国家自然科学基金(30971136)
- 作品数：13 被引量：62H指数：6
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- 反义miR-21增加U251脑胶质瘤细胞对5-氟尿嘧啶化疗敏感性的研究被引量：8
- 2010年
- 目的探讨as—miR-21增加U251脑胶质瘤细胞对5-FU化疗敏感性的效果。方法透析法制备5-FU／PAMAM载体，透射电镜观察形态，紫外分光光度计检测载药率和包封率；流式细胞仪检测转染效率并分析细胞凋亡比例；MTT法检测共转染后细胞生长抑制效果；免疫荧光检测Ki67和Bcl-2蛋白表达；Transwell检测细胞侵袭能力变化。结果纳米微粒形态规整；平均包封率为66．21％，平均载药量为31．77％；PAMAM转染效率为70．53％；共转染组细胞生长显著抑制（F=273．345，P=0．000）；凋亡比例升高（F=43．21，P=0．000），Ki67、Bcl-2表达均下调；细胞侵袭能力显著下降。结论PAMAM可以有效同载as—miR-21和5-FU，且更加有效地抑制U251脑胶质瘤细胞的体外生长并增加对5-FU的化疗敏感性。
- 任玉周旋原续波许鹏王广秀贾志凡张安玲韩磊浦佩玉康春生
- 关键词：PAMAM
- miRNA-21与肿瘤相关研究新进展被引量：15
- 2011年
- 小RNA(microRNA,miRNA)是近年发现的一类内源性非编码单链RNA,在转录后水平对基因表达发挥负调控作用,参与细胞生长、发育、凋亡等重要生物过程。研究发现miRNA-21在肿瘤的发生发展过程中扮演着非常重要的角色,在不同类型肿瘤中的表达均出现明显上升,与肿瘤细胞的增殖、侵袭、血管的生成和抗药性等生物学行为相关。本文将从miRNA-21的表达与定位、对靶基因的调控以及对miRNA-21的转录调控等方面进行综述。
- 杨旸康春生
- 关键词：MIRNA-21肿瘤信号通路转录
- miR-21调控人脑胶质瘤细胞侵袭能力的体外研究被引量：2
- 2010年
- 目的 探讨miR-21调控人脑胶质瘤细胞侵袭能力的体外机制。方法脂质体介导反义miR-21（AS-miR-211转染体外常规培养的U251细胞，同时设无义寡脱氧核苷酸（ODN）组和对照组。测定荧光素酶活性验证3组细胞中miR-21的表达，Matrigel基质生长实验检测U251细胞的生长情况，Transwell细胞体外迁移实验检测U251细胞的迁移能力，Westernblotting检测细胞侵袭相关蛋白局部粘着斑激酶（FAK）、基质金属蛋白酶9／2（MMP-9／21、人基质金属蛋白酶抑制因子1（TIMP-1）、微管蛋白α（Tubulin-α的表达，免疫荧光检测细胞Tubulin-a蛋白的形态。结果与对照组和无义ODN组比较，转染AS—miR-21组U251细胞miR-21表达水平降低，Matrigel基质生长实验显示转染AS—miR-21组U251细胞体外培养克隆平均直径较小，Transwell细胞体外迁移实验显示转染AS—miR-21组穿膜细胞数较少．Westernblotting结果显示转染AS-miR-21组U251细胞FAK、MMP-9／2表达较低，TIMP-1表达较高，差异均有统计学意义俨〈O．05）。Tubulin-ct的表达无明显变化，免疫荧光染色显示转染AS-miR-21组Tubulin-α蛋白形态扭曲。结论miR-21高表达可以促进U251胶质瘤细胞侵袭生长，提示miR-21可以作为基因治疗脑胶质瘤的候选靶点。
- 周旋任玉王广秀浦佩玉康春生
- 关键词：RNA干扰基因治疗
- 反义微小RNA-21寡核苷酸抑制Tb3.1人舌鳞状细胞癌增殖的体外研究被引量：6
- 2011年
- 目的 探讨反义微小RNA-21寡核苷酸（antisense oligonucleotide micro RNA-21,AS-miRNA-21）抑制Tb3.1人舌鳞状细胞癌增殖的效果和机制.方法 实验分3组,①空白对照组 ②无义寡核苷酸转染组 ③AS-miRNA-21转染组.寡核苷酸介导转染反义寡核苷酸敲低Tb3.1细胞miRNA-21表达.使用荧光实时定量聚合酶链反应（PCR）鉴定转染后Tb 3.1细胞miRNA-21表达水平 甲基噻唑基四唑（MTT）法检测转染后Tb 3.1细胞生存率 流式细胞术检测转染后Tb3.1早期凋亡 Matrigel基质生长实验检测转染后Tb 3.1细胞生长形成球形集落能力 Transwell体外迁移实验检测转染后Tb 3.1细胞迁移能力 蛋白质印迹法检测转染后Tb3.1细胞增殖核抗原（antigen KI-.67,Ki67）、B细胞淋巴瘤2（B cell lymphoma 2,Bcl-2）、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（phosphatase and tensin homolog,PTEN）、基质金属蛋白酶2、9（matrix metalloproteinase 2/9,MMP-2、MMP-9）和组织基质蛋白酶抑制因子蛋白1（tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP-1）蛋白表达.结果 荧光实时定量PCR显示转染后miRNA-21表达水平下调 转染第4天,AS-miRNA-21转染组肿瘤细胞生长速度[（53.43±11.83）%]低于其他两组[（91.32±8.02）%和100%]（F=27.02,P=0.00） 细胞凋亡率显著升高[（12.23±2.92）%,F=26.641,P=0.001] AS-miRNA-21转染组细胞生长不能形成球形克隆且通过Transwell小室聚碳酸酯膜的细胞数小于空白对照组（F=268.231,P=0.000） Ki67、Bcl-2、MMP-2和MMP-9蛋白表达下调,PTEN和TIMP-1蛋白表达上调.结论 敲低miRNA-21后Tb3.1人舌癌细胞增殖与侵袭能力被抑制,并为探索miRNA-21调控人舌癌发生机制提供实验依据.
