哈尔滨市科技创新人才研究专项资金(2012RFXXS034)
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
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- 相关领域：化学工程更多>>
- 多聚精氨酸融合增强型绿色荧光蛋白制备方法及穿膜效果被引量：4
- 2013年
- 为了方便细胞穿膜肽R9融合蛋白的可溶性表达及功能上的研究,构建了pSUMO(小分子泛素样修饰蛋白)-R9-EGFP(增强型绿色荧光蛋白)原核表达载体。分别纯化EGFP及R9-EGFP蛋白后,作用于HepG2,细胞经流式细胞仪及激光共聚焦检测R9细胞穿膜肽的作用效果。实验结果显示在SUMO分子伴侣的作用下,R9-EGFP融合蛋白获得可溶性表达。经流式细胞仪检测,R9细胞穿膜肽可以快速有效的携带目的蛋白进入细胞内部且呈时间、剂量依赖性,大约1.5 h以后荧光强度进入平台期。共聚焦显微镜检测结果表明R9细胞穿膜肽可以有效携带EGFP进入HepG2细胞,并显示主要聚集在细胞浆内。同时体外经肝素抑制实验显示,肝素抑制R9-EGFP穿膜的效率达到50%。这些结果表明,可以利用pSUMO-R9/Ni-NTA表达纯化系统,快速、有效地表达出可溶性多聚精氨酸融合蛋白,同时R9细胞穿膜肽可以有效地携带目的蛋白进入细胞内,为进一步研究多聚精氨酸的穿膜机制提供了基础。
- 张楠白银赵景壮叶贤龙王文飞任桂萍李德山荆燕
- 关键词：融合蛋白可溶性表达
