福建省自然科学基金(2007J0269)
- 作品数：5 被引量：14H指数：3
- 相关作者：鲁开化林菊丽王彪单秀英庄福连更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院福建医科大学更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金福建省教育厅科技项目卫生部科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 促血管生成素2及其受体Tie2基因RNA干扰表达载体的构建与鉴定被引量：7
- 2009年
- 目的构建促血管生成素2(Ang-2)及其受体Tie2基因的RNA干扰(RNAi)表达载体。方法以Ang-2、Tie2的mRNA已知序列为靶点,化学合成能编码针对Ang-2、Tie2基因的短发夹RNA(shRNA)序列的寡核苷酸各2对,退火处理后克隆到pSilencer1.0-U6-siRNA表达载体的U6RNA聚合酶Ⅲ启动子的下游,构建重组质粒pSliencer-1.0-U6-Ang-2/Tie2-siRNA。结果将与目的片段相符的双链shRNA和线性化的pSilencer1.0-U6-siRNA质粒连接后,经限制性内切酶HindⅢ酶切电泳及测序分析证实,2条重组质粒载体构建正确,无任何碱基突变。结论成功构建pSilencer1.0-U6-Ang-2/Tie2-siRNA重组质粒各2条,为进一步研究其对血管生成的作用打下基础。
- 王彪单秀英林菊丽庄福连鲁开化
- 关键词：RNA干扰促血管生成素2重组质粒
- pSilencer 1.0-U6-Ang2/Tie2-siRNA重组质粒的构建及其在体外人脐静脉内皮细胞中抑制Ang2/Tie2基因的表达
- 2011年
- 目的探讨应用RNA干扰(RNAi)技术抑制Ang2、Tie2基因的表达情况,为进一步研究其在体外抑制血管生成以及抑制肿瘤血管生成的动物实验研究奠定基础。方法构建pSilencer 1.0-U6-Ang2/Tie2-siRNA重组质粒各2条并予以鉴定。用pSilencer 1.0-U6-Ang2/Tie2-siRNA重组质粒转染人脐静脉内皮细胞(HUVECs),采用免疫细胞化学染色和RT-PCR方法检测各组HUVECs中Ang2及Tie2的蛋白及mRNA的表达状况。结果成功构建pSilencer 1.0-U6-Ang2/Tie2-siRNA重组质粒各2条,用其转染HUVECs后,免疫细胞化学染色和RT-PCR检测结果显示,Ang2、Tie2在蛋白和mRNA的表达水平均受到明显抑制(P<0.05),并且siRNA的2条重组质粒之间均差异无统计学意义(P>0.05)。结论 pSilencer1.0-U6-Ang2/Tie2-siRNA在体外能够抑制HUVECs的Ang2和Tie2的蛋白及mRNA的表达。
- 王彪郭国祥林菊丽单秀英张声鲁开化
- 关键词：促血管生成素2质粒载体脐静脉内皮细胞
- 体外血管生成三维培养模型的构建被引量：9
- 2009年
- 目的建立脐静脉内皮细胞(HUVECs)的体外血管生成的三维培养模型。方法以酶消化法获得以HUVECs为主的混合细胞悬液,经反复贴壁法分离纯化HUVECs,通过免疫细胞化学染色鉴定。采用夹心培养法构建HUVECs的体外血管生成三维培养模型。结果HUVECs在胶原凝胶之间,24 h左右血管样结构的分支之间相互沟通连接形成复杂的网状结构,2 d后凝胶内的细胞开始退化,3 d发现大部分细胞出现崩解。24 h凝胶经H-E染色可见细胞索及原始血管腔形成。结论成功建立体外血管生成的三维培养模型。夹心培养法是较为成熟的体外血管生成的三维培养方法,具有操作简便、三维血管样结构形成数量多、网络结构复杂等特点。
- 林菊丽王彪黄祖根吴正思鲁开化庄福连
- 关键词：内皮细胞细胞培养技术脐静脉
- Ang1、Ang2及Tie2在脐静脉内皮细胞的体外三维培养中的表达及意义被引量：2
- 2010年
- 目的探讨促血管生成素1、2及其受体(Ang1、Ang2及Tie2)在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外三维培养的血管生成中的作用。方法采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法检测10例体内HVUECs、体外二维培养的HVUECs和三维培养的血管样结构中Ang1、Ang2及Tie2的mRNA表达水平。结果体外三维培养的血管样结构中Ang2、Tie2的mRNA表达水平均高于体内HVUECs和体外二维培养的HVUECs,差异有显著性(P<0.05);各组中Ang1的mRNA表达水平相比差异无显著性(P>0.05)。结论Ang/Tie2体系在体外血管生成中可能起重要的作用。
- 吴正思单秀英王彪林菊丽鲁开化庄福连
- 关键词：TIE2人脐静脉内皮细胞
- Ang2、Tie2基因的RNA干扰及其在体外抑制血管生成的作用被引量：6
- 2010年
- 目的:探讨应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默Ang2、Tie2基因及其在体外抑制血管生成的研究,为将来进一步进行抑制肿瘤血管生成的动物实验研究奠定基础,为肿瘤的基因治疗提供实验依据。方法:用pSilencer1.0-U6-Ang2/Tie2-siRNA重组质粒转染人脐静脉内皮细胞(HUVECs),采用RT-PCR检测各组HUVECsAng2、Tie2的mRNA表达状况。应用体外血管生成的三维培养模型研究转染后的HUVECs在体外形成血管样结构的情况。结果:pSilencer1.0-U6-Ang2/Tie2-siRNA重组质粒转染HUVECs后,RT-PCR检测结果显示:Ang2、Tie2基因mRNA的表达水平均受到明显抑制(P<0.05),并且siRNA的2条重组质粒之间均无明显差别(P>0.05)。转染后的HUVECs在体外三维培养模型中血管样结构形成的数量和长度均明显减少(P<0.05),表明血管生成受到明显抑制。结论:Ang2-siRNA、Tie2-siRNA能够抑制HUVECs中Ang2和Tie2的mRNA表达,从而在体外抑制血管生成。
- 王彪刘照亮林菊丽单秀英王美水张声鲁开化
- 关键词：RNAI血管生成
