国家自然科学基金(31272129)
- 作品数：16 被引量：68H指数：5
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- 相关机构：石河子大学西南大学新疆农业科学院更多>>
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- 小白杏自交不亲和S-RNase基因RNAi表达载体的构建及遗传转化
- 2016年
- 为了应用RNAi技术调控杏自交不亲和性状,根据自交不亲和S66-RNase基因序列(Gen Bank登录中)设计特异引物,通过RT-PCR扩增S66-RNase基因(Gen Bank登录中)高变区及下游(63 bp)作为靶基因,构建RNAi表达载体的ihp RNA。以植物表达载体p CAMBIA为骨架载体,利用农杆菌介导的方法转化本氏烟,利用子房转化法转化小白杏。结果显示:获得了长度为439 bp的ihp RNA。表达载体酶切检验表明S66-RNase基因的RNAi表达载体构建和转入农杆菌LBA4404成功。通过抗性筛选和GUS染色检测,获得了16株阳性植株。结论:获得转基因烟草植株证明了本研究构建的RNAi植物表达载体有效,为诱导杏S-RNase基因转录后基因沉默、获得自交亲和的杏提供参考。
- 刘小芳冯建荣刘海楠罗明郭明星谢晓婷
- 关键词：S-RNASE基因烟草
- 10个苹果品种果实中酚类物质与褐变度分析被引量：11
- 2016年
- 【目的】研究苹果果实酚类物质组成与果实褐变的关系,建立测定苹果汁中主要酚类物质的高效液相色谱方法。【方法】选取10个苹果品种,采用Folin-C法,测定总多酚含量,并检测果肉褐变度及抗坏血酸过氧化物酶活性。采用高效液相色谱方法,测定苹果汁中表儿茶素、儿茶素、绿原酸、咖啡酸、香草醛、对香豆酸、根皮素7种酚类物质含量。【结果】黄魁的褐变度以及总酚含量相对较高,吉早红、寒富、瑞林的褐变度以及总酚含量较低;表儿茶素、儿茶素及绿原酸是苹果果肉中含量相对较高。果实的褐变度与总酚、表儿茶素、儿茶素及绿原酸含量呈显著正相关。【结论】寒富、瑞林、吉早红的果实总酚含量相对较低,褐变度较低;果肉中总酚、表儿茶素、儿茶素及绿原酸对果实褐变程度影响较大。
- 李淑玲陈笑笑赵宝龙樊新民冯建荣
- 关键词：苹果果肉褐变
- 库尔勒香梨组织培养的研究被引量：13
- 2016年
- 香梨果实肉质细腻,酸甜可口,是我国重要的出口创汇农产品之一。目前,香梨普遍存在坐果率低、产量不稳定的问题,通过组织培养进行遗传转化改良性状是当前果树高效育种的重要策略。本试验以库尔勒香梨茎段萌发的嫩芽为材料,通过离体组织培养,研究0.1%HgCl_2溶液消毒时间对外植体灭菌效果和褐化的影响,并探讨了适宜的增殖培养基和生根培养基配方。结果表明,库尔勒香梨组织培养过程中,0.1%HgCl_2消毒的适宜时间为5 min;适宜的增殖培养基为MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA+1.5 mg/L GA3;适宜的生根培养基为1/2MS+0.05 g/L AC+1.0 mg/L IBA。
- 刘小芳冯建荣梁晓桐吕文娟李文慧樊新民
- 关键词：库尔勒香梨消毒时间增殖
- '小白杏'自交不亲和SFB基因的克隆及其RNAi表达载体的构建
- '小白杏'(Prunus armeniaca L.'Xiaobaixing')是起源于新疆的著名杏品种之一,早熟且具有良好的外观和内在品质,其自交不亲和性极大地影响了产量和经济价值.目前对...
