广东省自然科学基金(8451018201000858)
- 作品数：7 被引量：39H指数：2
- 相关作者：张雅洁龙捷黄榕权谢晓斌谢燕清更多>>
- 相关机构：广州医科大学广州医学院广州市第一人民医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金广州市属高校科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 短肽RGDSY-CTTHWGFTLC对乳腺癌细胞转移和增殖的影响被引量：2
- 2013年
- 目的研究短肽RGDSY-CTTHWGFTLC对乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤能力,为开发更高效的肽类抗肿瘤药物奠定实验理论基础。方法 (1)化学合成目标短肽RGDSY-CTTHWGFTLC(简称RGDSY-CTT),阳性对照肽CTTHWGFTLC(简称CTT),阴性对照肽STTHWGFTLS(简称STT);(2)将MCF-7细胞接种于预涂布纤连蛋白的96孔板,与短肽共孵育2 h,检测RGDSY-CTT对MCF-7细胞粘附能力的影响;(3)将MCF-7细胞接种于预铺基质胶的Transwell小室,与短肽共孵育16 h,检测RGDSY-CTT对MCF-7细胞侵袭能力的影响;(4)与短肽共孵育12 h后,MTT法检测RGDSY-CTT对MCF-7细胞增殖能力的影响;(5)与短肽共孵育24 h后,PI染色流式法检测RGDSY-CTT对MCF-7细胞凋亡和细胞周期的影响。结果(1)短肽对MCF-7细胞粘附能力的影响:RGDSY-CTT在终浓度为50、100、200μg/ml时,MCF-7细胞的粘附率依次为85.1%、74.1%和63.8%,随着浓度升高,粘附率明显降低,且比CTT组下降更显著(P<0.05);(2)短肽对MCF-7细胞侵袭能力的影响:RGDSY-CTT在终浓度为100、200μg/ml时,对MCF-7细胞的侵袭抑制率分别为41.8%和63.9%;两个浓度均有明显抑制(P<0.01);但与CTT组比抑制无显著差异(P>0.05);(3)短肽对MCF-7细胞增殖的影响:RGDSY-CTT在终浓度为50、100、200μg/ml时,MCF-7细胞的增殖率依次为98.8%、82.4%和63.0%,随着肽浓度升高,增殖率下降明显;在100、200μg/ml时增殖抑制能力比CTT更强(P<0.05);(4)短肽对MCF-7细胞凋亡和细胞周期的影响:RGDSY-CTT处理组MCF-7细胞经流式法检测到凋亡峰,细胞周期阻滞发生在G0/G1期,占76.7%,显著高于CTT组、STT组及正常对照组(P<0.01)。结论 RGDSY-CTT能抑制乳腺癌细胞的侵袭能力,同时还具有抑制乳腺癌细胞粘附、增殖和诱导肿瘤细胞凋亡的能力。
- 黄榕权龙捷张惠球张雅洁
- 关键词：短肽RGD乳腺癌
- 乳腺癌MMP-2、MMP-9的体外阻断研究被引量：7
- 2014年
- 目的:探讨乳腺癌MMP-2、MMP-9表达的临床病理联系及直接阻断MMP-2、MMP-9对乳腺癌细胞增殖、侵袭及细胞周期的影响。方法:应用免疫组织化学方法检测48例乳腺癌MMP-2、MMP-9的表达。明胶酶谱法检测乳腺癌MCF-7细胞MMP-2、MMP-9的表达。MCF-7细胞接种于预铺BME的Transwell小室上室,与MMP-2、MMP-9的阻断剂CTT共孵育16h,观察阻断MMP-2、MMP-9对MCF-7细胞侵袭能力的影响。MCF-7细胞与CTT共孵育12h后,MTT法检测阻断MMP-2、MMP-9对细胞增殖能力的影响。MCF-7细胞与CTT共孵育24h后,PI染色流式法检测阻断MMP-2、MMP-9对细胞凋亡和细胞周期的影响。结果:48例乳腺癌组织有MMP-2表达者45例(93.75%),MMP-9表达者38例(79.17%),MMP-2和MMP-9在发生淋巴结转移组明显高表达(P<0.05);组织学分级越高,MMP-2和MMP-9的表达越显著(P<0.05)。明胶酶谱法检测:在MCF-7培养上清中检测到MMP-2、MMP-9的表达。在浓度为100μg/ml和200μg/ml时CTT对MCF-7细胞的侵袭抑制率达到39.5%和61.9%。在终浓度为50、100、200μg/ml时,CTT对MCF-7细胞的增殖率均无明显下降(P>0.05)。CTT处理组MCF-7细胞经流式法检测未见凋亡峰,细胞周期各期未见明显阻滞(P>0.05)。结论:MMP-2、MMP-9与乳腺癌的淋巴结转移密切相关,阻断MMP-2、MMP-9可有效抑制乳腺癌的浸润和转移。
