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江苏省卫生厅面上基金(Z200601)

作品数：3 被引量：15H指数：2
相关作者：陈丹潘世扬张丽霞高丽谢而付更多>>
相关机构：江苏省人民医院东南大学南京大学医学院附属鼓楼医院更多>>
发文基金：江苏省卫生厅面上基金江苏省科技基础设施建设计划项目江苏省卫生厅科技发展基金更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 3篇中文期刊文章

领域

  • 2篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 3篇甲基化
  • 2篇基因
  • 2篇APC
  • 2篇APC基因
  • 1篇血浆
  • 1篇血浆DNA
  • 1篇启动子
  • 1篇启动子甲基化
  • 1篇细胞
  • 1篇细胞株
  • 1篇芯片
  • 1篇模拟肺
  • 1篇结肠
  • 1篇肺癌
  • 1篇肺癌细胞
  • 1篇肺癌细胞株
  • 1篇癌患者
  • 1篇癌细胞
  • 1篇癌细胞株
  • 1篇5-AZA-...

机构

  • 3篇江苏省人民医...
  • 2篇东南大学
  • 1篇南京大学医学...

作者

  • 3篇张丽霞
  • 3篇潘世扬
  • 3篇陈丹
  • 2篇谢而付
  • 2篇张寄南
  • 2篇高丽
  • 2篇程璐
  • 2篇陆祖宏
  • 1篇黄珮珺
  • 1篇杨迪
  • 1篇王贤
  • 1篇束永前

传媒

  • 1篇临床检验杂志
  • 1篇癌症
  • 1篇生物医学工程...

年份

  • 1篇2008
  • 2篇2007
共 3 条 记 录，以下是 1-3
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排序方式：
肺癌细胞株APC基因启动子甲基化对其转录的影响被引量：10
2007年
背景与目的:抑癌基因家族性腺瘤样结肠息肉病易感基因(adenomatous polyposis coli,APC)启动子区的高甲基化在很多肿瘤中被发现,与这些肿瘤的发生发展相关。本实验室在肺癌患者肿瘤组织中检测到APC甲基化率达47%,为了研究其在肺癌细胞株中的甲基化情况,并进一步了解甲基化对其转录的影响,本研究检测了3株肺癌细胞的抑癌基因APC启动子甲基化状态及其对该基因转录水平的影响。方法:提取3株肺癌细胞株(肺腺癌细胞株SPC-A1、小细胞肺癌细胞株NCI-H446、大细胞肺癌细胞株NCI-H460)的DNA,以经转甲基处理和未做处理的脐带血DNA为阳性、阴性对照,亚硫酸氢盐化学修饰后,用甲基化特异性基因扩增(methylation specific-polymerase chain reaction,MSP)和甲基化基因芯片对APC基因启动子1ACpG岛甲基化进行研究,并用实时荧光定量PCR(real time-polymerase chain reaction)技术,以Sybr-GreenⅠ为荧光染料,β-actin基因为内参照,检测mRNA转录;对甲基化阳性的NCI-H460细胞,分别用1、5、10、15μmol/L的5′-杂氮-2'-脱氧胞嘧啶(5-aza-2-deoxycytidine,5-aza-dC)试剂进行脱甲基化,提取RNA,荧光定量检测其转录变化。结果:SPC-A1和NCI-H446细胞APC甲基化阴性,NCI-H460细胞APC甲基化阳性;甲基化芯片检测NCI-H460细胞在APC启动子1A5个CpG位点均存在甲基化(687、707、714、719、726),SPC-A1和NCI-H446甲基化阴性,荧光定量结果NCI-H460的APC转录较SPC-A1和NCI-H446有明显的下降,仅为二者平均的30.04%;经5-aza-dC脱甲基化作用后,NCI-H460细胞的APC表达增加了约5～10倍,其中10μmol/L浓度作用下,APC表达增加最多。结论:肺癌细胞株NCI-H460中存在APC基因高甲基化,5-aza-dC脱甲基化试剂可以激活其转录。
张丽霞潘世扬陈丹谢而付高丽束永前陆祖宏程璐杨迪张寄南
关键词：肺癌细胞株APCMSP5-AZA-DC
不同甲基化检测技术对模拟肺癌患者血浆中APC基因甲基化的检测被引量：7
2007年
目的研究模拟肺癌患者血浆DNA中APC基因甲基化最低检测限,确定不同甲基化检测技术在早期肺癌诊断中的价值。方法用普通甲基化特异性基因扩增(methylation specific PCR,MSP)方法检测肺癌细胞株NCI-H460细胞APC基因,以酚-氯仿经典方法提取NCI-H460细胞DNA,紫外分光光度计定量并以10倍稀释的浓度梯度依次投入相同的健康人血浆200μl中去,得到模拟肺癌患者血浆,利用磁珠核酸提取方法从模拟血浆样本中提取血浆DNA。对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰,并以Sybr-GreenⅠ为染料进行实时荧光定量MSP检测,同时进行普通MSP检测。结果NCI-H460细胞中的APC基因启动子1A区719位点存在甲基化,实时荧光定量MSP检测模拟肺癌患者血浆APC基因甲基化的最低检测限为在200μl血浆中能检测出102个肿瘤细胞的DNA,而以普通MSP检测,200μl血浆中需投入103个以上肿瘤细胞的DNA才有弱阳性条带。实时荧光定量MSP检测技术比普通MSP检测的敏感性至少高出10倍。结论实时荧光定量MSP比普通MSP检测灵敏度高,该技术用于肺癌患者血浆DNA甲基化检测,可能有助于肺癌早期诊断。
张丽霞潘世扬谢而付陈丹高丽黄珮珺杨迪张寄南
关键词：血浆DNA甲基化
APC基因甲基化定量检测芯片的建立被引量：1
2008年
目的建立抑癌基因APC(adenomatous polyposis coli,APC)启动子1A的甲基化定量芯片检测方法。方法选取一段420bp的APC基因启动子1A CpG密集序列作为靶序列,针对M0、M1、M2、M3、M45个CpG靶位点,设计一套检测甲基化与非甲基化的探针。采用脐带血DNA克隆体作为阴性、阳性质控品。结果甲基化阳性、阴性质控的芯片结果与测序吻合。每组探针中荧光强度由强至弱依次为,阳性质控(甲基化):探针1>2、3>4;阴性质控(非甲基化):探针3>4、1>2。5个位点的5条荧光强度标准曲线,R2范围是0.93～0.99。M0、M1、M2、M3、M45个位点甲基化杂合型的检测范围分别为50.0%±3.6%、50.0%±6.9%、50.0%±3.5%、50.0%±8.5%、50.0%±7.3%。结论建立了APC基因启动子5个CpG位点的甲基化定量检测芯片。
潘世扬王贤张丽霞陆祖宏程璐陈丹张寄南
关键词：DNA甲基化芯片
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