教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-04-0699)
- 作品数：12 被引量：38H指数：4
- 相关作者：胡俊波陶德定龚建平李小兰罗学来更多>>
- 相关机构：华中科技大学安徽医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大肠癌细胞周期状态与临床病理因素及细胞周期蛋白水平的相关性被引量：3
- 2011年
- 目的研究大肠癌组织的细胞周期分布状态与临床病理因素的关系,以及和细胞周期调节蛋白的表达水平是否相关。方法应用流式细胞术检测45例大肠癌临床标本细胞周期中G0/G1、S、G2/M期所占的比例,并检测每例标本的细胞周期蛋白CyclinD1、CyclinE、CyclinA、CyclinB1的表达水平。结合临床病理因素进行统计分析。结果肿瘤细胞G0/G1、S、G2/M期所占的比例和患者性别、年龄、肿瘤部位、病理分级、浸润深度、淋巴结转移、Dukes分期均无明显相关性,均P>0.05。G0/G1期的比例与CyclinD1、CyclinE,S期与CyclinE、CyclinA,G2/M期与CyclinA的表达水平均不相关,均P>0.05;但是G2/M期的比例与CyclinB1的表达水平正相关,r=0.335,P=0.035。结论大肠癌肿瘤细胞的周期分布和临床病理因素无关,肿瘤细胞周期蛋白的表达特点与体外培养的细胞系不同,表现得更加复杂多样。
- 于冬冬张永红邹游李小兰肖徽陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：大肠肿瘤细胞周期细胞周期蛋白
- MST1基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的影响被引量：4
- 2008年
- 目的:探讨MST1(mammalian sterile 20-like kinase 1)基因对人乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的影响。方法:构建含有标签蛋白FLAG的MST1质粒pCMV-FLAG-MST1;将构建好的pCMV-FLAG-MST1质粒在脂质体lipofectamine 2000的介导下转染MCF-7细胞,通过Western印迹法分析MST1在MCF-7中的表达情况;分别在转染后12、24、36和48h通过MTT法观察MST1对细胞增殖的影响;转染后36h加入5-溴-2’脱氧尿嘧啶(bromodeoxy uridine,BrdU),通过其掺入比率显示MST1对细胞增殖的影响;转染后36h加入顺铂,作用14h后通过AnnexinⅤ检测其对细胞凋亡的影响。结果:成功构建pCMV-FLAG-MST1质粒;MTT及BrdU检测显示,转染pCMV-FLAG-MST1质粒后MCF-7细胞增殖明显受到抑制;Annexin Ⅴ检测结果提示,高表达MST1后,细胞的凋亡率相对增高。结论:在乳腺癌细胞MCF-7中高表达MST1,不仅可以抑制细胞增殖,还可以促进细胞凋亡。
- 罗学来李兆明严群李小兰陶德定龚建平胡俊波
- 关键词：乳腺肿瘤细胞增殖细胞凋亡细胞MCF-7
- 低表达蛋白HAX1对Hela细胞凋亡的影响被引量：2
- 2009年
- 目的观察低表达蛋白HAX1对Hela细胞维持线粒体膜电位及细胞凋亡的影响。方法利用RNA干扰技术抑制Hela蛋白HAX1表达3d后，利用阳离子脂质荧光染料JC-I标记法和流式细胞仪检测并比较实验组（蛋白HAX1低表达组）及对照组细胞线粒体膜电位变化趋势。加入H2O2（2mmol／L）诱导细胞凋亡3h后利用Annexin V-FITC法检测并比较两组细胞凋亡率。结果对照组细胞线粒体膜电位下降百分比均值为9．52％，实验组细胞线粒体膜电位下降百分比均值为21．12％，实验组细胞线粒体膜电位降低比率多于对照组（P〈0．05）。对照组H2O2（2mmol／L）诱导细胞凋亡率均值为21．80％，实验组H2O2（2mmol／L）诱导细胞凋亡率均值为31．73％。实验组细胞凋亡率高于对照组（P〈0.05）。结论低表达蛋白HAX1不仅可以降低Hela细胞线粒体膜电位稳定性，而且促进Hela凋亡。
