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国家自然科学基金(30270505)

作品数:8 被引量:15H指数:2
相关作者:陈香美白雪源冯哲程根阳洪权更多>>
相关机构:中国人民解放军总医院郑州大学第一附属医院中南大学湘雅二医院更多>>
发文基金:国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金创新研究群体项目更多>>
相关领域:医药卫生生物学自然科学总论更多>>

文献类型

  • 8篇中文期刊文章

领域

  • 4篇医药卫生
  • 3篇生物学
  • 1篇自然科学总论

主题

  • 4篇细胞
  • 4篇基因
  • 3篇肾小管
  • 3篇小管
  • 2篇蛋白
  • 2篇肾病
  • 2篇肾小管上皮
  • 2篇肾小管上皮细...
  • 2篇肾脏
  • 2篇转运蛋白
  • 2篇小管上皮细胞
  • 2篇IGA肾病
  • 1篇序列对
  • 1篇亚细胞
  • 1篇亚细胞定位
  • 1篇遗传学
  • 1篇荧光
  • 1篇荧光蛋白
  • 1篇融合基因
  • 1篇三羧酸循环

机构

  • 6篇中国人民解放...
  • 1篇郑州大学第一...
  • 1篇中南大学湘雅...

作者

  • 6篇陈香美
  • 5篇白雪源
  • 3篇冯哲
  • 2篇傅博
  • 2篇付博
  • 2篇洪权
  • 2篇程根阳
  • 1篇李勰家
  • 1篇孙林
  • 1篇肖力
  • 1篇蔡广研
  • 1篇刘伏友
  • 1篇朱晗玉
  • 1篇刘章锁
  • 1篇侯剀
  • 1篇张雪光
  • 1篇师锁柱
  • 1篇吴杰
  • 1篇汪杨

传媒

  • 2篇中华肾脏病杂...
  • 1篇生物技术通讯
  • 1篇生物化学与生...
  • 1篇细胞生物学杂...
  • 1篇老年医学与保...
  • 1篇中南大学学报...
  • 1篇Scienc...

