广东省自然科学基金(7301438)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 体外培养鉴定恒河猴结膜上皮细胞的研究
- 2009年
- 【目的】通过在体外培养鉴定恒河猴结膜上皮细胞,探讨结膜上皮细胞的正常的生长环境,为深入研究眼表疾病的发病机理奠定基础。【方法】取健康恒河猴结膜上皮在体外进行分离培养,通过组织块培养法进行原代培养,传代培养后进行鉴定。分别采用倒置显微镜观察,细胞免疫化学,以及RT-PCR技术进行鉴定。【结果】恒河猴结膜上皮细胞在24 h内从组织块爬出,上皮细胞成层状向周边铺展,平均7 d左右细胞可以融合成单层。原代培养生长的细胞以结膜上皮细胞为主,混杂有少许的成纤维细胞。传至第3代细胞,基本纯化为上皮细胞,无成纤维细胞混杂。原代和第1、2、3代的结膜上皮细胞,皆呈现细胞胞浆粘蛋白4和角蛋白4阳性。但是,原代的部分细胞呈现MUC5AC和角蛋白7染色阳性,第1代少数细胞染色阳性,而第3代细胞基本上未见阳性细胞。原代培养的细胞进行RT-PCR检测,显示421 bp和632 bp明亮的特异性条带。【结论】对恒河猴结膜上皮体外取材培养,可以获取纯度较高的结膜上皮细胞,其生理特征与体内相同,可以在体外模拟类似的眼表环境。
- 卢蓉张新春黄丹平黄冰彭展
- 关键词：结膜上皮细胞体外培养恒河猴
- 恒河猴皮肤干细胞的体外培养纯化与鉴定
- 2007年
- 探索恒河猴皮肤干细胞的体外培养及纯化条件,为进一步的研究奠定基础.通过组织块培养法和消化培养法在体外培养恒河猴表皮细胞,然后用Ⅳ型胶原吸附法吸附20min,获得快吸附细胞.对快吸附细胞进行克隆培养,并进行免疫细胞化学双标染色、RT-PCR鉴定β1整合素和角蛋白15的表达,用流式细胞仪鉴定纯化前后的细胞中β1整合素和角蛋白15的阳性细胞比例,并通过透射电镜观察细胞的超微结构.组织块培养法和消化培养法均可获得表皮细胞,Ⅳ型胶原纯化后的细胞胞体较小,饱满,核/浆比例大,细胞镶嵌状排列.细胞克隆分析显示,细胞全克隆生长率高.细胞免疫荧光显示,分选后的细胞显示β1整合素和角蛋白15阳性.RT-PCR检查呈现β1整合素和角蛋白15的特异性片段.流式细胞仪检查显示,纯化前的细胞中角蛋白15阳性细胞占总细胞中的比例为8%,β1整合素阳性细胞的比例为10.7%;纯化后,角蛋白15阳性细胞的比例为89.4%,β1整合素阳性细胞的比例为88.5%.通过组织块培养法和消化培养法均可培养获得活性良好的表皮细胞,Ⅳ型胶原吸附法是一种简便、有效的皮肤干细胞分离方法,可以为进一步的眼表上皮替代重建眼表提供足量的高纯度的干细胞建立可靠的物质基础.
- 卢蓉张新春黄丹平黄冰宋革高楠王智崇彭展葛坚
- 关键词：干细胞纯化