- 刘韦成严群罗学来李兆明王桂华邓豫李小兰陶德定胡俊波
- 关键词：RNA干扰线粒体膜电位脱噬作用
- hSav1蛋白高表达对Mst1介导的细胞凋亡的影响
- 2009年
- 目的观察hSav1蛋白高表达对Mst1介导的细胞凋亡的影响，探讨hSav1在Mst1介导的细胞凋亡中的作用。方法构建蛋白hSav1的载体pCMV—HA—hSav1与蛋白Mst1的载体pcDNA／4TO—Flag-Mst1，共转染HeLa细胞。采用相应抗体做二者的免疫共沉淀，以证实蛋白hSav1和Mst1之间的相互作用；应用细胞免疫荧光共定位，进一步证实二者之间的相互作用。在HeLa细胞中，分别单独或同时转染质粒pcDNA／4TO-Flag—Mst1和pCMV—HA—hSav1，转染36h后，加入凋亡诱导剂顺铂（50μmol／L）作用14h。应用磷脂结合蛋白碘化丙啶（Annexin V／PI）法检测细胞凋亡，观察蛋白hSav1高表达对Mst1介导的细胞凋亡的影响。结果载体pCMV-HA—hSav1与pcDNA／4TO—Flag-Mst1构建成功，测序结果表明无突变或缺失。免疫共沉淀结果显示，蛋白hSav1可以在Mst1抗体的免疫沉淀物中检测出来，蛋白Mst1可以在hSav1抗体的免疫沉淀物中检测出来。细胞免疫荧光的结果显示，二者的荧光在细胞内存在共定位，并可充分融合。HeLa细胞中，单独Mst1蛋白高表达组的细胞凋亡率为24．5％±2．4％，单独hSav1蛋白高表达组与对照组比较，无明显细胞凋亡。蛋白Mst1和hSav1高表达组的细胞凋亡率为39．3％±4．0％，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论蛋白hSav1与Mst1在HeLa细胞内存在相互作用，蛋白hSav1高表达可明显促进由蛋白Mst1介导的细胞凋亡。
- 李兆明刘韦成董硕罗学来李小兰陶德定龚建平胡俊波
- 关键词：蛋白相互作用细胞凋亡HELA细胞
- 奥沙利铂诱导人骨髓造血细胞凋亡及DNA损伤修复被引量：3
- 2015年
- 目的探讨在细胞毒药物奥沙利铂诱导下,人骨髓CD34^+前体造血细胞与CD34^-成熟造血细胞发生细胞凋亡及DNA损伤修复信号通路上相关基因表达的情况。方法采用免疫磁珠法分选出16例人骨髓单个核细胞中的CD34^+及CD34^-细胞,并应用流式细胞术检测其纯度。用奥沙利铂(终末浓度为10μg/mL)诱导2种细胞凋亡,检测诱导不同时间的2种细胞凋亡率的差异。提取细胞RNA,并利用基因芯片技术,分析比较药物诱导前后的CD34^+及CD34^-细胞中DNA损伤修复信号通路相关基因的表达情况。结果16份骨髓样本CD34^+阳性率为(4.75±1.82)%;免疫磁珠法分选后,流式细胞术检测CD34^+细胞的纯度为(81.24±5.68)%,所得CD34^-细胞的纯度为(97.67±1.21)%。CD34^+细胞在经过奥沙利铂诱导后4、8、12h,凋亡率分别为(27.44±4.12)%、(53.58±7.89)%,(84.65±6.20)%,CD34^-细胞在诱导后4、8、12h,凋亡率分别为(18.40±3.07)%、(39.11±5.28)%、(71.65±7.73)%,各时间点2种细胞的凋亡率差异均有统计学意义(均P<0.05)。基因芯片结果显示,在加入奥沙利铂诱导前,CD34^+细胞与CD34^-细胞表达差异2倍以上的基因有9种,其中前者有7种基因表达高于后者,2种基因表达低于后者,在奥沙利铂诱导8h后,CD34^+细胞与CD34^-细胞表达差异2倍以上的基因有14种,均为前者高于后者。结论在奥沙利铂诱导下,骨髓前体CD34^+细胞和成熟的CD34^-细胞相比,其DNA损伤修复系统相关基因表达水平较高,但更易于发生细胞凋亡。
