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RNA干扰基因敲低雌激素受体β对雌激素诱导人成骨样细胞护骨素表达的影响被引量：2: 2007年; RNA干扰敲低人成骨样细胞株MG63中雌激素受体β后,RT-PCR法发现不同浓度的17β-雌二醇均能上调MG63细胞中的护骨素mRNA表达水平,其中以10^(-7)mol/L的作用最强。而这种作用不能被G蛋白抑制剂suramin所抑制。提示雌激素受体β可能不涉及雌激素上调MG63细胞护骨素表达的调控作用。; 武兆忠刘敏冯鉴强林伟张昊吴长伟王金玉; 关键词：RNA干扰护骨素雌激素受体Β 人成骨样细胞

雌激素受体α亚基基因小干扰RNA表达载体的构建: 2007年; 目的探讨构建雌激素受体α（ERα）亚基基因小干扰RNA（siRNA）表达载体的方法，为建立基因敲除ERα亚基突变株提供素材和依据。方法利用计算机辅助设计ERα特异性siRNA，体外合成siRNA基因，并将其定向克隆入pSilencer4．1-CMV质粒中，构建真核表达载体。采用PCR扩增、酶切分析鉴定。结果双酶切法鉴定重组质粒后，RT-PCR法鉴定ERasiRNA载体可特异地抑制人成骨样细胞株MG63细胞中ERα的表达。结论ERα亚基特异性siRNA表达载体被成功构建，为进一步研究雌激素受体在骨代谢中的作用机制提供了实验素材和依据。; 张昊武兆忠章乐虹; 关键词：RNA干扰人成骨样细胞

RNA干扰下调雌激素受体α亚基的人成骨样细胞模型的构建: 2008年; 目的构建雌激素受体α亚基（ERα）下调的人成骨样细胞模型。方法采用计算机辅助设计并合成ERα特异性小干扰RNA（siRNA）前体基因后，定向克隆人pSilencer4．1-CMV质粒中，构建重组的ERα siRNA表达载体并测序鉴定。由脂质体介导重组质粒稳定转染人成骨样细胞株MG63，潮霉素筛选阳性抗性克隆细胞。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测ERα基因在人成骨样细胞株MG63内的表达，抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合体法（ABC）分析ERα蛋白在人成骨样细胞株MG63内的表达与定位。MTT法测ERα基因被特异性下调后对MG63细胞生长的影响。流式细胞术分析ERα siRNA对人成骨样细胞株MG63细胞生长周期的影响。采用改良Gomori氏钙钴法分析ERα siRNA对人成骨样细胞株MG63表达碱性磷酸酶的影响。结果构建表达ERα siRNA的重组真核表达载体，并成功地下调了人成骨样细胞株MG63的ERα亚基基因，其中MG63细胞的G1期为68．6％，G2期为17．6％，S期为13．8％；ERα siRNA MG63细胞的G1期为68.6％，G2期为16．8％，s期为14．6％。而ERα siRNA下调人成骨样细胞株MG63的ERα亚基对细胞的生长特性无明显影响。结论成功地构建了ERα下调的人成骨样细胞模型，该模型为进一步研究雌激素及其受体对骨代谢影响的分子机制提供了基础材料。; 武兆忠刘敏冯鉴强林伟; 关键词：RNA干扰雌激素受体Α 成骨细胞

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广东省科技计划工业攻关项目(200283110102)

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