国家自然科学基金(30800816)
- 作品数：5 被引量：12H指数：3
- 相关作者：葛金英步志高陈曦祁芳冯秋霖更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所江苏省农业科学院东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 表达犬瘟热病毒H基因重组新城疫病毒的构建及其免疫原性研究被引量：4
- 2012年
- 为研制安全、有效的新型犬瘟热疫苗,本研究利用新城疫病毒(NDV)LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统,构建出表达犬瘟热病毒(CDV)弱毒疫苗株Rockborn-20/8血凝素(H)蛋白的重组病毒rLa-CDV-H,并对其生物学特性进行鉴定,评估其作为犬瘟热活载体疫苗的安全性和有效性。通过免疫荧光和western blot试验证明了CDV H蛋白的正确表达;重组病毒株保持了LaSota亲本株的低致病性和高滴度鸡胚生长特性;重组病毒rLa-CDV-H接种12周龄比格犬后,可以诱导显著的CDV中和抗体反应。本研究表明重组病毒rLa-CDV-H具有作为犬瘟热重组病毒活载体疫苗的潜力。
- 田美杰葛金英王喜军冯娜马良帅磊苏华高玉伟夏咸柱步志高
- 关键词：犬瘟热病毒血凝素蛋白重组新城疫病毒
- 表达鸡毒支原体TM1蛋白基因重组新城疫病毒的构建及其免疫原性研究被引量：5
- 2013年
- 为研制安全、有效的新型鸡毒支原体(MG)疫苗,本研究利用新城疫病毒(NDV)LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统,构建出表达MG TM1蛋白的重组病毒rLa-TM1,并对其生物学特性进行鉴定,评估其作为MG活载体疫苗的安全性和有效性。通过免疫荧光试验表明TM1蛋白获得正确表达;经测定,重组病毒平均鸡胚致死时间(MDT)为132 h,脑内致死指数(ICPI)和静脉内致病指数(IVPI)均为0,保持了LaSota亲本株的低致病性;rLa-TM1接种鸡胚所收集尿囊液中的病毒滴度可高达每毫升109.5EID50以上,证明重组病毒保持了LaSota亲本株高滴度鸡胚生长特性;重组病毒rLa-TM1接种1周龄的雏鸡后,可以诱导显著的MG抗体反应;攻毒保护试验证明其保护率可以达90%,而对照组全部发病(10/10)。本研究表明重组病毒rLa-TM1可以作为MG重组病毒活载体疫苗的候选疫苗。
- 冯秋霖刘茂军祁芳陈曦邵国青葛金英步志高
- 关键词：鸡毒支原体重组新城疫病毒
- 重组新城疫病毒表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的研究被引量：2
- 2014年
- 为构建表达猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(Cap)的重组新城疫病毒(NDV),本研究利用NDV La Sota弱毒疫苗株为活病毒载体,通过反向遗传操作系统构建出表达PCV2 Cap的重组病毒(r La-PCV2/Cap),以及表达删除核定位信号(NLS)的Cap(CapΔ41)的重组病毒(r La-PCV2/CapΔ41),并对外源蛋白的表达效果进行了检测。通过间接免疫荧光试验证明,两种重组病毒感染的BHK-21细胞中,PCV2 Cap蛋白以及删除NLS的CapΔ41蛋白均获得正确表达;其中,完整的Cap蛋白定位于核内,而删除NLS的CapΔ41蛋白则定位于胞浆中,本研究结果为研究新型PCV2疫苗奠定基础。
- 王子龙葛金英王云鹤于桂梅孙继国步志高
- 关键词：猪圆环病毒2型重组新城疫病毒CAP蛋白核定位信号
- 鸡传染性支气管炎M41毒株S1基因的原核表达及间接ELISA抗体检测方法初步建立被引量：2
- 2012年
- 为获得鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41株的全长S1蛋白,并以S1蛋白为包被抗原建立间接ELISA抗体检测方法,试验采用RT-PCR方法扩增出S1基因,将其克隆到pBluescriptⅡKS(+)载体中,酶切、测序鉴定后将S1基因导入融合表达载体pMAL-c2X中,将重组质粒转化大肠杆菌TB1,IPTG诱导后,应用SDS-PAGE及Western-blot检测蛋白表达情况。结果表明:融合蛋白得到了表达;以纯化的重组蛋白作为包被抗原,在包被量为3.2μg/孔、血清160倍稀释条件下P/N值最大,初步建立了IBV抗体间接ELISA检测方法。
- 王建忠刘风波李晓艳田美杰冯秋霖祁芳任家琰
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒S1基因原核表达
- 表达H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白重组新城疫病毒的构建以及密码子优化的HA免疫增强作用被引量：3
- 2014年
- 为构建表达H5N1亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白重组新城疫病毒(NDV)及比较密码子优化的HA免疫增强作用,本研究利用NDV LaSota弱毒疫苗株的反向遗传操作系统,分别构建了表达野毒型H5N1亚型AIV HA蛋白和密码子优化的HA蛋白的重组NDV,并分别命名为rL-H5HA和rL-optiH5HA。对拯救的重组病毒进行RT-PCR、间接免疫荧光和western blot鉴定,结果表明,两种重组病毒均可以在BHK-21细胞中以及鸡胚成纤维细胞稳定地表达HA蛋白。此外,rL-optiH5HA在体外增殖能力及在体内刺激产生抗体均显著高于rL-H5HA。本研究表明,密码子优化的HA重组NDV具有明显的免疫增强作用。本研究为研制安全、有效的新型禽流感疫苗提供了实验依据。
- 陈曦于桂梅刘景利王金良姜永萍葛金英步志高
- 关键词：HA蛋白重组新城疫病毒密码子优化
