国家教育部博士点基金(20020183064)
- 作品数：20 被引量：96H指数：6
- 相关作者：李玉林何旭牛云王心蕊张丽红更多>>
- 相关机构：吉林大学空军航空大学吉林大学第二医院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Smad蛋白在乳腺癌和正常乳腺上皮细胞中的表达及意义被引量：3
- 2009年
- 目的:检测TGFβ1、TGFβ受体Ⅱ及其下游Smad调节因子等基因在乳腺癌和正常乳腺上皮细胞中的表达,探讨TGFβ在乳腺癌发展过程中发挥作用的分子机制。方法:分离纯化人正常乳腺上皮细胞,应用RT-PCR检测乳腺癌细胞系MCF7及正常乳腺上皮细胞中TGFβ1、TGFβ受体Ⅱ、Smad4、Smad6、Smad7的表达。结果:TGFβ1、TGFβ受体Ⅱ、Smad6、Smad7与内参照GAPDH比值在正常乳腺上皮细胞中(0.721±0.214、1.001±0.312、0.689±0.12和0.221±0.124)与MCF7细胞(0.698±0.324、0.998±0.217、0.718±0.257;0.246±0.138)比较表达水平差异无显著性,Smad4在乳腺癌细胞中的表达水平(0.498±0.221)低于正常乳腺上皮细胞(1.132±0.314)(P<0.05)。结论:Smad4在乳腺癌细胞中的低表达可能与TGFβ对乳腺癌的促癌作用有关联。
- 陈志明曹红十李荣贵史艳芬孙梅李玉林
- 关键词：转化生长因子ΒSMADS聚合酶链反应
- 人骨髓间充质干细胞的分离及鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的 :建立分离并鉴定人骨髓间充质干细胞 (HMSC)的方法。方法 :联合应用 Percoll(1.0 73g· L- 1 )密度梯度离心和贴壁筛选的方法分离 HMSC进行体外培养 ,利用免疫细胞化学、细胞化学和电镜等技术手段对体外培养的 HMSC进行鉴定。结果 :HMSC具有独特的表型特征 ,即 CD2 9、CD4 4阳性和 CD34、CD4 5阴性。细胞糖原反应 (PAS)阳性、苏丹黑反应 (SB)阴性。电镜观察结果提示细胞较幼稚。结论 :利用密度梯度离心和贴壁筛选的方法可以分离 HMSC,联合应用免疫细胞化学、细胞化学和电镜等技术手段鉴定 HMSC的方法有效。
- 赵东海王悦增郭新李玉林
- 关键词：骨髓干细胞细胞
- 人骨髓间充质干细胞的分离培养及其形态学特点被引量：14
- 2006年
- 利用Percoll梯度分离、贴壁筛选法及单克隆培养法分离、培养人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs);采用流式细胞术检测MSCs免疫学表型;采用细胞组织化学和免疫荧光技术观察MSCs的一般形态学特点;利用透射电镜和扫描电镜观察MSCs的超微结构。结果表明,分离、培养出高度同源性的MSCs具有独特的细胞免疫学表型,即CD73、CD105、CD44、CD166、CD90阳性,CD34、CD 31、CD45阴性;细胞组织化学MSCs PAS-过碘酸雪夫氏染色阳性,苏丹黑-B(SB)及碱性磷酸酶(AKP)染色阴性;免疫荧光见细胞CD73、CD105阳性;透射电镜下MSCs表面有微绒毛,相邻细胞间有缝隙连接,细胞器丰富;扫描电镜下MSCs呈长梭形、鱼群状排列,表面有许多微绒毛。实验结果为MSCs的诱导分化及应用提供了形态学基础。
- 何旭郭新崔丽王心蕊牛云李玉林
- 关键词：间充质干细胞流式细胞术免疫荧光激光扫描共聚焦显微镜
- 人表皮干细胞的分离、纯化培养及鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的对人表皮干细胞(human keratinocyte stem cells,hKSCs)进行分离、纯化培养及鉴定,探索一种高效分离及纯化培养hKSCs的途径,为组织工程皮肤的构建提供种子细胞。方法利用酶消化法分离hKSCs,快速粘附法纯化hKSCs并进行无血清培养,倒置相差显微镜观察形态变化;以角蛋白19(cytokeratin,CK19)及整合素β1、p63为一抗,利用激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)对原代培养的细胞进行免疫细胞化学检测。结果经快速粘附法筛选的细胞在相差显微镜下观察形态一致,呈上皮样生长;LSCM下CK19及整合素β1、p63均呈阳性反应,初步证实分离出的细胞为hKSCs。结论成功建立了hKSCs分离、纯化和培养的方法,为组织工程皮肤的研究提供了理论与实验基础。
- 马英智王心蕊何旭牛云李玉林
- 关键词：表皮干细胞
- 人骨髓间充质干细胞向成骨细胞的诱导分化被引量：8
- 2008年
- 目的诱导人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。方法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,将其分为对照组和诱导组两组。诱导组加入地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸,诱导成骨。采用免疫荧光染色的方法检测碱性磷酸酶(AKP)和骨桥蛋白(OPN)的表达;并通过RT-PCR检测骨桥蛋白mRNA的表达;利用硝酸银染色和茜素红染色两种特殊染色方法检测钙盐沉积。结果经诱导,诱导组细胞在呈典型的成骨细胞形态并有钙结节形成;免疫荧光染色结果显示诱导组细胞AKP和OPN均为强阳性表达,RT-PCR结果也显示诱导组细胞骨桥蛋白mRNA表达;两种特殊染色结果显示诱导组细胞有大量的钙盐沉积。而对照组细胞无上述形态改变和表达。结论人骨髓间充质干细胞在一定的诱导条件下能向成骨细胞分化。
- 牛云何旭张丽红林屹陈芦苇李玉林
- 关键词：骨髓间充质干细胞成骨细胞骨桥蛋白
- 胶质瘤细胞上清液诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究
- 目的分离培养人骨髓间充质干细胞,探讨鼠胶质瘤细胞上清液对其向神经元样细胞的诱导分化。方法利用 Percoll 梯度分离法,培养人骨髓间充质干细胞。采用鼠胶质瘤细胞上清液对骨髓间充质干细胞进行诱导分化。观察人骨髓间充质干细...