- 刘海楠冯建荣罗明刘小芳李文慧白茹
- 关键词：自交不亲和
- ‘小白杏’自交不亲和SFB基因RNAi表达载体的构建被引量：2
- 2016年
- 【目的】应用RNA干扰(RNAi)技术在分子水平调控杏自交不亲和性状,为培育自交亲和杏品种奠定基础。【方法】基于南疆自交不亲和杏品种‘小白杏’(Prunus armeniaca‘Xiaobaixing’)花粉决定子SFB(S-haplotype-specific Fbox protein)基因3’端c DNA全长序列,选取SFB基因变异区上游距起始密码子61 bp处、大小为29 bp的片段作为干扰序列,棉花基因组DNA 242 bp的序列作为间隔片段,利用融合PCR(Fusion PCR)构建SFB基因发卡结构(intron-containing hairpin RNA,ihp RNA),再酶切连接到植物表达载体p CAMBIA-35S-MCS-NOS-NPTII上,构建SFB基因RNAi表达载体;用冻融转化法将重组质粒转化至农杆菌菌株(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404中。【结果】测序结果表明臂长29 bp、茎环242 bp的SFB基因ihp RNA结构融合成功,双酶切检验和PCR验证结果表明,该结构正确地插入p CAMBIA-35S-MCS-NOS-NPTII的启动子和终止子之间,说明SFB基因的RNAi表达载体p CAMBIA-RNAi-SFB构建成功;PCR验证和测序结果也表明重组质粒已经成功转入农杆菌LBA4404中。【结论】研究结果表明,应用融合PCR结合酶切连接的方法构建SFB基因的RNAi表达载体是可行的,为RNAi技术在果树自交不亲和性状改良上的应用创造了条件。
- 刘海楠冯建荣罗明刘小芳李文慧白茹
- 关键词：自交不亲和
- 库尔勒香梨离体叶片再生体系的建立
- 建立并优化库尔勒香梨的再生体系,以期为梨的遗传转化研究奠定基础。以库尔勒香梨离体培养的继代30 d左右的无菌苗叶片为材料,1/2MS为基本培养基,用TDZ(1.0 mg·L-1)与IBA(0.30.9 mg·L-1)或N...
- 钟颖冯建荣任欢喜张秀抗许竹叶
- 关键词：库尔勒香梨愈伤组织不定芽
- 文献传递
- 2个中亚杏S-RNase基因全长的克隆与序列分析被引量：4
- 2015年
- 【目的】克隆中亚杏(Prunus armeniaca)品种自交不亲和花柱S-RNase基因全长序列,为分子手段调控杏自交不亲和性状奠定基础。【方法】以新疆栽培杏品种‘索格佳娜丽’和‘赛买提’为试材,利用RT-PCR克隆2个品种的花柱SRNase基因c DNA片段,RACE技术进行c DNA全长克隆,采用BLAST进行序列比对,Protparam软件分析2个基因的编码蛋白特性,MEGA 5.0构建进化树。【结果】从‘索格佳娜丽’中克隆了S_(52)-RNase(KF951503)基因,从‘赛买提’中克隆了一个新的S_(53)-RNase(KF975455)基因DNA和c DNA全长序列。S_(52)-RNase的DNA全长2 200 bp,c DNA全长765 bp,ORF(开放阅读框)长681 bp,编码226个氨基酸;S_(53)-RNase的DNA全长1 664 bp,c DNA全长907 bp,ORF长732 bp,编码242个氨基酸。BLASTP比对显示:这2个基因都具有保守的RNase-T2基因结构,属于RNase-T2家族。预测相对分子质量分别为26.5 ku和27.5 ku,等电点为9.36和9.03,都属于亲水性蛋白。进化分析表明,S_(52)与李(Prunus salicina,S_7)、S_(53)与大岛樱(Prunus speciosa,S_(13))亲缘关系最近,S_(52)和S_(53)处在2个不同的分支上,表现出较高的序列多态性,表明2个基因亲缘关系较远。【结论】获得了2个中亚杏品种自交不亲和花柱S-RNase基因全长序列。
- 李亚兰刘小芳刘海楠李文慧冯建荣
- 关键词：自交不亲和S-RNASE基因RACE
- ‘小白杏’自交不亲和SFB基因的克隆及其表达载体的构建
