国家自然科学基金(30270348)
- 作品数：8 被引量：62H指数：4
- 相关作者：钟敏余争平张广斌张蕾许商成更多>>
- 相关机构：第三军医大学第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 微波辐照引起血管内皮细胞氧化损伤及通透性改变被引量：5
- 2007年
- 目的:从氧化损伤途径研究微波辐照引起组织血管通透性增高的原因。方法:实验于2003-03/07在解放军第三军医大学劳动卫生学教研室电磁辐射生物效应研究室完成。①动物实验:取健康雄性昆明种小鼠18只,单纯随机分为3组,即假辐照组,辐照后2,24h组,每组6只。假辐照组不进行辐照,辐照后2,24h组动物接受全身均匀30mW/cm2微波辐照20min,在辐照后2,24h,用荧光素纳示踪剂法测定微波暴露后小鼠主要脏器(脑、肺、肝、肾)血管通透性,同时用化学比色法测定组织丙二醛和超氧化物歧化酶含量。②细胞实验:血管内皮细胞株ECV304细胞生长至融合状态后接受30mW/cm220min微波辐照,在暴露后2,4,8,24h,用培养小室-白蛋白通透率法测定单层ECV304细胞对白蛋白的通透率,同时用化学比色法测定暴露前后细胞丙二醛和超氧化物歧化酶含量。以不接受微波辐照的ECV304细胞作为对照。结果:动物实验:①辐照后2h,脑、肺、肝、肾中荧光素纳含量分别较假辐照组高20.6%,23.8%,24.8%,20.2%(P均<0.05);辐照后24h,分别较假辐照组高31.2%,36.9%,38.2%,33.0%(P均<0.05)。②与假辐照组对比,暴露后2h组脑、肺、肝脏、肾脏组织超氧化物歧化酶含量分别低了13.3%,12.3%,13.6%,2.4%,丙二醛含量则分别高7.4%,20.9%,26.0%,12.3%;暴露后24h组超氧化物歧化酶含量分别低了19.5%,23.1%,20.5%,13.6%,丙二醛含量则分别高31.6%,41.1%,49.0%,16.6%。细胞实验:①在微波暴露后4,8,24h,ECV304细胞对biotin-BSA的通透率较对照分别高63.8%,96.6%,122%(P<0.05)。②辐照后2,4,8,24h,ECV304细胞超氧化物歧化酶水平分别比对照低了21.8%,29.1%,36.4%,52.1%(P均<0.05),丙二醛含量比对照高了12.5%,79.6%,87.5%,110%。结论:实验条件下微波辐照可引起受照组织或血管内皮细胞通透功能失衡,这与微波引起血管内皮细胞氧化还原平衡失调,造成内皮细胞氧化损伤有关。
- 钟敏谢燕张广斌余争平
- 关键词：氧化性应激通透性
- 微波辐照对血管内皮细胞转录因子NF-E2相关因子2磷酸化及蛋白激酶C活性的影响(英文)被引量：1
- 2007年
- 背景:转录因子NF-E2相关因子2是细胞调节抗氧化应激反应的重要转录因子,有实验表明转录因子NF-E2相关因子2能被蛋白激酶C家族中的众多成员磷酸化,为进一步研究微波辐射造成氧化应激损伤的产生机制,是否可以从转录因子NF-E2相关因子2途径观察微波辐照对抗氧化调控系统的影响?目的:分析微波辐照对血管内皮细胞转录因子NF-E2相关因子2的磷酸化及蛋白激酶C活性的影响。设计:观察对比实验。单位:解放军第三军医大学劳动卫生学教研室。材料:血管内皮细胞株,H332PO4,Protein-A Sepharose(Sigma公司),转录因子NF-E2相关因子2单抗(H-300,Santa Cruz),蛋白激酶Cα单抗(Santa Cruz),玻纤滤膜(Whatman公司)凝胶扫描系统(Gel Doc 2000,Bio-Rad),液闪测定仪(LKB-117瑞典)。方法:实验于2003-03/07在解放军第三军医大学劳动卫生学教研室电磁辐射生物效应研究室完成。