国家自然科学基金(30570586)
- 作品数：8 被引量：20H指数：3
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- 相关机构：浙江大学杭州市红十字会医院第四军医大学更多>>
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- 重组激活基因1shRNA慢病毒载体的构建与鉴定
- 2009年
- 构建3对针对大鼠海马神经元重组激活基因(Rag1)的RNA干扰重组表达载体及1对无关序列的载体,分别命名为shRNA1、shRNA2、shRNA3及negative。经基因测序确认后,采用慢病毒载体系统分别包装4个载体,而后分别感染体外培养的大鼠原代海马神经细胞,收集感染后96h的细胞,通过免疫荧光观察细胞感染情况,并且利用RT-PCR和Western印迹检测Rag1mRNA及蛋白质的表达。经测序鉴定合成的shRNA序列正确,并且慢病毒感染细胞效果良好。LV-shRNA1组、LV-shRNA2组、LV-shRNA3组与正常对照组相比,Rag1mRNA表达都明显减少(P<0.01),其中LV-shRNA3组的抑制效率最高为(76.4±3.5)%,Western印迹结果与其基本一致,而LV-negative组对Rag1mRNA及其表达的蛋白质都无明显影响。实验结果表明,我们成功构建了能特异性抑制大鼠海马神经元Rag1表达的shRNA慢病毒表达载体。
- 陈浩浩周星娟周婧李一乔韩曙凌树才
- 关键词：神经元SHRNART-PCRWESTERN印迹
- 甲醛吸入对大鼠嗅球和海马神经细胞的影响被引量：6
- 2010年
- 目的:观测甲醛吸入对海马神经细胞形态和谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)、一氧化氮合酶(NOS)含量的影响,探讨甲醛影响学习记忆的可能机制。方法:20只大鼠随机分成2组,每组10只,对照组通以正常空气;甲醛染毒组连续7 d静态吸入(12.5 mg/m3,4 h/d)甲醛。实验结束立即处死大鼠,制作嗅球和海马的冰冻切片进行尼氏染色、免疫组化,实施全蛋白免疫印迹分析,观察两组大鼠嗅球、海马的神经细胞形态,测定其Glu、GABA、NOS含量的变化。结果:甲醛染毒组的大鼠嗅球和海马切片的尼氏染色显示,神经细胞排列混乱、胞体皱缩;免疫组化和蛋白印迹显示,Glu和NOS的阳性细胞数以及染色强度和蛋白含量有不同程度的降低,GABA蛋白含量也下降。结论:甲醛吸入能改变大鼠嗅球和海马的神经细胞形态,使嗅球和海马的Glu、GABA、NOS合成量改变,进而影响大鼠的学习记忆。
- 李一乔陈浩浩尹一飞韩飞叶学松凌树才
- 关键词：嗅球海马Γ氨基丁酸一氧化氮合酶谷氨酸
- 妊娠、分娩以及泌乳期大鼠下丘脑中食欲素及其受体表达的变化
- 2007年
- 目的观察大鼠下丘脑中食欲素(Orexin)及其受体(OX1R、OX2R)在妊娠、分娩以及泌乳期表达的变化,以探讨Orexin与生殖功能之间的关系。方法通过竞争性逆转录多聚酶链式反应(Competitive RT-PCR)和免疫组织化学方法测定大鼠下丘脑中Orexin前体(Prepro-OX)、Orexin-A、OX1R和OX2R在妊娠、分娩以及泌乳期的表达。结果Orexin-A和OX1R阳性神经元主要分别存在于大鼠下丘脑外侧区(LHA)以及妊娠和泌乳期大鼠的下丘脑室旁核(PVN)和视上核(SON)。泌乳第1d的Prepro-Orexin mRNA和OX1R的表达水平明显高于妊娠后期和泌乳期。OX2R的表达在生殖各时期之间没有明显改变。结论Orexin可能参与大鼠泌乳早期的生殖功能调节,下丘脑的PVN及SON可能是其重要的作用部位。
- 王俊波凌树才沈岚孙百强朱晞
- 关键词：食欲素下丘脑下丘脑外侧区
- 大鼠发情周期下丘脑中食欲素及其受体的变化被引量：1
- 2007年
- 目的观察大鼠发情周期各期下丘脑中食欲素及其受体(OX1R、OX2R)表达的变化,探讨食欲素对发情周期的可能调节作用。方法通过竞争性逆转录多聚酶链式反应(competitive RT-PCR)方法检测大鼠下丘脑中食欲素前体(Prepro-Orexin)、食欲素-A、OXIR和OX2R在发情周期各期的表达。结果发情前期的OX1R mRNA表达水平明显高于发情后期,而prepro-OX和OX2R mRNA的表达各期间没有明显的不同。结论食欲素可能通过结合OX1R调节促性腺激素释放激素和/或黄体生成素的分泌而参与排卵的发生。