- 邹游黄丹李小兰肖徽陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：CD34细胞凋亡DNA损伤奥沙利铂
- 胃癌中CDK1和CDK2的表达及预后意义被引量：8
- 2010年
- 目的探讨胃癌中CDK1和CDK2的表达情况及预后意义。方法应用免疫组化S-P法对48例各期胃癌和癌旁正常组织中CDK1和CDK2的表达情况进行检测。结果早期胃癌中CDK1和CDK2中表达较低(P<0.05),进展期胃癌中表达更高(P<0.05)。结论CDK1和CDK2可望成为胃癌早期预后指标和分子治疗的靶标。
- 颜伟张永红何乐亚魏欣陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：CDK1CDK2预后因子胃癌
- 穿膜融合多肽TAT-N24对S180腹水瘤生长的抑制作用被引量：8
- 2010年
- 目的观察穿膜融合多肽TAT-N24对S180腹水瘤生长的抑制作用。方法建立S180腹水瘤小鼠模型,以不同剂量TAT-N24腹腔内注射,观察TAT-N24对腹水瘤小鼠腹水生成的影响,流式细胞仪检测腹水瘤细胞细胞周期进程,应用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测TAT-N24对细胞DNA合成的影响,验证TAT-N24的抗肿瘤作用。结果腹水测量结果显示,模型对照组腹水为(8.3±2.3)mL,实验组分别为:TAT-N245μL组(3.2±1.2)mL,TAT-N2420μL组(2.7±1.0)mL,TAT-N24100μL组(1.3±0.2)mL;结果提示给予腹腔注射TAT-N24能显著抑制腹水的生成(P<0.05);BrdU/PI双掺入法检测细胞DNA合成结果显示,对照组BrdU阳性细胞数占总细胞比例为(25.86±3.54)%,而给予TAT-N24高剂量(100μL)组BrdU阳性细胞数占总细胞比例为(5.91±0.57)%,2组间差异有统计学意义(P<0.01);对照组动物腹水瘤细胞中G0/G1期细胞为(63.88±4.01)%,S期和G2/M期细胞分别为(23.93±2.91)%和(12.19±1.62)%,而TAT-N24高剂量组动物腹水瘤细胞G0/G1期细胞增加至(83.71±1.53)%,S期和G2/M期细胞分别为(7.56±1.40)%和(8.72±0.73)%,2组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论融合多肽TAT-N24能有效抑制S180腹水瘤小鼠的腹水生成,阻滞腹水瘤细胞细胞周期进程,抑制细胞DNA合成。
- 吕峰王桂华邓豫曹小年来森艳陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：S180腹水瘤磷酸肌醇3-激酶
- 蛋白hSav1和Mst1之间的相互作用被引量：3
- 2008年
- 目的探讨hSav1(human salvador1)和Mst1(Mammalian STE20-like 1)存在的相互作用,为进一步研究Mst1的功能及相关机制奠定基础。方法以Mst1cDNA全长构建诱饵蛋白载体pGBKT7-Mst1,并对其自身转录活性进行鉴定,利用酵母双杂交系统筛选人胎肝文库,挑选单克隆,从而初步筛选出与Mst1相互作用的蛋白。然后构建初步筛选出的蛋白hSav1的载体pCMV-HA-hSav1,与蛋白Mst1的载体pcDNA/4TO-Flag-Mst1共转染HEK293T细胞,利用相应抗体做二者的免疫共沉淀,以验证蛋白hSav1和Mst1之间的相互作用。其次构建pEGFP-hSav1质粒转染HEK293T,利用免疫荧光观察二者在细胞内的定位。结果以Mst1为诱饵蛋白在人胎肝文库筛选到包括hSav1在内的与之存在相互作用的蛋白。免疫共沉淀结果显示,hSav1蛋白可以在FLAG抗体的免疫沉淀物中检测出来,同样在hSav1抗体的免疫沉淀物中也能检测到蛋白Mst1。免疫荧光的结果显示二者荧光在细胞内存在共定位,二者的荧光可充分融合。结论蛋白hSav1与Mst1在哺乳细胞内存在某种相互作用,为进一步研究Mst1的功能及相关机制提供了线索。