①转录因子NF-E2相关因子2磷酸化分析:血管内皮细胞以DMEM培养液培养至细胞生长至旺盛期,加入32Pi孵育标记2h,将细胞培养瓶置于37℃水浴盒中,在反射系数近似零的微波暗室接受微波辐照,为辐照组,辐照平均功率密度为30mW/cm2,辐照时间30min;以未接受辐照的细胞为对照组。采用免疫共沉淀-放射自显影法测定转录因子NF-E2相关因子2磷酸化水平,用凝胶扫描系统对细胞转录因子NF-E2相关因子2磷酸化水平进行半定量分析,对照组细胞直接进行分析。②蛋白激酶C蛋白激酶活性分析及表达量测定:辐照组及对照组细胞培养方法、条件,辐照方式、剂量、条件同前。于辐照后2,4,8,24h裂解细胞,提取胞浆和胞膜蛋白,采用r-32P-ATP标记液闪法进行蛋白激酶C活性测定;采用凝胶扫描系统对蛋白条带灰度进行半定量分析;对细胞进行蛋白激酶C免疫细胞化学染色后于光镜下观察细胞胞浆的着色程度,对照组均直接给予测定和观察。主要观察指标:①辐照组�
- 钟敏陈阳张广斌余争平
- 关键词：血管内皮细胞蛋白激酶C
- Nrf2-Keap1抗氧化系统研究进展被引量：24
- 2006年
- 钟敏
- 关键词：氧化应激反应细胞调节反应元件应激源
- 微波辐照对线粒体转录因子A(Tfam)转运的抑制作用被引量：1
- 2009年
- 为了验证微波辐照对线粒体转录因子A(Mitochondrial transcription factorA,Tfam)转运的抑制作用,本实验成功构建了Tfam表达载体Tfam-pTNT,并将其转入兔网织红裂解液中转录翻译成Tfam的前体蛋白pre-Tfam,并用同位素S35 methionine标记。将原代培养的大鼠大脑皮层神经元暴露于微波15min后,于辐照后0h、6h、12h、24h、48h等五个时相点提取活性线粒体。通过转运分析(Import assay),结果发现,微波辐照明显引起大脑皮层神经元线粒体Tfam前体蛋白pre-Tfam从胞浆向线粒体内的转运障碍,而且呈时间依赖效应。本实验证实了微波辐照能显著抑制Tfam的转运,揭示了微波引起神经元能量代谢障碍的新机制。
- 许商成余争平吴娟裴莉萍罗雪陈纯海何旻蒂王源姚权钟敏
- 关键词：微波神经元
- 微波对神经元Tfam表达的影响及与能量代谢障碍的关系被引量：5
- 2008年
- 为了探讨微波辐照对神经元线粒体转录因子A(Mitochondrial transcription factor A,Tfam)表达的影响以及与能量代谢障碍的关系,本实验以体外培养的大脑皮层神经元为研究对象,将其暴露于微波中辐照15min,在辐照后即刻、6h、12h、24h、48h等5个时相点,分别采用高效液相色谱(High performance liquid chro- matography,HPLC)检测神经元三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)、二磷酸腺苷(Adenosine diphosphate,ADP)和一磷酸腺苷(Adenosine monophosphate,AMP)的含量,用实时定量聚合酶联式反应(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)和荧光蛋白质印迹(Western-blot)检测Tfam信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)和蛋白的表达情况。研究发现,辐照后ATP含量呈进行性下降,Tfam mRNA和蛋白表达均增加。说明微波辐照能明显引起神经元能量代谢障碍,而新增的Tfam并未改善微波对能量代谢的影响。提示微波可能是通过抑制Tfam从胞浆向线粒体内的转运,从而损伤Tfam调节能量代谢的生物学功能。