年份

  • 2篇2011
  • 2篇2008
  • 1篇2004
  • 3篇2003
8 条 记 录,以下是 1-8
排序方式:
肾脏器官衰老机制的研究进展
2011年
器官衰老是连接细胞衰老和生物体整体衰老的桥梁。肾脏是人体中衰老较快的器官之一,表现为功能减退、修复能力下降、易于向病态转化。本文介绍了近年来肾脏衰老机制研究的新进展。
白雪源蔡广研陈香美
关键词:衰老机制器官衰老肾脏细胞衰老生物体
人钠/二羧酸协同转运蛋白3基因调控肾小管上皮细胞线粒体膜电位的研究被引量:1
2003年
目的 观察人钠/二羧酸协同转运蛋白3(hNaDC3)对人肾脏近曲小管上皮细胞(HKC)线粒体膜电位的变化及其对细胞能量代谢的影响。方法 应用亚克隆技术构建正义pcDNA3-hNaDC3和反义pcDNA3-AhNaDC3两个真核表达载体,通过脂质体LipofectAMINE将pcDNA3-hNaDC3及pcDNA3-AhNaDC3转染至HKC细胞。克隆筛选后,用RT-PCR、Northern印迹及Western印迹鉴定外源基因的整合和表达。荧光探针JC-1观察各细胞系线粒体膜电位的变化。结果 外源hNaDC3基因稳定整合到HKC细胞基因组中,并获得高、低表达。转染正义hNaDC3 cDNA的HKC细胞线粒体膜电位降低,JC-1在线粒体内形成单体,发出绿色荧光;而转染反义hNaDC3 cDNA的HKC细胞线粒体膜电位略微升高,JC-1形成聚合体,发出红色荧光。结论 hNaDC3过表达引起线粒体膜电位降低,反义hNaDC3则使线粒体膜电位略微升高。提示NaDC3可能通过使线粒体膜电位下降,参与了细胞能量代谢。
程根阳陈香美洪权冯哲付博白雪源朱晗玉
关键词:基因调控肾小管上皮细胞线粒体膜电位
大鼠高亲和力二羧酸转运蛋白的克隆表达及细胞内定位
2008年
目的:克隆大鼠高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白(SDCT2)的全长cDNA,并明确其在肾小管上皮细胞内的定位表达情况。方法:从大鼠肾组织中提取总RNA,用带有8肽FLAG标签的PCR引物通过RT-PCR技术扩增出SDCT2全长基因并测序,将其插入真核表达载体中构建SDCT2真核表达载体,然后将它们转染到肾小管上皮细胞LLC-PK1中表达,并用激光共聚焦显微镜观察该蛋白的亚细胞定位情况。结果:扩增出2kb的SDCT2全长基因,Westernblot表明SDCT2基因在LLC-PK1细胞中得到了正确的表达;共聚焦显微镜分析显示正常SDCT2蛋白主要定位于细胞膜上,与生物信息学的预测结果一致;为了比较不同连接温度对重组DNA连接效率的影响,观察了3种连接温度下的转化效率,结果显示温度循环法的连接效率明显比其他2种常规连接温度要高。结论:高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白全长基因被成功克隆,其主要表达于肾小管上皮细胞膜上。
侯剀白雪源陈香美冯哲傅博
关键词:三羧酸循环肾小管亚细胞定位
Expression of EGFP/SDCT1 fusion protein,subcellular localization signal analysis,tissue distribution and electrophysiological function study被引量:1
2004年
Full-length cDNA gene of sodium-dependent dicarboxylate co-transporter protein 1 (SDCT1) is cloned from normal human kidney tissue and inserted into EGFP (enhanced green fluorescent protein) expression vector along with N-terminal and C-terminal truncated SDCT1 genes, so to construct the eukaryotic expression vectors of EGFP/SDCT1 fusion proteins, which are transfected into human renal tubular epithelial cells (HKC). Subcellular localizations of these fusion proteins are observed by laser confocal microscope to determine the localization signal of the SDCT1 protein. Duplex PCR analysis validates that the fusion protein genes have been in- tegrated into the genome of HKC. Western blot indicates that the fusion proteins have been ex- pressed in HKC. Confocal microscopy analysis shows that human SDCT1 predominantly locates on the plasma membrane, which is consistent with the results predicted by bioinformatics ap- proach; in HKC transfected with N-terminal truncated SDCT1 gene, the green fluorescence is mainly distributed on the plasma membrane; in HKC transfected with C-terminal truncated SDCT1 gene, the green fluorescence is mainly distributed in the cytoplasm. EGFP/SDCT1 mRNAs obtained by in vitro transcription are microinjected into Xenopus laevis oocytes for ex- pression and the trans-membrane