度显著变化,35或45℃时荧光峰强度分别降低了19.5%和37%,65℃时减少到23.3%,而TMV感染的也显著降低.温和电泳和SDS-PAGE结果表明,热胁迫均引起感染TMV或未感染TMV的叶片类囊体膜色素蛋白发生明显变化,如游离色素叶绿素增多,光系统Ⅱ和I复合体解聚成单体,类囊体膜上的重要功能蛋白含量减少,产生聚合物,尤其经TMV感染引发的该变化更加明显.说明TMV感染烟草提高了类囊体膜对热胁迫的敏感性.; 黄搏斡科孙婧万波杜林方; 关键词：烟草花叶病毒类囊体膜热胁迫色素蛋白

利用Imaging-PAM研究莱茵衣藻对环境变化的响应被引量：4: 2010年; 本文介绍了Imaging-PAM-M-Series调制叶绿素荧光成像技术在莱茵衣藻活体叶绿素荧光检测中的应用。该方法利用CCD对藻体直接成像,可同时检测多个样品。后期分析可获得图像中任意区域的初始荧光产量(Fo)、充分暗适应后PSII的最大光化学效率(Fv/Fm)、PSII光化学能量转化的有效量子产量[Y(II)]、光化学淬灭系数(qP)、非光化学淬灭系数(NPQ)等指标。文章以敌草隆[3-(3,4-dichlorophenyl)-1,1-dimethylurea,DCMU]和没食子酸丙酯(propyl gallate,PG)对莱茵衣藻野生型及其抗DCMU突变体的影响为例,说明该技术在莱茵衣藻研究中是可靠的,具有简单、快速、灵敏等特点。; 段晓琼唐秋菊褚胜利杜林方; 关键词：莱茵衣藻叶绿素荧光

hPin1原核表达、纯化及热稳定性研究: 2007年; 利用E．coli BL21原核表达，纯化得到了His-hPin1融合蛋白，并研究了它的热稳定性．在中性条件下进行不同温度处理，SDS-PAGE分析表明，低于40℃处理不会影响His-hPin1的溶解性，50～100℃处理会使其部分变性而沉淀．荧光发射光谱研究表明，未处理的His-hPin1具有339nm的荧光发射峰；热处理使荧光发射峰的位置变化，低于40℃处理对His—hPin1的荧光强度影响较小，50～100℃热处理使HiS-hPin1的荧光强度明显降低．圆二色谱研究表明，热处理对His-hPin1的二级结构有影响，引起α-螺旋含量的明显减少，而无规卷曲增加．以上数据表明hPin1是一个相对热稳定的蛋白．; 王敬章刘鑫惠心娣黄瑜黄新河杜林方; 关键词：原核表达热稳定性荧光光谱圆二色谱

烟草病程相关蛋白PR-1a的三维模型和荧光光谱被引量：5: 2008年; 利用同源模建和分子动力学模拟方法搭建了烟草病程相关蛋白PR-1a的三维结构,在此基础上预测出PR-1a具有2个可能的活性位点,进一步分析PR-1家族特异保守序列,结果显示位点1的可能性更大.利用蛋白质内源荧光为探针,对分离的重组表达PR-1a蛋白进行了热稳定性研究.低于60℃处理,PR-1a蛋白内源荧光只略微降低;70℃处理30min引起PR-1a蛋白内源荧光明显降低,结果显示,PR-1a中色氨酸残基主要处于蛋白质分子内部,这与三维结构模型预测结果相符.; 李佳郑清川杜林方; 关键词：病程相关蛋白分子动力学同源模建荧光发射光谱

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教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-04-0861)

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