- 许商成张蕾余争平钟敏
- 关键词：微波神经元能量代谢障碍TFAM
- 微波辐射对大鼠睾丸StAR、P450scc基因表达影响被引量：24
- 2005年
- 目的 研究微波暴露后大鼠睾丸组织类固醇合成急性调节蛋白(steroidogenicacuteregulatoryprotein ,StAR) ,细胞色素P4 5 0胆固醇侧链裂解酶(cytochromeP4 5 0Cholesterosidechainlyase ,P4 5 0scc)mRNA表达的变化和对睾酮分泌的影响,探讨微波暴露对成年雄性大鼠性功能影响的机制。方法 观测微波暴露后大鼠性功能,以扑捉潜伏期(capturelatentperiod ,CLP)和扑捉次数(capturetimes,CT)作为判别指标;采用RT PCR方法和放射免疫方法分别测定微波暴露后3,6 ,2 4 ,72h睾丸组织中StAR、P4 5 0sccmRNA水平及血清睾酮含量。结果 微波暴露后3h ,观测到雄性大鼠CLP明显延长(P <0 . 0 1) ,CP明显减少(P <0 .0 1) ,在观测的72h内,大鼠的性行为都较对照组明显下降。血清睾酮含量和睾丸组织StRA、P4 5 0sccmRNA变化有一致性,即在微波暴露后3h ,分别较对照降低83 .1% ,5 7. 3% ,5 3. 6 % (P <0. 0 1) ,6h略有回升,但仍明显低于对照组,2 4h恢复到正常水平,72h再次出现明显降低,分别较对照组降低5 7 .6 % ,39. 5 % ,5 3 .5 % (P <0 . 0 1)。结论 微波暴露可影响睾丸间质细胞StAR、P4 5 0sccmRNA表达而降低睾酮的合成,进而对雄性大鼠性行为造成影响。
- 钟敏周文余争平张广斌
- 关键词：微波睾丸
- 微波辐照对培养血管内皮细胞Nrf2的磷酸化作用
- 2006年
- 目的研究微波辐照对参与抗氧化应激反应调节的转录因子(Nrf2)的磷酸化作用。方法培养的ECV304细胞接受微波辐照,辐照后2,4,8,24 h进行指标测定。用免疫共沉淀-放射自显影法测定Nrf2磷酸化水平;用Western blot、r-32P-ATP标记液闪法分别测定蛋白激酶C(PKC)表达量和活性。结果微波辐照后2,4,8 h,Nrf2磷酸化水平比未辐照细胞明显增强(P<0.05),4 h达到峰值,24 h回复到正常水平;同时PKC的蛋白表达量在辐照后2,4,8 h也比对照细胞明显增加,PKC的活性在这一时段比对照分别增加了36%,93%,47%(P<0.05)。辐照后24h,PKC含量和活性均下降到正常水平。辐照后PKC含量和活性变化与Nrf2磷酸化水平的变化在时效上有一致性。结论微波辐照可引起培养血管内皮细胞Nrf2磷酸化水平在一定时段内增强,该过程与PKC激活有关。
- 钟敏陈阳张广斌余争平
- 关键词：微波辐照血管内皮细胞
- 蛋白激酶C与微波辐照致学习记忆损伤的关系被引量：3
- 2007年
- [目的]探讨微波辐照对大鼠学习记忆的损伤与PKC信号传导途径的关系。[方法]以峰值功率密度为65 W/cm2的微波辐照大鼠20 min,用水迷宫检测大鼠学习记忆功能,用改良的Takai法检测海马PKC活性,用West-ern-blot法检测海马AMPA受体磷酸化程度。[结果]微波辐照后,大鼠寻找平台潜伏期由15.1 s增加到20.9 s(P﹤0.05);细胞膜上PKC活性降低,细胞质内PKC活性升高;辐照后0 h、3 h AMPA受体磷酸化水平下降,从6 h到24h,恢复至对照水平。[结论]峰值功率密度为65 W/cm2的微波辐照对学习记忆的损伤可能涉及PKC-AMPA途径的功能变化。
- 邓朝晖钟敏王登高张蕾张彦文余争平
- 关键词：微波MORRIS水迷宫大鼠海马蛋白激酶C