currents are measured by using two-microelectrode volt- age-clamp technique. Na+ inward currents are present on cellular membrane of the injected oo- cytes. Immunohistochemical staining shows that human SDCT1 proteins are expressed on lu- men membrane of the renal proximal tubule, but are negative in distal tubule, collecting duct, renal interstitium and glomerulus. The above-mentioned studies suggest that human SDCT1 protein is located on the lumen membrane of the renal proximal tubule, the C-terminal sequence of the SDCT1 is required for delivery and targeting localization, and the plasma membrane lo- calization signal of the SDCT1 protein maybe locate in the C-terminal sequence.
BAI XueyuanCHEN XiangmeiFEN ZheWU DiHOU KaiCHENG GenyangPENG Lixia
人SDCT2β3′-非翻译区基因表达负调控序列对mRNA稳定性的影响被引量:1
2008年
为探索人高亲和力钠离子依赖性二羧酸转运蛋白基因(high affinity sodium-dependent dicarboxylate transporter,SDCT2)3′端非翻译区是否在基因表达调控中起作用,首先通过生物信息学分析发现,在SDCT2βmRNA的3′端非翻译区内存在585nt的AU富含区(AU-rich region,AUR),其中包括3个AU富含元件(AU-rich element,ARE),然后将SDCT2β的AU富含区DNA片段插入报告基因GFP表达载体pcDNA-GFP的下游,构建pcDNA-GFP-AUR表达载体并转染HEK293、HKC和LLC-PK1细胞系,用Western blot和流式细胞仪检测细胞中GFP的表达水平.结果显示,SDCT2β的AU富含区序列可显著降低GFP的表达水平(P<0.01).利用放线菌素D阻断RNA转录后,每隔2h从稳定转染的HEK293细胞中提取总RNA,用RNA印迹分析GFP mRNA的稳定性.结果显示GFP-AURmRNA较GFP mRNA不稳定.这些结果提示,在SDCT2β3′非翻译区的AU富含区内存在基因表达负调控区,该区可降低mRNA的稳定性、促进mRNA的降解,从而在转录后水平调控基因的表达.
白雪源陈香美傅博汪杨
关键词:转录后调控MRNA稳定性
绿色荧光蛋白与人肾脏NaDC3融合基因的构建及其在肾小管上皮细胞中的定位被引量:9
2003年
本文采用RT-PCR方法从人的正常肾组织中扩增出hNaDC3基因全长cDNA序列,采用基因重组技术将hNaDC3基因和绿色荧光蛋白基因融合,通过真核表达质粒-脂质体介导,导入LLG-PK1细胞系,激光共聚焦显微镜动态观察GFP-hNaDC3的定位情况。结果显示pEGFP-C3空白质粒转染的LLC-PK1细胞表达了GFP,GFP在胞内分布以核浆为主,呈均匀致密的细颗粒荧光,胞核染色强,核仁荧光稀少,界线清楚。而pEGFP-C3-hNaDC3转染细胞株的绿色荧光蛋白,转染后第1天混合分布于细胞浆和细胞膜,以粗颗粒荧光为主,两者界限不清楚,胞浆中可见未染色的圆形空洞,未见胞核染色;第3天主要聚集于细胞膜,核周的胞浆中可见粗颗粒荧光物质,胞浆和胞膜界线清楚,胞核亦未见绿色荧光蛋白;第5天清晰聚集于细胞膜,细胞膜连接呈网状。因此hNaDC3蛋白在细胞质中生成后,定位于细胞膜并稳定表达。
程根阳陈香美白雪源冯哲刘章锁付博洪权
关键词:绿色荧光蛋白转运蛋白
钠依赖二羧酸转运蛋白在IgA肾病患者肾组织表达的研究被引量:3
2003年
目的 研究人钠依赖二羧酸转运蛋白(human Na^+/dicarboxylate cotransporter,NaDC)在IgA肾病患者肾组织内表达的变化,探讨其在IgA肾病进展过程中的作用。方法 34例IgA肾病肾活检标本依据病理改变程度分为5级,同时对肾小管间质病变进行半定量分析。应用免疫组织化学技术观察肾组织内NaDC1和NaDC3的表达变化,并与临床指标进行相关分析。结果 随着IgA肾病病理改变程度的加重,肾小管间质病变亦加重。Ⅳ和Ⅴ级病变患者的24h尿蛋白定量、血肌酐和尿NAG酶均显著升高,尿渗透浓度显著下降(P<0.05)。NaDC1表达于近端肾小管上皮细胞的刷状缘上,与Ⅰ~Ⅲ级病例相比,Ⅳ和Ⅴ级病例中的NaDC1的表达减少,其中以Ⅴ级表达最少(P<0.05)。NaDC3表达于近端肾小管上皮细胞的基底侧膜上,与Ⅰ~Ⅱ级病例相比,Ⅱ~Ⅳ级病例中的NaDC3的表达增多,在Ⅴ级病例中,其表达显著减少(P<0.05)。肾小管NaDC1表达与尿NAG酶呈负相关(r=-0.627,P<0.05)。结论 钠依赖二羧酸转运蛋白的表达变化在IgA肾病进展过程中发挥重要的作用。
师锁柱陈香美张雪光吴杰
关键词:IGA肾病肾组织
IgA肾病分子遗传学研究新进展被引量:1
2011年
IgA肾病(immunoglobulin A nephropathy,IgAN)是最常见的原发性肾小球肾炎,也是引起终末期肾脏疾病的一个重要原因。其具体的发病机制尚不明确,许多研究证实其与遗传易感性有关,属于多基因病。连锁分析发现IgAN与染色体6q22-23和2q36等连锁,关联研究发现多个候选基因(如血管紧张素转换酶基因、Fcα受体基因、人类白细胞抗原基因等)与IgAN相关。近年来,随着分子遗传学和人类基因组计划的进展,遗传因素在IgAN中的致病作用越来越受到人们的关注。
李勰家肖力孙林刘伏友
关键词:IGA肾病发病机制候选基因全基因组关联分析
共1页<1>
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