- 陶英杰任玉董家斌张仑程俊萍周旋
- 关键词：舌肿瘤基因调节
- 基于文本挖掘识别胶质瘤调控网络的核心信号
- 恶性胶质瘤是人类最恶性、最具侵袭性的肿瘤之一,其内在机理仍没有阐明。随着生物医学研究的蓬勃发展,文本挖掘已成为为生物医学文献知识发现的新推动力。本研究采用文本挖掘胶质瘤相关基因,并针对这些基因进行GO(Gene Onto...
- 张军霞张安玲王颖毅史振东兰凤鸣韩磊浦佩玉康春生
- 关键词：胶质瘤文本挖掘基因信号
- 文献传递
- 靶向AKT1和COX-2的RNAi抑制U251胶质瘤细胞侵袭的体外实验被引量：3
- 2010年
- 目的应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术敲低恶性胶质瘤细胞系U251中AKT1和COX-2表达后,在体外对细胞侵袭转移的抑制作用,初步探讨其可能的作用机制。方法构建重组腺病毒载体rAd5-A-C同时搭载靶向AKT1和COX-2的shRNA干扰序列,将其转染至恶性胶质瘤细胞系U251细胞。Realtime PCR检测RNAi后目的基因mRNA的表达水平,Western Blot检测目的基因及MMP-2、MMP-9、TIMP-2的表达情况。酶联免疫吸附试验检测转染前后分泌到细胞外的MMP-2和MMP-9的浓度变化。划痕实验和Transwell实验评价肿瘤细胞转染前后的细胞侵袭能力的变化。结果rAd5-A-C转染组AKT1和COX-2的mRNA和蛋白表达均明显抑制;MMP-2、MMP-9表达下调,TIMP-2表达则上调。ELISA检测胞外MMP-2、MMP-9浓度明显减低;划痕实验显示细胞转移运动能力明显减弱,Transwell体外侵袭实验结果显示穿过细胞数明显减低(P<0.001)。结论重组腺病毒介导的RNAi技术可以序列特异性地抑制U251细胞AKT1和COX-2的表达,在体外对U251细胞侵袭转移产生明显抑制作用,可能成为恶性胶质瘤治疗的新策略。
- 王轩韩磊杨旸岳晓张安玲王广秀贾志凡浦佩玉申长虹康春生
- 关键词：恶性胶质瘤
- 反义miR-21通过RECK抑制胶质瘤细胞侵袭性生长的体内外研究被引量：4
- 2011年
- 目的 探讨胶质瘤细胞LN229中RECK作为miR-21的调控靶点,在胶质瘤侵袭性生长中的作用.方法 将反义miR-21（AS-miR-21）寡核苷酸转染至人脑胶质瘤细胞LN229中.Real-time PCR检测LN229细胞中miR-21的表达量.荧光素酶实验检测miR-21对RECK的调控关系.Transwell实验评价LN229细胞侵袭能力的变化,应用Western blot检测细胞内MMP2/9和RECK蛋白水平的变化,ELISA实验检测培养基中活性MMP2/9的表达量,动物实验评价体内条件下肿瘤侵袭性的变化.结果 Real-time PCR显示转染组中miR-21的表达量与对照组相比下调60%.荧光素酶实验证明RECK是miR-21的靶点.Transwell实验证实胶质瘤细胞侵袭能力下降,Western blot和ELISA实验证实MMP2/9表达降低,动物实验及免疫荧光反映肿瘤侵袭性生长受抑制.结论 反义miR-21通过上调RECK的表达而抑制恶性胶质瘤细胞的侵袭性生长.