- 牛云何旭王心蕊马英智李玉林
- 关键词：骨髓间充质干细胞神经元样细胞胶质瘤细胞上清液
- 人骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞诱导分化的研究被引量：7
- 2006年
- 目的:分析人骨髓间充质干细胞(hMSCs)和脐静脉内皮细胞(hUVECs)的基因表达差异,探讨体外基因转染诱导内皮分化的可行性以及作为血管组织工程种子细胞来源的应用前景。方法:分别从人骨髓和脐静脉分离间充质干细胞(hMSCs)和内皮细胞(hUVECs),扩增培养后进行流式细胞仪、免疫细胞化学,免疫荧光鉴定和超微结构观察。通过BiostarH-40S表达谱芯片分析,选择两者的差异表达基因,导入hMSCs,经RT-PCR、ELISA鉴定该基因的转染和表达,并分析hMSCs的内皮分化程度。结果:hMSCs表达内皮细胞的多种特异性mRNA,经VEGFl65基因瞬时转染后RT-PCR有明显条带,ELISA定量检测VEGF165蛋白表达为(707.9±11.3)ng/L,同时CD44表达明显下调38.80%,CD31则明显上调达56.82%,FI-1,FVⅢAg和CD34的表达也有不同程度升高。结论:hMSCs具有内皮分化潜能,体外基因转染诱导hMSCs产生功能性内皮细胞和组织工程化血管具有广阔前景。
- 刘丹丹王悦增赵东海李玉林
- 关键词：血管组织工程间充质干细胞基因芯片基因转染
- 人骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为脂肪细胞方法的建立被引量：10
- 2006年
- 目的:分离和培养人骨髓间充质干细胞(hMSCs),并在体外定向诱导hMSCs分化为脂肪细胞。方法:利用Percoll梯度分离法、贴壁筛选法及单克隆培养法,分离、培养、扩增hMSCs;应用地塞米松、吲哚美辛、IBMX及胰岛素定向诱导hMSCs分化为脂肪细胞。结果:体外分离、培养出高度同源性的hMSCs,hMSCs具有独特的细胞免疫学表型,即CD73、CD105、CD166、CD90及CD44阳性,CD34、CD31及CD45阴性。诱导3 d后,hMSCs细胞内有小脂滴出现,诱导2周后,脂滴数量增加并相互融合,细胞由长梭形变为圆形或多边形。结论:成功建立hMSCs分离培养方法,体外定向诱导hMSCs分化为脂肪细胞。
- 何旭王心蕊张海英牛云李玉林
- 关键词：骨髓祖代细胞脂细胞流式细胞术
- 人骨髓间充质干细胞基因表达谱的芯片分析被引量：3
- 2006年
- 目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)作为组织工程种子细胞的分子遗传学基础和临床应用价值。方法:通过密度梯度离心法和贴壁筛选法的联合应用,分离人骨髓间充质干细胞,流式细胞仪分析细胞同源性,UNIQ-10柱式Trizol总RNA抽提法获取足量的RNA,用于MSCs基因表达谱的分析研究。结果:流式细胞仪检测表明了所分离hMSCs的高度同源性,基因表达谱芯片分析首次揭示了MSCs表达多种间充质细胞和非间充质细胞的特异性mRNA,如脂肪细胞、成软骨细胞、成骨细胞、成肌细胞、造血支持基质、神经元、神经胶质细胞和上皮/内皮细胞等。结论:hMSCs具有高度可塑性和广泛分化潜能,是以干细胞工程为代表的现代组织工程的重要细胞来源。
- 刘丹丹王悦增赵东海李玉林
- 关键词：间充质干细胞基因表达谱基因芯片
- 鼠胶质瘤细胞上清液诱导人骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化被引量：6
- 2007年
- 目的:分离培养人骨髓间充质干细胞(MSCs),探讨鼠胶质瘤细胞上清液对其向神经元样细胞的诱导分化。方法:利用Percoll梯度分离法,培养人MSCs。采用鼠胶质瘤细胞上清液对MSCs进行诱导分化。观察人MSCs经诱导后细胞的形态变化,采用免疫细胞化学方法检测神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:诱导24h后,细胞胞体收缩呈锥形或球形,有突起长出,细胞间突起相互连接,交错成网,为典型的神经元样形态。免疫细胞化学结果显示,经诱导培养后的神经元样细胞的胞体及部分突起NSE和NF染色呈强阳性表达,而GFAP染色呈阴性。诱导组出现NSE阳性的细胞率为(79.5±3.2)%,而对照组出现NSE阳性的细胞率为(12.1±2.0)%,两组之间比较差异有显著性(P<0.01)。诱导组出现NF阳性的细胞率为(41.2±2.4)%,而对照组为阴性。结论:鼠胶质瘤细胞上清液可以诱导MSCs向神经元样细胞分化。
- 牛云何旭王心蕊马英智李玉林
- 关键词：骨髓间充质干细胞神经元样细胞胶质瘤细胞
