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HPV6b L1/Ct MOMP多表位嵌合DNA诱导BALB/c小鼠产生特异性细胞免疫的研究: 2010年; 目的探讨人乳头瘤病毒（HPV）6b结构蛋白L1和沙眼衣原体（Ct）主要外膜蛋白（MOMP）多表位嵌合DNA（HPV6b L1/Ct MOMP）诱导BALB/c小鼠产生特异性细胞免疫效应,及HPV6b L1对Ct MOMP多表位基因诱导细胞免疫的增强作用.方法将Ct MOMP多表位基因连接在经真核密码子优化的HPV6b L1羧基端,构建嵌合重组质粒pcDNA3.1（＋）/HPV6b L1/Ct MOMP多表位,经酶切和测序证实后,转染COS-7细胞,间接免疫荧光鉴定其在真核细胞中的表达;将纯化后的嵌合重组质粒肌肉注射免疫BALB/c小鼠,并设置pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒、pcD-NA3.1（＋）和PBS三组对照.采用0、2、4周免疫程序,DNA剂量为每只150μg/次.于末次免疫后2周,分别用乳酸脱氢酶（LDH）释放法和细胞内细胞因子染色-流式细胞术（ICS-FAGS）检测小鼠脾细胞对Ct MOMP多表位蛋白和HPV6b L1蛋白的特异性CTL活性,胞内细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-10产生水平等细胞免疫应答指标.结果免疫后,在效靶比（E∶T）分别为40∶1、20∶1时,pcDNA3.1（＋）/HPV6b L1/Ct MOMP多表位嵌合重组质粒免疫组小鼠产生了针对Ct MOMP多表位蛋白特异性CTL杀伤活性（44.56%±4.02%,35.35%±2.89%）和HPV6b L1蛋白特异性CTL杀伤活性（27.08%±2.04%,21.68%±4.06%）,与各对照组比较差异有统计学意义（F=72.87,F=114.55,P＜0.05;F=30.04,F=10.47,P＜0.05）,且显著高于pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒组（35.50%±2.68%,30.24%±1.75%;12.27%±3.36%,9.32%±3.07%;P＜0.05）;而pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒组小鼠仅显示了Ct MOMP多表位特异性的CTL杀伤活性,与对照组比较差异也有统计学意义（F=58.85,F=120.21;P＜0.05）.胞内细胞因子IFN-γ的产生水平,pcDNA3.1（＋）/HPV6b L1/Ct MOMP多表位嵌合质粒组（4.34%±0.06%）高于pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒组（3.14%±0.18%）,与对照组比较差异有统计学意义（F=473.83,P＜0.05）,而重组质粒组较空载体组和PBS对; 石朝辉朱珊丽许文陆丽君李玲玲张丽芳; 关键词：主要外膜蛋白细胞毒T细胞

沙眼衣原体感染小鼠生殖道模型的初步研究被引量：6: 2011年; 目的建立沙眼衣原体（C￡）小鼠生殖道感染模型。方法分别用10。、10‘、10。数量IFU的CtE型株阴道内接种雌性BALB／c小鼠，观察外阴炎症反应，检测排菌情况，PCR检测分泌物及对组织进行病理观察。结果接种后第5d，实验组小鼠即出现感染迹象；在接种后的5～20d均可在小鼠生殖道分离得到具感染性的c≠，但其持续排菌时期与接种的IFU数量成正比；且小鼠生殖道排菌量（IFU）与接种的IFU数量亦成正比，以10。剂量组为高；小鼠生殖道分泌物PCR扩增后电泳，可见与CtMOMP分子量相当的产物；小鼠生殖道组织切片观察证实，c￡E型株感染小鼠生殖道可产生生殖道炎症。结论成功建立了小鼠生殖道E型c￡感染模型；10。IFU是建立模型的适宜感染量。; 王乐丹颜林志孟锐锋张丽芳; 关键词：沙眼衣原体动物模型生殖道感染