- 兰凤鸣岳晓韩磊杨旸史振东张安玲任玉浦佩玉康春生
- 关键词：神经胶质瘤MIR-21RECK
- PI3K／AKT信号通过介导β-catenin通路的活性影响胶质瘤细胞的生长被引量：8
- 2012年
- 目的探讨P13K／AKT信号阻断后抑制胶质瘤细胞株LN229生长的分子机制。方法将溶解于DMSO的P13K抑制剂LY294002加到LN229细胞中，并设立对照组。应用Westernblot检测P—AKT的表达，MTT、细胞周期实验评价LY294002处理后细胞生长情况的变化，Transewell实验检测胶质瘤细胞侵袭能力的改变。TOP—FOP实验检测Wnt通路的活性，Westernblot检测加入LY294002后Wnt通路中重要蛋白的表达。结果Westernblot显示LY294002处理组P—AKT表达与对照组和DMSO组比较明显降低。MTT和Transewell实验证实加入LY294002后细胞的增殖侵袭能力降低，细胞周期实验显示G0／G1期比值增大，S期缩短。TOP—FOP实验说明LY294002处理组Wnt通路的活性较其他两组显著下降，Westernblot证明LN229细胞LY294002处理组中GSK3β、p-β-catenin表达升高，c—Myc、CyclinDl等β—catenin下游基因表达降低。结论PDK抑制剂LY294002可通过影响Wnt／β-catenin通路的活性而降低胶质瘤细胞的恶性表型。
- 兰凤鸣岳晓韩磊史振东杨旸邹建张安玲王广秀贾志凡浦佩玉康春生
- 关键词：PI3K抑制剂LY294002P-AKT
- β-catenin／Tcf-4转录调控AKT2基因表达促进人脑胶质瘤细胞恶性转化的研究被引量：1
- 2012年
- 目的探究胶质瘤中β—catenin／Tcf-4转录调控AKT2基因以促进其恶性表型转化的机制。方法CHIP—PCR及荧光素酶实验确立AKT2启动子区的Tcf-4结合位点及活性。阿司匹林（ASA）阻断13-catenin／Tcf-4转录复合物活性及恢复AKT2基因的表达后，流式细胞术检测细胞周期，AnnexinV检测凋亡及Transwell实验检测侵袭能力。结果CHIP—PCR表明，AKT2基因启动子区存在两个Tcf-4结合位点-349／-343bp（位点1）和-3491／-3497bp（位点2）。荧光素酶实验结果显示位点2的活性比位点1的强。抑制β—catenin／Tcf-4转录活性后，细胞周期阻滞于G0／G1期，侵袭能力下降；恢复AKT2的表达后，细胞S期比例增加，侵袭能力增强。结论β—catenin／Tcf-4可以直接转录调控AKT2来促进胶质瘤细胞的增殖和侵袭。
- 邹健张安玲王坤黄凯史振东韩磊浦佩玉康春生
- 关键词：AKT2神经胶质瘤转录调控
- RNA干扰技术联合抑制AKT1和COX-2表达对U251胶质瘤细胞增殖的影响
- 2010年
- 目的 探讨应用RNA干扰（RNAi）技术抑制U251恶性胶质瘤细胞株AKT1和COX-2表达后,在体外对U251细胞增殖的抑制作用.方法 构建靶向AKT1和COX-2的RNAi重组腺病毒表达载体（rAd-A＋C）转染至U251细胞.应用Realtime PCR检测AKT1和COX-2 mRNA水平的变化;应用Western blot检测AKT1和COX-2蛋白水平的变化,并对肿瘤细胞中相关功能蛋白的表达进行分析;应用MTr法和流式细胞术评价肿瘤细胞的增殖活性.结果 rAd-A＋C可显著抑制U251细胞AKT1和COX-2的表达;与对照组和无义序列处理组（rAd-HK）比较,Western blot分析结果显示下游相关因子PCNA、Cyclin D1表达下降,而p53表达上调;细胞周期分析结果表明rAd-A＋C处理组进入S期的细胞数较对照组减少了7.0%～7.8%,出现G0/G1期阻滞;MTT法分析显示rAd-A＋C处理组细胞生长抑制率＞58%.结论 靶向AKT1和COX-2的RNAi技术可显著抑制U251细胞AKT1和COX-2表达,在体外对U251细胞增殖活性产生明显抑制作用.因此,RNAi重组腺病毒表达载体介导的基因治疗可成为胶质瘤靶向治疗的新策略.
- 韩磊张安玲岳晓杨旸王广秀贾志凡浦佩玉康春生
- 关键词：神经胶质瘤AKT1RNA干扰增殖活性