- 黄榕权谢燕清张雅洁
- 关键词：乳腺癌基质金属蛋白酶免疫组织化学明胶酶谱
- 双靶点抗肿瘤肽RGDSY-CTTHWGFTLC的设计合成及活性研究
- 2014年
- 目的设计合成CTTHWGFTLC(简称CTT)的衍生肽RGDSY-CTTHWGFTLC(简称RGDSY-CTT),以期获得更优的水溶性、活性和抗肿瘤能力。方法 (1)自行设计RGDSY-CTT肽,化学合成(公司合成),并合成CTT(阳性对照)、STT(即STTHWGFTLS,阴性对照),质谱分析。(2)将Ⅳ型胶原酶、酶底物酪蛋白分别与RGDSY-CTT、CTT共孵育,酪蛋白水解抑制实验检测短肽的抑酶活性。(3)取RGDSY-CTT、CTT分别溶于蒸馏水,以蛋白定量BCA法对比两者的溶解度。(4)MCF-7细胞接种于预涂布纤连蛋白的96孔板,分别与RGDSY-CTT、CTT、STT共孵育,细胞黏附试验比较短肽对MCF-7细胞黏附能力的影响。(5)MCF-7细胞接种于Transwell小室的上室,分别与RGDSY-CTT、CTT、STT共孵育,细胞迁移试验比较RGDSY-CTT与CTT对MCF-7细胞迁移能力的影响。结果短肽合成,质谱分析符合。在浓度为250μg/ml时RGDSY-CTT、CTT对Ⅳ型胶原酶的水解抑制率为53.6%和77.7%;在500μg/ml时,两者抑制率分别为94.6%和96.9%。BCA法测得CTT的饱和溶解度约为745μg/ml,而RGDSY-CTT最高检测值为4 030μg/ml,溶液并未饱和。RGDSY-CTT在终浓度为50、100、200μg/ml时,MCF-7细胞的黏附率依次降低为:85.1%、74.1%、63.8%,黏附率显著低于CTT处理组(P<0.01)。在100和200μg/ml浓度时,RGDSY-CTT对MCF-7细胞的迁移抑制率为42.9%和60.8%;两个浓度RGDSY-CTT的抑制作用均比CTT强(P<0.05)。结论新合成短肽RGDSY-CTT的水溶性较CTT明显改善。RGDSY-CTT获得了抑制肿瘤细胞黏附的能力,并具有比CTT更强的运动抑制能力。
- 黄榕权龙捷张雅洁
- 关键词：短肽RGD乳腺癌
- 非小细胞肺癌DAL-1基因SNP+1810T/C及其蛋白表达临床意义分析被引量：2
- 2013年
- 目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中肺腺癌差异表达基因(DAL-1)单核苷酸多态性(SNP)+1810T/C(rs8082898)与蛋白表达的关系及其对肿瘤发生发展的影响。方法:收集204例NSCLC石蜡组织及其配对正常淋巴结组织,以及112例NSCLC新鲜血液标本,采用PCR-RFLP检测DAL-1基因+1810T/C位点基因型;其中167例NSCLC及其配对癌旁组织SP法检测DAL-1蛋白表达;分析+1810T/C基因型与DAL-1蛋白表达及临床病理特征的关系。结果:在NSCLC中,TT组+1810T/C等位基因频率为92.72%(293/316),CT组为6.33%(20/316),CC组为0.95%(3/316),多态CT+CC组为7.28%(23/316);DAL-1蛋白表达阳性率TT组(59.74%,92/154)与CT+CC组(38.46%,5/13)差异无统计学意义,χ2=0.000,P>0.05。+1810T/C多态在Ⅲ、Ⅳ期高于Ⅰ、Ⅱ期,χ2=11.003,P<0.05;淋巴结转移组高于无转移组,χ2=4.548,P<0.05。NSCLC组DAL-1蛋白表达阳性率(58.08%,97/167)低于对照组(90.42%,151/167),χ2=45.665,P<0.05;高中分化组(63.44%,59/93)高于低分化组(47.30%,35/74),χ2=4.365,P<0.05;Ⅰ期(72.31%,47/65)、Ⅱ期(54.29%,19/35)高于Ⅲ、Ⅳ期合组(46.27%,31/67),χ2=9.450,P<0.05;淋巴结转移组(37.08%,33/89)低于无转移组(82.05%,64/78),χ2=34.532,P<0.05。结论:DAL-1基因+1810T/C位点多态和蛋白表达降低可能在NSCLC的生长及淋巴结转移中发挥作用。