- 2015年
- 【目的】利用基因工程技术改良杏自交不亲和性状,为培育自交亲和杏品种奠定基础。【方法】以新疆自交不亲和杏品种‘小白杏’(Prunus armeniaca L.‘Xiaobaixing’)的花粉为材料,通过RT-PCR(Reverse Transcription PCR)和3’RACE(Rapid Amplification of c DNA Ends)技术克隆SFB基因(S-haplotype-specific F-box protein)片段。以克隆载体p MD19-T为基础,结合p BS-T上的酶切位点,利用酶切连接的方法将SFB基因的ORF框正向重组到表达载体p CAMBIA-35S-MCS-NOS-NPTII的Kpn I和Sac I酶切位点之间,构建SFB基因正义表达载体p CAMBIA-S-SFB;将SFB基因的ORF框反向重组到表达载体的Kpn I和Sal I酶切位点之间,构建SFB基因反义表达载体p CAMBIA-A-SFB;用电击转化法将重组质粒转化至农杆菌菌株(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404中。【结果】通过RT-PCR和RACE技术获得了1136 bp SFB基因片段(Gen Bank登录中),其中含912 bp ORF框(Open Reading Frame),由它推导的氨基酸序列与蔷薇科SFB基因高度同源,具有F-box结构域、2个变异区和2个高变区的完整结构;表达载体酶切检验结果表明,SFB基因的ORF框正确地插入p CAMBIA-35S-MCS-NOS-NPTII的启动子和终止子之间,表明SFB基因的正、反义表达载体构建成功;特异引物PCR验证结果也表明重组质粒已经成功转入农杆菌LBA4404中。【结论】研究的结果为利用基因工程技术改良杏自交不亲和性状、培育自交亲和杏品种的遗传转化提供了载体。
- 刘海楠冯建荣李文慧罗明刘小芳孙军利
- 关键词：自交不亲和
- 杏新疆中亚生态群品种果实和叶片形态特征相关性分析
- 了解杏新疆中亚生态群品种果实和叶片的形态特性及二者间的相关性,可为新疆中亚生态群品种群的研究和新品种选育提供理论依据。试验地处于天山南麓,塔里木盆地北缘,为暖温带大陆性干旱气候。以新疆轮台县新疆农业科学院轮台果树资源圃保...
- 徐乐冯建荣李文慧
- 关键词：果实叶片
- 文献传递
- ‘小白杏’诱导愈伤组织及不定芽体系的优化被引量：2
- 2017年
- 为建立快速繁殖离体培养再生体系并为遗传转化奠定基础,本研究以‘小白杏’胚和叶片为材料,探讨了氯化汞和次氯酸钠消毒的方法和时间对种子和种胚的影响,2,4-D(0.5,1.0,1.5 mg/L)、ZT(0.5,1.0,1.5 mg/L)和TDZ(1.0,2.0,3.0 mg/L)浓度配比对‘小白杏’胚诱导愈伤组织再分化不定芽的作用,及2,4-D(0.5,1.0 mg/L)、IBA(0.5,1.0 mg/L)、NAA(0.5,1.0 mg/L)浓度配比对‘小白杏’叶片诱导愈伤组织再分化不定芽的作用。结果表明:使用10%的次氯酸钠消毒10 min,种胚污染率和死亡率最低,分别为2.6%、0.7%,存活率最高,为96.7%;在3/4MS+2.0 mg/L TDZ+1.0 mg/L 2,4-D处理下,胚诱导愈伤组织形成率和不定芽诱导率最高,分别为98%、96%;在3/4MS+2.0 mg/L AgNO_3+1.0 mg/L ZT+2.0 mg/L TDZ+1.0mg/L IBA处理下,叶片诱导愈伤组织形成率和不定芽诱导率最高,分别为96%、93%。综合来看,胚诱导愈伤组织再分化形成不定芽的诱导率优于叶片,种子和种胚消毒的最佳方案是10%的次氯酸钠消毒10 min;胚诱导愈伤组织再分化形成不定芽最佳配方是3/4MS+2.0 mg/L TDZ+1.0 mg/L 2,4-D;叶片诱导愈伤组织再分化形成不定芽的最佳配方是3/4MS+2.0 mg/L AgNO_3+1.0 mg/L ZT+2.0 mg/L TDZ+1.0 mg/L IBA。
- 谢晓婷郭明星许竹叶代丽娟郝风顺冯建荣
- 关键词：叶片愈伤组织不定芽
