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VPA和As2O3对Molt-4细胞的协同作用及可能机制被引量：2: 2008年; 本研究探讨丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)单药或与亚砷酸(arsenie trioxide,As2O3)联用对人急性T细胞白血病细胞株Molt-4增殖活力的抑制、去甲基化作用及其可能机制。用MTT法检测药物对细胞增殖的抑制作用,利用金氏公式观察两药联用体外抗癌的协同作用。采用半巢式甲基化特异PCR(hnMS-PCR)检测p15INK4B基因甲基化,RT-PCR方法检测p15基因、DNA甲基转移酶DNMT-1、DNMT3A、DNMT3B的表达。结果表明:VPA和As2O3均可明显抑制细胞增殖,二者联用在体外有相加作用(Q值均大于0.85),在5mmol/L VPA与10μmol/L As2O3联用时抑制率达(70.31±2.54)%。Molt-4细胞p15基因因高甲基化而失表达,经VPA和As2O3联合作用后p15基因甲基化程度明显下降,p15基因表达增强,两药联用时DNMT-1、DNMT-3A、DNMT3BmRNA的表达都有下降。结论:VPA可能通过抑制DNA甲基转移酶DNMT-1和(或)DNMT3B使p15INK4B基因去甲基化,使p15基因表达上调,恢复其活性。VPA和As2O3均可明显抑制Mol-4细胞增殖,两药合用有协同相加作用,可减少砷剂的副作用。; 叶宝国林福安沈建箴范丽萍林聪猛; 关键词：丙戊酸钠 AS2O3 MOLT-4细胞甲基转移酶 P15基因甲基化

半巢式甲基化特异性聚合酶链反应对肿瘤细胞株p15基因甲基化或缺失状态的检测被引量：12: 2007年; 本研究分析多种恶性肿瘤细胞株的p15基因甲基化或缺失状态,阐明p15基因甲基化或缺失在肿瘤发生发展中的作用。运用半巢式甲基化特异性聚合酶链反应(hemi-nested methylation specific polymerase chain reaction,hn-MSP)分析20种恶性肿瘤细胞株和正常人单个核细胞或细胞株的p15基因甲基化及缺失状态,并评价该方法的敏感性和特异性。结果表明:在所有的细胞中,Molt-4、Raji、KG1、CA46、SW480、NCE、SMMC-7221、NCI-H446细胞为部分甲基化,hn-MSP检测p15基因甲基化敏感性可达到1×10-5。正常人单个核细胞、HL-60、HeLa、HepG2、293、SGC7901、U266、CEM细胞则为p15非甲基化,而K562、NB4、GMC、Jurkat似乎显现p15基因缺失或突变。结论:p15基因甲基化或缺失在多种肿瘤,特别在恶性血液病中有较高的发生率,且对疾病的进展及预后有密切的关系,hn-MSP具有较高的敏感性和特异性,值得在临床推广应用。; 林福安叶宝国沈建箴周华蓉傅海英范丽萍; 关键词：P15INK4B 基因甲基化基因缺失

半巢式甲基化特异性PCR在急性淋巴细胞白血病患者p15基因甲基化检测中的应用被引量：1: 2012年; 目的探讨半巢式甲基化特异性PCR（hn—MSP）的特性并了解p15基因甲基化和缺失在急性淋巴细胞白血病（ALL）发病中可能起到的作用。方法运用hn—MSP方法和基因组硫化修饰PCR（BSP）后直接测序方法，分析在25例初诊或复发不同阶段ALL患者以及部分恶性血液病细胞株中p15基因的甲基化和缺失状态，以10名健康者或非恶性血液病患者为对照组。以Molt-4细胞株为阳性对照，以对照组单个核细胞为阴性对照，分析hn-MSP方法的敏感性和特异性。结果hn-MSP产物克隆测序结果与BSP结果一致，hn—MSP检测p15基因甲基化敏感性可达到1×10-5。25例ALL患者p15基因甲基化发生率为68．0％（17例）；25例ALL患者中3例p15基因外显子1缺失。对照组p15基因无甲基化或缺失。结论p15基因甲基化状态在ALL患者中有较高的检出率，hn—MSP对分析p15基因甲基化状态具有较高的特异性和敏感性。; 林福安叶宝国沈建箴林聪猛范丽萍周华蓉傅海英; 关键词：甲基化基因缺失 MOLT-4 细胞株

半巢式MSP在急性白血病患者p15基因甲基化检测中的应用: 2007年; 传统的观点认为，基因的缺失和突变是基因失活的主要方式，最近研究显示，基因异常甲基化所导致的基因沉默亦是基因失活的方式之一。在多种恶性血液病中，p15基因发生异常的主要途径是基因异常甲基化和缺失。目前国内文献上p15基因甲基化的检测方法主要集中在甲基化敏感限制性酶切和Herman等总结的甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）方法。我们通过优化MSP方法，设计了p15基因的半巢式-MSP（Hn-MSP）引物对85例急性白血病（AL）患者进行了p15甲基化状态的检测。; 林福安叶宝国沈建箴范丽萍周华蓉傅海英林聪猛喻爱芳; 关键词：P15基因甲基化急性白血病患者甲基化检测半巢式甲基化特异性聚合酶链反应

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漳州市科技计划项目(Z04053)