天津市自然科学基金(07JCYBJC08100)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 小鼠P311蛋白与类赖氨酰氧化酶-1相互作用的鉴定
- 2010年
- P311是利用抑制差减杂交技术从小鼠肺组织中筛选到的一个肺泡发育上游调节基因.它高水平表达于肺泡发育的相关阶段,而在慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者肺组织中表达水平大大下降.为深入探讨P311蛋白的作用机制,构建pGBKT7-P311诱饵表达载体,利用酵母双杂交技术,从小鼠肺组织cDNA文库中筛选出P311相互作用蛋白类赖氨酰氧化酶-1(lysyl oxidase-like 1,Loxl-1).并通过体内外免疫共沉淀及双分子荧光互补实验进行验证.为进一步研究P311蛋白的生物学功能提供新的思路。
- 周小海刘宇胡乃月王春燕孙月红薛涤赵立青
- 关键词：肺发育酵母双杂交
- 神经元蛋白3.1结合蛋白酵母双杂交筛选体系的建立
- 2012年
- 神经元蛋白3.1(P311)是肺泡发育的上游调节因子。以pEGFP-P311重组质粒为模板,利用PCR方法扩增P311基因编码序列。通过Nde I和BamH I位点插入诱饵载体pGBKT7,构建重组诱饵载体pGBKT7-P311。重组体转化酵母菌AH109进行自激活和毒性检测,结果 DNA-BD-P311融合蛋白无单独激活报告基因作用,对酵母菌亦无毒性。以出生11 d小鼠肺组织为材料,提取总RNA。逆转录产生单链cDNA,通过长距离PCR进行扩增。扩增产物ds cDNA电泳后可见大小为0.2～3.0 kb间的弥散状分布条带,说明文库cDNA可满足筛选要求。诱饵载体pGBKT7-P311的构建及相应小鼠肺组织cDNA文库的建立,为进一步利用酵母双杂交技术探讨P311功能奠定了基础。
- 周小海王春燕刘宇胡乃月赵立青
- 关键词：酵母双杂交CDNA文库
- 神经元蛋白3.1结合蛋白的筛选与鉴定被引量：1
- 2010年
- 哺乳动物肺组织发育的基本模式总体分为上皮分支的形态发生和分隔膜的形成两个部分.基因p311是克隆到的一个在分隔膜形成阶段特异表达的基因,可能在肺泡发育中起重要作用.为进一步探讨神经元蛋白3.1(P311)对肺发育过程的影响,构建了小鼠肺组织cDNA文库,以融合Gal4 DNA结合结构域的重组P311蛋白为诱饵,利用酵母双杂交技术从文库中筛选P311结合蛋白.通过免疫共沉淀和双分子荧光互补等技术进一步验证,SPARC(secreted protein,acidic and rich incysteine)被确定为P311相互作用蛋白.进一步的研究发现,SPARC在肺组织中具有与P311相似的表达时序特征,双重免疫组织化学染色显示SPARC和P311在小鼠肺组织中共定位于肺泡上皮细胞和肌成纤维细胞中.提示P311可能通过与SPARC的相互作用影响肺泡发育.
- 周小海刘宇胡乃月王春燕赵立青
- 关键词：肺发育SPARC酵母双杂交
