国家自然科学基金(30270304)
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
- 相关作者：周元聪宋慧舒雨雁张学荣江涛更多>>
- 相关机构：广西医科大学中国科学院上海生命科学研究院中国科学院更多>>
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- 广西眼镜蛇神经生长因子的克隆及序列分析
- 2007年
- 目的:扩增广西眼镜蛇神经生长因子(NGF)的全长基因并进行序列分析。方法:应用聚合酶链反应技术,以广西眼镜蛇cDNA为模板,扩增出编码NGF的全长基因,并克隆至pMD18-T载体中进行基因测序。结果:所得序列与Genbank提供的序列(M61180)对比显示,广西眼镜蛇prepro-NGF与Naja kaouthia(monocled cobra)、Bungarus multicinctus、mouse、人的NGF同源性分别为99%、91%、66%、68%,将不同氨基酸相同的化学性质计算在内,同源性更高。结论:成功地获得了广西眼镜蛇NGF的全长基因,且序列与已知序列高度一致。
- 宋慧张学荣周元聪江涛舒雨雁
- 关键词：神经生长因子克隆聚合酶链反应DNA序列分析
- 广西眼镜蛇蛇毒神经生长因子在大肠杆菌中的表达被引量：7
- 2007年
- 目的采用基因工程技术,在大肠杆菌(E.coli)中表达广西眼镜蛇(黑眼镜蛇)蛇毒神经生长因子(NGF)成熟蛋白并检测其生物活性。方法将天然广西眼镜蛇蛇毒的NGF蛋白基因克隆至融合表达载体pET-40b(+)中,以C端融合了6个组氨酸的形式在E.coli BL21(DE3)通过异丙基硫代半乳糖苷诱导表达NGF蛋白。超声破菌后,将上清液经Ni^(2+)-NTA柱纯化,收集并冻干NGF融合蛋白,用蛋白印迹法分析其NGF抗原活性,并通过促PC12细胞生长法观察其生物活性。结果经蛋白印迹分析可知在38 ku处的条带具有NGF抗原活性。加入天然蛇毒NGF,生长轴突的PC12细胞为(83±3)%,重组品为(21±3)%,表明经纯化的融合蛋白具有NGF生物活力,但活性弱于天然蛇毒NGF。结论在大肠杆菌中可以表达出有活性的蛇毒NGF蛋白。
- 宋慧张学荣周元聪江涛舒雨雁
- 关键词：眼镜蛇蛇毒神经生长因子蛋白表达
- 广西眼镜蛇毒中Natrin的克隆及在E.coli中的表达
- 2012年
- 目的采用基因工程技术,在大肠杆菌中表达广西眼镜蛇毒中Natrin成熟蛋白。方法将来源于广西眼镜蛇毒的Natrin蛋白的基因克隆至融合表达载体pMAL-c2x中,以N端融合了麦芽糖结合蛋白的形式在大肠杆菌BL21(DE3)通过异丙基硫代半乳糖苷诱导表达Natrin蛋白。超声破菌后,将上清液经Amylose树脂柱上纯化后,收集并冻干Natrin融合蛋白,利用蛋白印迹分析其是否有Natrin抗原活性。结果经蛋白印迹分析可知在50 kD处的条带具有Natrin抗原活性。结论在大肠杆菌中可以表达出Natrin蛋白。
- 宋慧马兴才周燕焦杨周元聪舒雨雁
- 关键词：蛇毒蛋白表达
- 广西眼镜蛇蛇毒神经生长因子在大肠杆菌中的表达
- 目的采用基因工程技术,在大肠杆菌 (E．coli)中表达广西眼镜蛇(黑眼镜蛇)蛇毒神经生长因子(NGF)成熟蛋白并检测其生物活性。方法将天然广西眼镜蛇蛇毒的 NGF 蛋白基因克隆至融合表达载体 pET-40b(+)中,以...
- 宋慧张学荣周元聪江涛舒雨雁
- 关键词：眼镜蛇蛇毒神经生长因子蛋白表达