- 王俊波王培军凌树才沈岚孙百强朱晞
- 关键词：食欲素下丘脑发情周期
- P物质和P物质受体在小鼠胚胎发育期脑内的表达被引量：9
- 2006年
- 目的研究小鼠胚脑发育期间P物质(SP)和P物质受体(SPR)的表达。方法分别取孕11、13、15、17和19d的小鼠胚脑和新生鼠脑,采用SP和SPR酶标免疫组织化学染色观察SP和SPR表达的变化。结果SP自小鼠胚胎11d开始出现少量表达,并一直持续到出生后,主要出现在发育过程中的新纹状体等部位;SPR与SP同时出现并持续到出生后,主要出现在发育过程中的延髓中缝等部位。结论SP和SPR在小鼠发育期间的表达提示SP可能参与中枢神经系统神经元形成和成熟调控。
- 季华韩曙郑轶孙建刚凌树才
- 关键词：P物质P物质受体神经发育
- RAG-1在小鼠胚胎脑发育中的表达被引量：3
- 2007年
- 目的:观察小鼠脑组织正常发育期间重组激活基因1(RAG-1)表达的时序变化,并对其进行组织定位。方法:分别取孕11d、13d、15d、17d、19d,新生(P0)和成年的小鼠脑组织,提取总RNA,用RT-PCR观察RAG-1表达的时序变化;同时,经冠状切面制作各组脑组织的连续冰冻切片,进行RAG-1免疫组织化学染色。结果:RAG-1自小鼠胚胎11d开始出现少量表达,以后表达逐渐增加,19d到达高峰,RT-PCR显示结果与免疫组化结果基本一致。RAG-1蛋白主要表达在发育过程中的杏仁核、下丘脑、丘脑、海马等区域,大脑皮质的表达逐渐出现于室管膜层、中间层、室管膜下层和皮质板层。结论:在小鼠胚胎脑发育期间,RAG-1表达时序和脑发育一致,而且表达高于成年鼠。
- 孙建刚韩曙季华郑轶凌树才
- 关键词：逆转录聚合酶链反应免疫组织化学小鼠
- GAD67-GFP基因敲入小鼠GFP与nNOS在嗅球中的表达和共存研究被引量：1
- 2012年
- 目的:探究GAD67-GFP基因敲入小鼠嗅球各细胞层中GAD67阳性神经元的分布及与一氧化氮合酶(bNOS)的共存。方法:对该实验室繁育的成年GAD67-GFP基因敲入小鼠利用聚合酶链式反应(PCR)进行基因型等鉴定,取阳性GAD67-GFP基因敲入小鼠嗅球做冰冻切片进行尼氏染色、免疫荧光染色,观察GAD67阳性神经元在嗅球各细胞层中的分布比例及与bNOS共存。结果:GAD67阳性神经元在嗅小球层、僧帽细胞层、颗粒细胞层所占比例分别为:(42.98±0.92)%、(23.64±0.84)%、(77.75±0.84)%,bNOS阳性神经元在球旁细胞层、僧帽细胞层有强阳性分布,而在颗粒细胞层几乎没有分布。GAD67与bNOS仅在嗅小球层偶有共存。结论:GAD67阳性神经元主要分布于嗅小球层与颗粒细胞层,GAD67与bNOS仅少数共存于嗅小球层。
- 韩飞杨静余文富尹一飞武胜昔凌树才
- Ghrelin、melanotan-Ⅱ以及胆囊收缩素对下丘脑双侧室旁核损伤大鼠摄食的影响
- 2010年
- 目的探讨大鼠下丘脑双侧室旁核(PVN)损伤引起的过食和肥胖的产生机制。方法 Wistar雄性大鼠36只,通过电损伤下丘脑双侧PVN使大鼠产生过食和肥胖,检测ghrelin、melanotan-II(MT-II,一种合成的α-黑色素细胞刺激素——α-MSH的结构同源体)以及胆囊收缩素-8(CCK-8)摄食作用的改变。结果双侧PVN损伤后大鼠的体重和摄食量明显增加,显示出过食和肥胖,手术后1周,外周给与Ghrelin,3～4h后PVN损伤组比伪损伤组的摄食量增加明显,Ghrelin显示出更强的刺激摄食的作用;中枢给予MT-Ⅱ可明显抑制24h节食大鼠的食物摄取,然而PVN损伤后MT-II对24h节食大鼠摄食的抑制作用减弱甚至消失;外周给予CCK-8可明显抑制大鼠各时间段的摄食作用,PVN损伤组和伪损伤组之间未见明显差异。结论大鼠下丘脑双侧PVN损伤引起的过食和肥胖可能与增强的ghrelin对摄食的刺激作用和(或)α-MSH受体的破坏有关。
- 王俊波全胜袁张根董静尹张大勇凌树才
- 关键词：GHRELINΑ-黑色素细胞刺激素胆囊收缩素室旁核摄食电损伤
