河北省自然科学基金(303226)
- 作品数：7 被引量：3H指数：1
- 相关作者：秦建华赵月兰康桂英包永占顾小龙更多>>
- 相关机构：河北农业大学内蒙古民族大学河北省畜牧兽医研究所更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学文化科学更多>>
- 抗堆型艾美耳球虫子孢子ScFv-PE40重组毒素活性的测定被引量：1
- 2010年
- 将诱导获得的可溶性表达产物抗堆型艾美耳球虫子孢子ScFv-PE40重组毒素,加入含有脱囊后的子孢子的1640培养液中,观察14h内活动的子孢子数目和活动性的变化,结果与对照组相比,加入重组毒素组的活动子孢子数目明显减少(P<0.05),活动性明显降低,提示重组毒素对鸡堆型艾美耳球虫子孢子具有较强的杀灭作用。从而为鸡堆型艾美耳球虫病的免疫控制研究提供技术手段和理论依据。
- 王建永赵月兰秦建华
- 关键词：堆型艾美耳球虫重组免疫毒素
- 鸡堆型艾美耳球虫单链抗体基因的构建及表达
- 2008年
- 轻链可变区和重链可变区基因产物等摩尔浓度混合后,用重叠延伸拼接法扩增出单链抗体基因,再用带限制性内切酶位点的引物(NcoⅠ和HindⅢ)扩增出带有特定酶切位点的单链抗体基因片段。NcoⅠ和HindⅢ双酶切单链抗体与表达载体pET-22b(+),用回收试剂盒回收酶切后的单链抗体与表达载体pET-22b(+)基因片段,用连接试剂盒将单链抗体与表达载体pET-22b(+)基因片段连接,并将连接产物转化感受态细胞JM109。氨苄青霉素筛选阳性重组子,以T7promoter/T7terminator primer进行菌落PCR鉴定,测定正确后,37℃摇菌扩增,测菌浓度至D600为0.6时,加入IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE初步检测。SDS-PAGE检测显示其相对分子质量是31 000,与预期结果一致,证明单链抗体基因在大肠杆菌中得到表达。
- 康桂英赵月兰秦建华郭红斌包永占张宁郭莉
- 关键词：堆型艾美耳球虫单链抗体可变区
- 堆型艾美耳球虫单链抗体-PE40重组免疫毒素的构建被引量：1
- 2008年
- 用HindⅢ对已构建的质粒pT-PE40和原核表达载体pET22-ScFv进行单酶切,回收纯化1 101 bp的PE40基因片段并将其亚克隆至pET22-ScFv载体中,构建重组免疫毒素表达质粒pET22-ScFv-PE40。将该质粒转化入感受态大肠杆菌J M109中增殖,提取质粒后用SalⅠ和NotⅠ进行双酶切鉴定,得到了1 114 bp和6 181 bp目的基因片段。测序鉴定PE40的插入方向,选取以PE40基因5′端与ScFv基因3′端连接的重组质粒,构建了抗堆型艾美耳球虫重组免疫毒素质粒pET22-ScFv-PE40。抗堆型艾美耳球虫重组质粒pET22-ScFv-PE40经1 mmol/LIPTG诱导,在大肠杆菌中表达约68 000的目的蛋白。使用抗PE多克隆抗体对目的蛋白进行蛋白印迹分析,结果表达产物与抗PE多克隆抗体发生抗原抗体反应,证明融合基因得到表达。
- 顾小龙秦建华赵月兰左玉柱康桂英包永占刘红彬
- 关键词：堆型艾美耳球虫单链抗体重组免疫毒素
- 绿脓杆菌ATCC27853外毒素PE40基因的扩增与测序被引量：1
- 2006年
- 目的扩增绿脓杆菌ATCC27853外毒素基因PE40,并对PCR产物进行测序鉴定,为获得用于构建分子导向药物的毒素弹头基因PE40奠定基础。方法采用PCR技术,以绿脓杆菌ATCC27853基因组DNA为模板,扩增PE40基因并测序。用DNASTAR软件将测得的序列与GenBank中的国际标准产毒株PA103的PE40基因序列进行比较。结果扩增出目的基因片断,长度为1231bp。测序表明,ATCC27853与PA103核苷酸同源性为98%,产生了7个碱基的突变,突变碱基导致第364位的天冬酰胺变成丝氨酸,第506位的丝氨酸变成色氨酸,第515位的丝氨酸变成甘氨酸。但产生变化的3个氨基酸均不是文献报道中的重要活性位点。结论产生变化的3个氨基酸不会对PEA的酶活性及细胞毒性产生很大影响,绿脓杆菌ATCC27853的PE40基因可用作分子导向药物的弹头。
- 顾小龙秦建华张宁郭莉
- 鸡堆型艾美耳球虫特异性单抗轻、重链可变区基因的克隆与序列测定
- 2009年
- 将已扩增出的鸡堆型艾美耳球虫特异性单抗轻、重链可变区基因进行纯化,并用纯化的2基因片段与pMD-18T载体连接,将重组载体转化于感受态细胞JM109,筛选出阳性重组子,提取阳性重组子质粒并进行测序。得到单抗轻、重链可变区的基因序列。轻链基因为312 bp,重链基因为381 bp,为单链抗体基因的构建及免疫毒素的构建奠定了基础。
- 赵月兰郭红斌秦建华康桂英张磊包永占
- 关键词：单抗轻链重链可变区基因
- 鸡堆型艾美耳球虫特异性单抗重链可变区基因的克隆与测序
- 2006年
- 提取堆型艾美耳球虫子孢子杂交瘤细胞总RNA,进行RT PCR,扩增出重链可变区基因。将已扩增出的鸡堆型艾美耳球虫特异性单抗重链可变区基因片段与pMD 18T载体连接,重组载体转化于感受态细胞JM109,筛选出阳性重组子,提取阳性重组子质粒并进行测序,得到单抗重链可变区的基因序列,为单链抗体基因的构建及免疫毒素的构建奠定了基础。
- 康桂英秦建华任曙光
- 关键词：堆型艾美耳球虫单抗可变区
- 堆型艾美耳球虫特异性单抗轻重链可变区基因的制备
- 2007年
- 秦建华汪明康桂英赵月兰包永占李艳琴
- 关键词：可变区基因堆型艾美耳球虫轻链基因工程抗体重链可变区