- 罗学来李兆明严群李小兰陶德定龚建平胡俊波
- 关键词：蛋白相互作用
- 中药金克通过G_1期阻滞和诱导凋亡抑制HL-60细胞增殖被引量：3
- 2010年
- 目的研究中药金克对体外HL-60细胞系细胞周期调控方面的影响。方法使用MTT比色法检测HL-60细胞活力,使用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,使用Western blot检测细胞周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达。结果金克能通过G1期阻滞和诱导凋亡使HL-60细胞活性降低。金克作用于HL-60细胞引起剂量和时间依赖性凋亡。金克阻滞HL-60细胞在G1期的原因是CDKI蛋白(p19INK4,p21Cip/waf1和p27Kip1)表达增高,同时CDK2,CDK4,CDK6,Cyclin D1和Cyclin E表达降低。金克也引起凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2和Caspase-3的表达。结论首次证明了金克通过G1期阻滞和诱导凋亡抑制HL-60细胞的增殖,这表明金克是一个细胞周期特异性的抗癌药物。
- 张永红李永翔于冬冬陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：细胞凋亡细胞周期阻滞HL-60
- 磷脂酰肌醇-3-激酶p55γ-N末端24个氨基酸对体外培养HaCaT细胞增殖的影响被引量：1
- 2010年
- 目的观察磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)的调节亚单位p55γ-N末端24个氨基酸抑制人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞增殖的作用。方法构建含有PI3K-p55γ-N末端24个氨基酸的腺病毒载体AD-N24-GFP及对照病毒AD-GFP,感染HaCaT细胞,流式细胞仪检测细胞周期进程,应用BrdU/PI双掺入法检测其对细胞DNA合成的影响,CFDA-SE(细胞增殖示踪荧光探针)标记法检测细胞增殖情况。结果 AD-N24能有效阻滞HaCaT细胞周期进程于G0/G1期,S期和G2/M期细胞减少,AD-N24-GFP组各期细胞分布为:G0/G1期(84.18±1.73)%,S期(7.60±1.47)%,G2/M期(8.22±1.33)%,而AD-GFP组各期细胞分布为:G0/G1期(61.14±2.76)%,S期(24.54±1.29)%,G2/M期(14.32±1.61)%,空白对照组各期细胞分布为:G0/G1期(65.78±2.11)%,S期(22.22±1.92)%,G2/M期(12.00±1.19)%,AD-N24-GFP组与AD-GFP组及空白对照组间G0/G1期和S期细胞比例的差异有显著性意义(P<0.05);BrdU阳性细胞比例显示:AD-N24-GFP组R2为:(5.89±1.33)%,AD-GFP组R2为:(27.09±2.61)%,空白对照组R2为:(24.91±2.04)%,提示AD-N24能有效抑制HaCaT细胞的DNA合成;CFDA-SE检测显示AD-N24-GFP组增殖指数(PI)为:(33.60±2.52),AD-GFP组PI为:(52.47±4.41),空白对照组PI为:(55.29±7.61),提示AD-N24能有效抑制HaCaT细胞的增殖。结论在HaCaT细胞中过表达N24能有效阻滞HaCaT细胞周期进程,干预其细胞DNA合成,抑制其细胞增殖。
- 吕峰王桂华邓豫蔡少鑫胡俊波龚建平
- 关键词：磷脂酰肌醇-3-激酶细胞增殖
