南方医科大学南方医院院长基金(2009A002)
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
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- 去势延迟雄性小鼠骨折愈合
- 2013年
- 目的观察去势雄性小鼠骨折愈合的情况,探讨男性骨质疏松骨折愈合过程。方法 40只7周龄C57BL/6J雄性小鼠,其中8只作为基线组,32只随机分为对照组与去势组,小鼠去势后1周建立右股骨中段骨折模型。术后2周和4周,测量血清睾酮浓度,骨折端骨密度(BMD)。骨折愈合情况通过显微CT和组织学切片显示。结果去势后小鼠血清睾酮浓度明显下降;术后4周,与对照组相比,去势组BMD明显降低。三维重建图像显示去势组骨痂改建差于对照组。病理切片可见去势组初级骨小梁少于对照组,骨痂重建差于对照组。结论去势延迟的骨折的愈合,表现在骨折区骨量减少以及骨改建延迟,本研究为男性骨质疏松骨折的研究提供了动物模型。
- 袁亮黎新宪孟越林振江建明杨德鸿
- 关键词：去势雄性小鼠睾酮骨质疏松骨折愈合
- 信号选择性甲状旁腺素模拟肽成骨效应的Wnt信号通路研究被引量：2
- 2012年
- 目的探讨信号选择性甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)模拟肽在促进小鼠成骨细胞成骨过程中对Wnt信号传导通路相关因子的影响,研究其成骨的作用机制。方法取2～3日龄C57BL乳鼠颅盖骨分离培养成骨细胞,倒置相差显微镜观察形态变化,ALP染色和茜素红染色对成骨细胞进行鉴定。取贴壁生长的第1代细胞,随机分为4组:PTH(1-34)组、G1R19(1-34)组和G1R19(1-28)组分别加入10 nmol/L PTH(1-34)、10 nmol/L G1R19(1-34)、100 nmol/L G1R19(1-28),空白对照组加入等体积的0.1%三氟乙酸(trifluoroacetic acid,TFA)。实时定量PCR法检测Wnt信号通路相关基因β-catenin、骨钙素(osteocalcin,OC)、Wnt2、Wnt5b、Wnt7b基因的表达。结果倒置相差显微镜观察示,培养7 d可见细胞排列紧密,为三角形或多边形,呈铺路石样;细胞培养14 d ALP染色可见细胞质中出现蓝染颗粒,成骨诱导培养28 d茜素红染色可见细胞外基质中红色矿化结节形成。实时定量PCR检测发现,各处理组OC、Wnt5b mRNA相对表达量均高于空白对照组,Wnt2 mRNA相对表达量均低于空白对照组;PTH(1-34)组、G1R19(1-34)组Wnt7b mRNA相对表达量高于空白对照组,G1R1(91-34)组高于PTH(1-34)组和G1R1(91-28)组;PTH(1-34)组β-cateninmRNA相对表达量显著高于空白对照组;以上差异均有统计学意义(P<0.05)。其余各因子mRNA表达各组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在所检测的Wnt相关因子中,PTH(1-34)和G1R19(1-34)对经典Wnt信号因子作用明显,G1R19(1-28)对非经典Wnt信号因子作用明显。
- 冯瑞强江建明李俊青付兆宗林振袁亮杨德鸿
- 关键词：甲状旁腺素WNT信号传导通路
- CITED1 63-84氨基酸片段是影响其细胞定位与成骨作用的关键区域被引量：1
- 2013年
- 目的生物信息学分析发现CITED1 63-84氨基酸片段为其重要的功能片段,进一步研究CITED1 63-84氨基酸片段突变(丝氨酸突变为丙氨酸)是否影响其进核及成骨分化,探讨其在成骨分化过程中的生物学调控功能。方法 CITED1 63-84突变质粒(9S>A),CITED1质粒及空白质粒分别转染MC3T3-E1细胞,培养2 d,用100 nmol/L PTH(1-34)刺激细胞,行细胞免疫荧光实验,共聚焦镜下观察细胞内CITED1位置变化。将CITED1 63-84突变质粒(9S>A),CITED1质粒及空白质粒按相应体系转染MC3T3-E1细胞,分为两组,一组成骨诱导4周,另一组成骨诱导基础上进行10 nmol/L PTH(1-34)间歇刺激(每48 h刺激4 h)4周,测ALP酶活性及Ca离子浓度并进行ALP及茜素红染色。行RT-PCR实验分析成骨相关基因ALP2,RUNX2,OC的表达量。结果 PTH(1-34)可促进CITED1进核,将CITED1氨基酸63-84片段突变后,可明显抑制该反应。4周成骨诱导后,CITED1过表达明显抑制成骨细胞分化,ALP及Ca离子浓度明显低于对照组,而CITED1突变质粒(9S>A)过表达ALP及Ca离子浓度明显高于CITED1组,与对照组基本相同。进一步研究表明,CITED1过表达抑制PTH(1-34)诱导的成骨细胞分化,而CITED1突变质粒(9S>A)可逆转该反应。ALP染色及茜素红染色也验证了以上结论。RT-PCR结果提示:CITED1突变质粒(9S>A)过表达成骨相关基因ALP2,RUNX2,OC明显高于CITED1质粒过表达。结论 CITED1 63-84片段丝氨酸为其重要的功能位点,可影响其细胞进核及成骨分化。
- 林振袁亮孟越冯瑞强付兆宗杨德鸿
- 关键词：PTH成骨分化基因突变
- 信号选择性甲状旁腺素模拟肽促进去势雄性小鼠的骨折愈合被引量：9
- 2013年
- 目的观察间断皮下注射信号选择性甲状旁腺素(PTH)模拟肽对去势雄性小鼠骨折愈合的影响。方法 36只7周龄C57/BL雄性小鼠去势,1周后制作股骨中段骨折模型,术后用人重组甲状旁腺素(hPTH(1-34)),信号选择性PTH模拟肽[Gly1,Arg19]hPTH(1-34)(G1,R19(1-28))和等量溶解剂注射,于术后14 d和28 d处死,双能X线骨密度仪测量骨痂区骨密度以及骨矿物含量;术侧骨折愈合情况通过X线、显微CT、生物力学和组织学显示。结果术后14 d,G1,R19(1-28)组骨密度显著高于对照组(P<0.05)。最大力和刚度G1,R19(1-28)低于hPTH(1-34)组。X线和显微CT显示,G1,R19(1-28)组骨痂的改建和重塑优于对照组,略差于hPTH(1-34)组。结论信号选择性甲状旁腺素模拟肽G1,R1(91-28)促进骨折的愈合,cAMP/PKA通路对促进骨折愈合具有重要作用。
- 袁亮林振付兆宗孟越黄志平吴秀华杨德鸿江建明
- 关键词：去势骨折愈合PKA
