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浙江省自然科学基金(LY12C01001)

作品数：3 被引量：2H指数：1
相关作者：陆承平孔繁德宁雪顾鸣袁辰刚更多>>
相关机构：浙江清华长三角研究院南京农业大学厦门出入境检验检疫局更多>>
发文基金：浙江省自然科学基金国家质检总局科技计划项目更多>>
相关领域：农业科学医药卫生更多>>

文献类型

  • 3篇中文期刊文章

领域

  • 2篇农业科学
  • 1篇医药卫生

主题

  • 2篇桃拉综合征病...
  • 2篇病毒
  • 1篇多克隆
  • 1篇多克隆抗体
  • 1篇荧光
  • 1篇荧光定量
  • 1篇荧光定量PC...
  • 1篇噬菌体
  • 1篇噬菌体展示
  • 1篇噬菌体展示肽...
  • 1篇噬菌体肽库
  • 1篇噬菌体肽库筛...
  • 1篇肽库
  • 1篇结合肽
  • 1篇菌体
  • 1篇抗体
  • 1篇抗体制备
  • 1篇克隆
  • 1篇克隆表达
  • 1篇弧菌

机构

  • 3篇浙江清华长三...
  • 2篇南京农业大学
  • 2篇厦门出入境检...
  • 1篇集美大学
  • 1篇上海出入境检...

作者

  • 2篇孔繁德
  • 2篇陆承平
  • 1篇吴玉娟
  • 1篇徐淑菲
  • 1篇林立
  • 1篇彭小莉
  • 1篇袁辰刚
  • 1篇顾鸣
  • 1篇宁雪

传媒

  • 2篇中国免疫学杂...
  • 1篇微生物前沿

年份

  • 1篇2015
  • 2篇2013
共 3 条 记 录，以下是 1-3
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排序方式：
桃拉综合征病毒VP1高变区蛋白抗体制备及初步特性分析被引量：1
2015年
目的:制备高效价的桃拉综合征病毒主要结构蛋白VP1高变区蛋白抗体,分析其免疫特性,为研究免疫诊断试剂做参考。方法:将p ET-VP1重组载体转化入大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下进行表达。重组VP1蛋白纯化后免疫新西兰家兔,用琼脂扩散试验及ELISA检测抗体效价,用与VP1纯化蛋白特异性结合的单克隆噬菌体做竞争抑制试验。结果:p ETVP1重组蛋白在大肠杆菌BL21中呈可溶性高效表达。抗血清经琼扩试验鉴定效价达1∶26,ELISA效价达1∶217。与VP1蛋白特异结合的单克隆噬菌体能阻断部分抗血清与VP1蛋白的结合活性,但不影响最终检测阳性的判断。结论:制备的VP1高变区蛋白抗体效价高,VP1蛋白少数区域的位点变异并不影响多克隆抗体的结合活性,可用作免疫检测诊断试剂。
黄新新袁辰刚宁雪顾鸣蔡强刘锐陆承平
关键词：桃拉综合征病毒VP1蛋白多克隆抗体
桃拉综合征病毒CP2蛋白的克隆表达及其结合肽的噬菌体肽库筛选被引量：1
2013年
目的：克隆表达出桃拉综合征病毒（TSV）主要衣壳蛋白CP2蛋白,并通过对噬菌体随机肽库的淘选,得到与CP2蛋白结合的相关多肽,以探讨CP2蛋白与配体作用的特异位点。方法：根据重组质粒pMD-CP2的核苷酸序列,设计并合成了一对引物,扩增TSV CP2基因高变区376~1 371 bp,扩增片段插入pET-32构建成原核表达载体pET-CP2。该重组载体在IPTG诱导下进行可溶性表达,SDS-PAGE电泳检测表达的CP2蛋白。以纯化的CP2蛋白作为筛选分子,对噬菌体展示12肽库进行亲和淘选。结果：原核表达出56 kD大小的CP2蛋白,对噬菌体12肽库4轮＂吸附-洗脱-扩增＂淘洗后,所得的噬菌体回收率逐步提高,由6.4×10-5上升到2.8×10-2,显示淘选过程对随机肽库有很好的富集效果。随机挑选第4轮淘筛后的36个单克隆噬菌体,ELISA鉴定有24个单克隆（66.6%）为强阳性。将这24个阳性克隆扩增、测序,推导随机多肽的氨基酸序列。分析发现,有7个克隆（克隆号2、6、7、9、18、20、33）完全一致,序列为HTSFCSTHLCLI,其它的几个克隆如克隆3及28序列为HCSNLFCSLDLP;克隆5为HCSHTLCALHVM;克隆26为HCNSWLCPLITD也与该7个克隆有相似的序列,经比对核心序列为HCS及LCL。结论：首次用重组的TSV CP2蛋白从噬菌体随机12肽库中筛选到特异结合的肽序列,其共有结构特征为明确CP2与结合蛋白的相互作用位点提供支持。
黄新新陆承平孔繁德蔡强
关键词：克隆表达噬菌体展示肽库
荧光定量PCR技术检测副溶血弧菌方法的建立与初步应用
2013年
目的:建立副溶血弧菌SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。方法:根据副溶血弧菌(VP)的toxR基因序列,应用primer6.0设计了1对特异性引物,进行了最佳引物浓度的确定,建立了标准曲线和溶解曲线,对所建立方法进行了特异性、灵敏度和稳定性测试,并进行了临床样本检测。结果:副溶血弧菌SYBR Green I荧光定量PCR的最佳引物浓度为0.2 µmol/L,标准曲线循环阈值和模板浓度呈良好的线性关系,相关系数R2为0.996,扩增效率E接近100%,溶解曲线特异,最低检出量为2.14个拷贝,特异性和重复性较好。临床检测结果与常规细菌分离鉴定方法符合率100%。结论:建立了特异灵敏的副溶血弧菌实时荧光定量PCR检测方法,对于加强进出口水产品中VP的检验检疫具有十分重要的意义。
孔繁德吴玉娟黄新新黄标敏彭小莉徐淑菲林立
关键词：副溶血弧菌荧光定量PCR
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