河北省自然科学基金(C2012201049)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：刘静常岩林周志军赵卓寇晓艳更多>>
- 相关机构：河北大学中国科学院成都生物研究所吉林师范大学更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 优雅蝈螽精子形成过程中核的形态结构变化观察（英文）被引量：1
- 2014年
- 【目的】螽斯精子结构复杂,具有特征性的箭头状顶体,是研究昆虫精子形成的理想材料。为了研究螽斯精子形成过程中的动态变化机制,特别是细胞核的凝集机制和箭头状顶体的发生机制,本研究对优雅蝈螽Gampsocleis gratiosa精细胞和精子的细胞核进行了观察。【方法】选择发育良好的优雅蝈螽成虫精巢为研究材料,利用透射电镜技术、普通光学显微镜和荧光显微镜技术,制作光镜切片和电镜切片进行观察。【结果】根据其形态结构变化特征,将优雅蝈螽精子形成过程中的细胞核分为4个阶段:圆形核、叶形核、柱状核和成熟阶段。我们还通过常规HE染色,结合DNA特异性荧光探针DAPI,证明了圆形核时期,精细胞内具有两个明显的球状结构,一个为细胞核,另一个是原顶体;精子成熟阶段,精子尾部排出的细胞质微滴中含有DNA。【结论】优雅蝈螽精子形成过程中,精细胞的细胞核经历了显著的形态变化,精细胞核的形态变化与细胞骨架微管相关,细胞核塑形伴随着染色质的重组。本研究为进一步阐明直翅目昆虫精子形成的分子机制奠定了基础。
- 王昕常岩林赵卓郭明申
- 关键词：直翅目HE染色DAPI精子形成
- 优雅蝈螽卵巢Piwi蛋白亚家族成员GiwicDNA序列全长的克隆与生物信息学分析被引量：1
- 2013年
- 旨在进一步研究piwi基因在半变态昆虫干细胞自我更新和生殖系细胞发育中的作用。首先对实验室前期测定的优雅蝈螽(Gampsocleis gratiosa)转录组数据进行搜索,成功挑选出piwi基因的同源体,命名为giwi。通过设计特异性引物,采用巢式RT-PCR和RACE末端扩增技术克隆获得该基因cDNA序列。序列分析表明,优雅蝈螽giwi基因cDNA序列全长为3 462 bp,包含1个完整的开放阅读框2 742 bp,编码913个氨基酸,以及一个长度为111 bp的5'端非编码区和609 bp的3'端非编码区。预测的理论蛋白分子量为102.7 kD,等电点为9.55。Giwi蛋白具备Piwi蛋白亚家族全部特征,C端的保守PIWI结构域,中部的保守PAZ结构域和N端可变结构域。同源比对分析得到PIWI结构域具有类似RNA酶H活性中心的DDH三联催化模体,暗示该蛋白具有切割活性。系统发育分析指出昆虫的Piwi和Aubergine可能源于远古基因的重复事件。通过二代测序技术获得的转录组数据可以很好地服务于未来的功能基因研究。
- 刘静周志军常岩林
- 关键词：生殖干细胞PIWICDNA
- 优雅蝈螽VASA蛋白cDNA序列的克隆与生物信息学分析被引量：1
- 2015年
- Vasa基因属于DEAD-box家族,其功能主要是特定mRNA的翻译调控。在许多动物中,它都是生殖系细胞发育所必须,对生殖干细胞分化具有重要作用。为探究vasa基因在半变态类昆虫生殖系细胞发育中的作用,本研究首先从基于Illumina高通量测序平台测得的优雅蝈螽Gampsocleis gratiosa成体转录组数据中筛选出一段长度为1215 bp的vasa基因片段,进而设计引物并利用RT-PCR和RACE技术获得其c DNA序列全长,最后利用生物信息学技术进行分析。结果显示:优雅蝈螽vasa基因的c DNA序列全长3359 bp,其中,5'端非编码区82bp,3'端非编码区1306 bp,开放阅读框1971 bp编码656个氨基酸,理论蛋白相对分子量(Mw)72.3 k Da,等电点(p I)5.48。通过与Gen Bank数据库中收录的其他VASA蛋白序列比对,发现优雅蝈螽VASA蛋白具有DEAD-box蛋白家族所共有的9个保守基序,Ax TGo GKT(I)、PTRELA(Ia)、TPGR(Ib)、DEAD(Ⅱ)、SAT(Ⅲ)、LVFVE(Ⅳ)、TDVu ARGID(Ⅴ)、HRIGRTGR(Ⅵ)和Gacc Poh1Q(Q),其中,Gacc Poh1Q(Q)的第3个氨基酸残基存在显著变化,建议将Gacc Poh1Q(Q)修改为Gaxc Poh1Q(Q)。此外,优雅蝈螽VASA蛋白的N端还具有10个RG和2个RGG重复序列、起始及终止密码子附近的色氨酸(W)、C末端的7个氨基酸残基中有4个为酸性氨基酸残基(E),表明其具有ATP依赖的RNA解旋酶活性。基于氨基酸序列聚类结果显示:优雅蝈螽位于六足动物分枝末梢,与双斑蟋Gryllus bimaculatus的亲缘关系最近,这与二者的分类学地位相符。本研究表明基于短读长二代测序平台获得的转录组数据可以很好地服务于功能基因研究,所获得的优雅蝈螽vasa基因c DNA全长对于进一步深入研究VASA蛋白在半变态类昆虫生殖系细胞发育研究具有重要意义。
- 寇晓艳刘静周志军骞蕾阳石福明
- 关键词：VASA基因转录组DNA
