南阳市科技攻关计划项目(2011GG018)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：侯俊然何霭詹希美李卓雅陈志国更多>>
- 相关机构：南阳理工学院中山医科大学中山大学更多>>
- 发文基金：南阳市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 刚地弓形虫RACK1蛋白与PKC蛋白结合作用的研究
- 2014年
- 目的研究刚地弓形虫RACK1蛋白与PKC蛋白之间的结合特性。方法采用PCR方法扩增弓形虫RACK1基因,双酶切后与pGEX-4T-1连接,构建原核表达载体pGEX-4T-1-RACK1,转化入BL21大肠埃希菌中,用0.8mmol/L IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE检测并进行Ni-IDA亲和层析纯化,采用Western blot分析RACK1蛋白与PKC蛋白的结合作用。结果 PCR扩增出966bp的RACK1基因开放读码框,成功构建pGEX-4T-1-RACK1原核表达载体,转化BL21后用IPTG诱导4h^6h,SDS-PAGE检测到约36ku的表达产物,Western blot检测RACK1蛋白能与PKC蛋白结合。结论成功构建了pGEX-4T-1原核表达载体,表达产物RACK1蛋白能与PKC蛋白结合。
- 侯俊然叶松山何霭陈志国詹希美
- 关键词：刚地弓形虫RACK1PKC相互作用
- 弓形虫蛋白激酶C受体1蛋白的表达与抗原性分析被引量：1
- 2014年
- 目的构建弓形虫蛋白激酶C受体1基因的pET-30a(+)-RACK1重组质粒,表达、纯化RACK1蛋白。方法PCR扩增RACK1基因的cDNA序列,用SacI、NcoI限制性内切酶对RACK1基因的PCR产物及pET-30a(+)质粒进行双酶切,连接,转化大肠杆菌BL21,构建重组质粒。IPTG诱导表达,亲和层析柱纯化表达产物,SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行分析鉴定。结果 PCR扩增出966bp的RACK1完整基因序列,成功构建RACK1基因的pET-30a(+)-RACK1重组质粒,表达出约36kDa的RACK1蛋白,蛋白具有抗原性。结论成功构建弓形虫RACK1基因的pET-30a(+)-RACK1重组质粒,纯化出RACK1蛋白,为进一步进行RACK1蛋白在弓形虫入侵分子机制中的作用研究奠定基础。
- 侯俊然何霭李卓雅詹希美
- 关键词：弓形虫RACK1抗原性