- 龙捷李贵芹张雅洁
- 关键词：非小细胞肺癌单核苷酸多态性蛋白质
- 靶向人血管内皮生长因子-C基因的shRNA真核表达载体的构建与鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的:构建靶向人血管内皮生长因子-C(VEGF-C)基因的shRNA真核表达载体并检测其对靶基因的沉默效应。方法:根据靶基因VEGF-C序列,设计、合成编码其shRNA的互补寡核苷酸序列,克隆至线性化的pSIREN-RetroQ载体中并对重组质粒进行酶切分析及测序鉴定;脂质体介导重组质粒转染乳腺癌MCF-7细胞株,荧光定量PCR及Westen-blot检测其对靶基因VEGF-C表达的影响。结果:酶切及测序鉴定重组质粒pSIREN-VEGF-C的序列正确;转染重组质粒后乳腺癌MCF-7细胞中VEGF-CmRNA及蛋白表达均明显下调,抑制率分别为95%及100%(P<0.05)。结论:成功构建了靶向人VEGF-C基因的shRNA真核表达载体,并在乳腺癌MCF-7细胞中高效、特异地发挥靶基因沉默作用。
- 谢晓斌陈小卫龙捷张雅洁
- 关键词：乳腺肿瘤血管内皮生长因子C短发夹RNA真核表达载体
- 下调血管内皮生长因子-C基因表达对乳腺癌MCF-7细胞侵袭抑制作用的研究被引量：2
- 2009年
- 目的探讨下调乳腺癌MCF-7细胞中血管内皮生长因子（VEGF）-C基因的表达后对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。方法脂质体介导重组质粒pSIREN—VEGF—C转染乳腺癌MCF-7细胞株。荧光定量PCR及Western印迹检测转染后对乳腺癌MCF-7细胞VEGF—CmRNA和蛋白质水平的影响。Transwell体外侵袭实验检测转染前后乳腺癌MCF-7细胞的侵袭能力。RT—PCR检测转染前后乳腺癌MCF-7细胞中MMP-2、-9mRNA表达变化。结果转染后获得稳定表达的细胞株。转染后的乳腺癌MCF-7细胞VEGF—CmRNA及蛋白表达均明显下调，抑制率分别为95％及100％（P〈0．05）。Transwell体外侵袭实验显示，转染后重组质粒组与阴性质粒相比，穿膜数明显减少（29．0±1．9比59．0±2．1，P〈0．05）。RT—PCR显示，转染后乳腺癌细胞的MMP-2、-9mRNA表达均明显受抑制，抑制率分别为55％、75％（P〈0．05）。结论下调VEGF—C表达对乳腺癌MCF-7细胞的侵袭能力有显著抑制作用。
- 谢晓斌龙捷张燕青张雅洁
- 关键词：血管内皮生长因子C基质金属蛋白酶RNA干扰
- MMP-2、MMP-9和VEGF-D在乳腺癌中的表达及其与肿瘤淋巴管新生的关系被引量：26
- 2014年
- 目的探讨MMP-2/-9和VEGF-D在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌淋巴管新生的关系。方法应用免疫组织化学方法,对48例乳腺癌组织及10例正常乳腺组织的MMP-2/-9、VEGF-D以及LYVE-1的表达进行检测,统计分析MMP-2/-9、VEGF-D与乳腺癌脉管新生的关系。结果 MMP-2/-9与VEGF-D在乳腺癌组织中均呈过表达,且在腋淋巴结转移组和无转移组的表达差异均有统计学意义(P<0.05);乳腺癌组织中淋巴管新生密度在腋淋巴结转移组和无转移组的表达差异均有统计学意义(P<0.05),随着MMP-2/-9与VEGF-D表达强度增加,淋巴管新生数量也增加(P<0.01)。结论 MMP-2/-9和VEGF-D与乳腺癌淋巴结转移密切相关,可能通过协同促进淋巴管新生,是其促进乳腺癌的淋巴结转移的机制之一。
- 黄榕权谢燕清张雅洁
- 关键词：免疫组织化学乳腺肿瘤基质金属蛋白酶血管内皮生长因子