间接免疫荧光法检测沙眼衣原体包涵体抗原的研究被引量：1: 2010年; 目的探讨基于沙眼衣原体全菌体兔血清抗体的间接免疫荧光法检测沙眼衣原体包涵体抗原的研究。方法将6×103IFU沙眼衣原体接种于Hep-2细胞,培养72 h,PCR检测验证;以兔抗沙眼衣原体全菌体血清抗体为一抗,用免疫荧光法检测沙眼衣原体包涵体抗原,同时采用传统的Giemsa染色、Lugol′s碘染对沙眼衣原体包涵体进行鉴定,并统计和比较其包涵体的检出率。结果经PCR鉴定为阳性的沙眼衣原体感染的Hep-2细胞,间接免疫荧光检测在细胞浆中出现绿色荧光,检出率为28.84%;经Giemsa染色和Lugol′s碘染验证胞浆中存在典型的包涵体结构,检出率分别为15.19%和17.36%,与免疫荧光法比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论基于兔抗沙眼衣原体全菌体血清的间接免疫荧光法可显著提高沙眼衣原体包涵体的检出率。; 巩文词朱珊丽赵朋云王佳陈俊陈韶李文姝张丽芳; 关键词：间接免疫荧光法沙眼衣原体包涵体

沙眼衣原体主要外膜蛋白_(21-387)的原核表达及其免疫原性被引量：1: 2015年; 目的:探讨沙眼衣原体(Ct)E血清型主要外膜蛋白(MOMP21-387)的原核表达及其免疫原性。方法:利用PCR方法扩增Ct E血清型MOMP第21至第387氨基酸的基因序列,克隆至p ET21a(+)原核表达载体构建重组质粒p ET21a(+)/MOMP21-387,并进行原核表达和纯化,经SDS-PAGE和Western blot法分析鉴定后,通过BALB/c小鼠免疫检测MOMP21-387蛋白的免疫原性,即通过ELISA法检测小鼠血清Ig G和生殖道分泌物Ig A抗体反应,乳酸脱氢酶(LDH)法检测其脾细胞的特异性杀伤作用。结果:在原核表达系统成功表达了MOMP21-387融合蛋白,经SDS-PAGE及Western blot法鉴定在相对分子质量(Mr)约44 000处出现特异性条带;并经NiNTA亲和层析的方法获得了纯化的MOMP21-387融合蛋白,免疫BALB/c小鼠可诱导产生特异性血清Ig G抗体和生殖道分泌物Ig A抗体,至第6周达到高峰,MOMP21-387组的Ig G和Ig A抗体较PBS组差异均有统计学意义(P<0.05);LDH检测结果显示,MOMP21-387组小鼠脾细胞对靶细胞的杀伤率,在10:1、20:1和40:1和80:1时均明显高于PBS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Ct E型MOMP21-387融合蛋白具有良好的免疫原性,为基于MOMP21-387的Ct的ELISA法检测方法的开发和疫苗研究奠定了基础。; 刘巧琼涂建欣林晓云熊一融朱珊丽陈韶张丽芳; 关键词：沙眼衣原体主要外膜蛋白原核表达免疫原性

HPV6L1/CtMOMP多表位融合基因在COS-7细胞的表达及其在小鼠的免疫效果观察被引量：2: 2010年; 研究人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)6b结构蛋白L1(HPV6b L1)基因佐剂增强沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)主要外膜蛋白(MOMP)多表位(Ct MOMP168)DNA疫苗的免疫效果的可能性.构建pcDNA3.1(+)/HPV6b L1/Ct MOMP168融合重组质粒,转染COS-7细胞,用RT-PCR、激光共聚焦显微技术及Western印迹技术检测其表达.分别用pcDNA3.1(+)/HPV6b L1/Ct MOMP168、pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168及pcDNA3.1(+)质粒肌肉免疫BALB/c小鼠,ELISA检测外周血中IgG及阴道分泌物中sIgA.结果表明,pcDNA3.1(+)/HPV6b L1/CtMOMP168可在COS-7细胞中表达;Ct MOMP168组和HPV6b L1/Ct MOMP168组均可刺激小鼠产生抗Ct MOMP特异性的抗体,抗体滴度随免疫次数增加而升高,且HPV6b L1/Ct MOMP168组小鼠产生的抗体滴度明显高于Ct MOMP168组(P<0.05).结果提示,分子佐剂HPV6b L1与CtMOMP多表位基因融合能够显著增强Ct MOMP多表位DNA疫苗的体液免疫应答.; 许文石朝辉朱珊丽陆丽君孟锐峰李玲张丽芳; 关键词：人乳头瘤病毒沙眼衣原体主要外膜蛋白 DNA疫苗

沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位免疫血清中和活性分析被引量：1: 2012年; 目的:制备高效价E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)168多表位特异性免疫血清并研究其免疫学特性。方法:纯化的Trx-his/Ct MOMP168融合蛋白经弗氏佐剂乳化后,小鼠背部皮下多点免疫注射,间隔2周后加强免疫,共3次,并分别于免疫前和每次免疫后2周取血,采用ELISA法检测血清融合蛋白和E型Ct全菌体特异性抗体水平及变化趋势,通过体外中和反应检测多表位特异性血清的免疫学特性。结果:小鼠用Ct MOMP168多表位融合蛋白全程免疫后产生了抗融合蛋白和E型Ct全菌体特异性抗体,ELISA法检测最高滴度达1:500。ELISA和体外中和实验检测结果显示,该抗体能特异性识别MOMP多表位蛋白和E型Ct全菌体,并能有效抑制E型Ct感染Hela229细胞。结论:沙眼衣原体MOMP多表位融合蛋白免疫血清可特异性结合并中和E型Ct。; 陈昊巩文词陈江冯娟吕艳朱珊丽陈向敏薛向阳张丽芳; 关键词：沙眼衣原体主要外膜蛋白表位

沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位重组DNA诱导小鼠体液免疫有效剂量的探讨: 2012年; 目的:探讨沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位(Ct MOMP168)重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168免疫小鼠的有效免疫剂量,为体内免疫学效应的研究提供实验依据。方法:在重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168构建成功的基础上,抽提纯化质粒,分3个免疫剂量组,即50、100和150μg剂量组,同时设PBS对照组。肌肉注射免疫BALB/c小鼠3次,间隔2周,于免疫的0、2、4、6、8周分别尾静脉取血,分离血清,间接ELISA法检测小鼠血清中Ct MOMP多表位特异性抗体IgG的生成量,并于0、1、3、5、7周取小鼠阴道冲洗物,检测Ct MOMP多表位特异性SIgA的生成量,分别进行统计学分析。结果:3个不同免疫剂量组,血清特异性抗体IgG生成量于免疫第4周后均开始随免疫时间延长而逐步增加,150μg剂量组抗体IgG的生成水平高于其他剂量组(P<0.05)。免疫小鼠阴道分泌物中特异性抗体SIgA生成较快,免疫开始后1周,150μg剂量组SIgA的产生水平高于其他组,7周后SIgA开始下降,但150μg剂量组抗体水平仍高于其他剂量组(P<0.05)。结论:重组质粒DNA免疫小鼠的特异性抗体生成显示了剂量依赖关系,高剂量(150μg)免疫组小鼠血清特异性抗体IgG和阴道分泌性特异性抗体SIgA生成水平优势显著。; 饶品欢石朝晖李文姝吕艳陈向敏朱珊丽张丽芳; 关键词：沙眼衣原体主要外膜蛋白 DNA免疫免疫剂量小鼠

乙型肝炎病毒C基因多态性及其蛋白特性分析: 2012年; 目的:调查温州医学院大学生人群乙型肝炎病毒(HBV)C基因多态性及其HBc蛋白特性变化,为了解乙肝病毒核心抗原(HBcAg)变异提供理论依据。方法:采用HBV-C基因特异性引物对21份温州医学院大学生HBV携带者(血清学检测为大三阳患者)血清标本进行PCR扩增鉴定,并取19份PCR检测阳性产物直接测序;进一步用Vector NTI 8.0和DNA Star软件分析HBV-C基因多态性及HBc蛋白特性的变化。结果:21份标本中,HBV-C DNA阳性率达90.48%(19/21),与标准基因序列(Gen Bank X01587)比较,HBV-C基因同源性为93.3%～95.1%。HBV-C基因分别形成51种突变模式,其中一处由于核苷酸的改变,翻译的氨基酸也发生了相应的改变,此处氨基酸序列的第130处脯氨酸(Pro)突变为苏氨酸(Thr),其余标本均为同义突变;但突变处编码蛋白在亲水性、表面可及性及抗原性与标准株相比较无明显变化。结论:温州医学院大学生HBV携带者的HBV C基因具有多态性,但是由C基因决定的核心蛋白序列相对保守。; 冯娟吕艳陈昊涂建欣朱珊丽薛向阳张丽芳; 关键词：乙型肝炎病毒 C基因突变多态性

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国家自然科学基金(30972669)

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