国家自然科学基金(31060347)
- 作品数:7 被引量:27H指数:4
- 相关作者:王鲁易琼张小艺杨航李圆方更多>>
- 相关机构:贵州大学贵州省生化工程中心更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金贵州省农业攻关项目更多>>
- 相关领域:农业科学医药卫生生物学更多>>
- 金英汤及其活性成分体外对鸡胚成纤维细胞最大安全浓度的测定被引量:1
- 2012年
- 为了评价中药方剂"金英汤"及其主要活性成分绿原酸、连翘苷和黄芪多糖的细胞毒性,利用鸡胚成纤维细胞来检测药物的细胞最大安全浓度。中药方剂"金英汤"的细胞最大耐受量为0.488 mg/mL(生药浓度),而其主要活性成分绿原酸、连翘苷和黄芪多糖的细胞最大耐受量分别为0.031,0.244和0.488 mg/mL。
- 李圆方易琼杨航王鲁
- 关键词:绿原酸连翘苷黄芪多糖鸡胚成纤维细胞
- 两种不同消化法对小鼠乳腺上皮细胞培养的影响被引量:2
- 2014年
- 为了探究体外培养小鼠乳腺上皮细胞的消化方法,体外分离小鼠乳腺组织,分别采用胶原酶和胰蛋白酶混合消化法或两步消化法消化小鼠乳腺组织,并进行细胞培养,利用角蛋白18激光共聚焦显微技术鉴定目的细胞。结果显示,混合酶消化法能在短期内分离到大量的乳腺上皮细胞,且细胞纯度达到98%,细胞可连续培养至第3代;两步酶消化法虽能分离到一定量的乳腺上皮细胞,但细胞继代培养困难,且细胞不易纯化。以上结果表明,混合酶消化法培养小鼠乳腺上皮细胞优于两步酶消化法。
- 杨航易琼李圆方张小艺王鲁
- 关键词:胶原酶胰蛋白酶
- 改良型混合酶消化法培养小鼠乳腺上皮细胞被引量:5
- 2011年
- 背景:目前采用的A型胶原酶和胰蛋白酶混合酶分离乳腺细胞团的方法操作复杂,实验条件要求高。目的:观察改良型混合酶消化法能否成功进行乳腺上皮细胞的体外培养。方法:采用Ⅰ型、Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶(1:1:1)混合消化直接用眼科剪剪碎的小鼠乳腺组织,37℃振荡消化获取乳腺细胞团,并采用差速贴壁法去除成纤维细胞,将细胞团接种于细胞培养瓶进行培养。结果与结论:倒置显微镜下观察显示,改良型混合酶消化法能获得较多的细胞团,且培养12h后细胞团绝大多数贴在细胞瓶壁,培养72h后细胞团完全铺开融合成片,细胞呈典型的铺路石样。免疫荧光细胞化学染色结果显示,培养细胞角蛋白18呈阳性反应。说明应用改良型混合酶消化法能在短时间内获得大量较纯的乳腺上皮细胞。
- 易琼王鲁李圆方朱伟
- 关键词:细胞培养小鼠
- 鱼胆草提取物及其活性成分獐牙菜苦苷的药理学初探被引量:4
- 2015年
- 为了初步考察鱼胆草提取物及其活性成分獐牙菜苦苷(含量为61%)的体外抑菌效果和安全性,以及獐牙菜苦苷对α-葡萄糖苷酶活性的影响,试验采用小鼠急性毒性试验的方法测定其安全浓度、试管二倍稀释法测定其体外最小抑菌浓度和紫外分光光度法检测獐牙菜苦苷对α-葡萄糖苷酶活性的抑制率。结果表明:鱼胆草提取物及獐牙菜苦苷以5 g/kg灌胃时,小鼠均无死亡发生;醇沉前后的鱼胆草提取物和獐牙菜苦苷对大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)均为125 mg/mL,对金黄色葡萄球菌的MIC均为31.25 mg/mL;当獐牙菜苦苷浓度为1 mg/mL时对α-葡萄糖苷酶活性的抑制率为30.19%,浓度为100 mg/mL时抑制率为84.92%。说明可尝试用鱼胆草提取物及獐牙菜苦苷防治由金黄色葡萄球菌等细菌感染引起的疾病,獐牙菜苦苷无毒副作用,有望被研发成一种新的降糖药物。
- 张小艺何润霞易琼何珺杨航王鲁
- 关键词:獐牙菜苦苷Α-葡萄糖苷酶活性急性毒性抑制率
- 金英黄归液的抑菌作用分析被引量:6
- 2013年
- 为了初探自制金英黄归液对金黄色葡萄球菌(S.aureus)的抗菌作用,作者常规制备金英黄归注射液,采用试管二倍稀释法测定其对S.aureus的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),通过S.aureus人工感染小鼠试验研究其在体内的抑菌作用,在MBC下应用电镜观察其对细菌形态结构的影响,采用比色法研究其对细菌的琥珀酸脱氢酶(SDH)比活性的影响。结果表明金英黄归液对S.aureus的MIC和MBC分别为31.2和62.5mg·mL-1,能显著抑制S.aureus引起的小鼠死亡(P<0.05),在MBC作用下的S.aureus细胞壁上有大量絮状物,细胞呈塌陷状,甚至细胞壁破裂,能极显著降低细菌体内SDH比活性(P<0.01)。结果提示金英黄归液对S.aureus具有抑菌作用,抑菌机制是破坏细菌的细胞壁,抑制菌体内的酶系统。
- 杨航张小艺王鲁
- 关键词:金黄色葡萄球菌MBC超微结构SDH
- HPLC法监测金英黄归汤制备过程中绿原酸和连翘酯苷A含量被引量:8
- 2015年
- 目的采用高效液相色谱(HPLC)法建立绿原酸和连翘酯苷A的含量测定方法,并对制备过程中绿原酸和连翘酯苷A含量进行监测,为金英黄归汤制备工艺改进提供质控标准。方法采用Hypersil C18色谱柱(150mm伊4.6 mm,5μm);绿原酸和连翘酯苷A的流动相分别为乙腈-0.2%磷酸(11颐89)与乙腈-0.4%冰醋酸(17颐83);检测波长分别为327 nm和330 nm;柱温分别为35益和30益;流速分别为0.8 m·min-1和1.0 m L·min-1。结果绿原酸和连翘酯苷A的线性范围分别为:13.56耀217.00μg·m L-1(r2=0.9997),0.0536耀0.2680 mg·m L-1(r2=0.9996);稳定性试验RSD分别为0.14%和0.47%;中间精密度试验RSD分别为0.63%和0.56%;重复性试验RSD分别为0.68%和1.00%;平均回收率分别为绿原酸99.23%,RSD为0.61%;连翘酯苷A100.24%,RSD为1.15%。结论建立的绿原酸和连翘酯苷A含量检测方法,可为金英黄归汤制备过程提供质控数据。
- 周送桂何珺肖序李欣张小艺王鲁
- 关键词:绿原酸连翘酯苷A高效液相色谱法
- 小鼠乳腺上皮细胞的体外培养被引量:4
- 2011年
- 采用Ⅰ型、Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶混合(1∶1∶1)消化乳腺组织,并用差速贴壁法纯化培养乳腺上皮细胞,倒置显微镜下观察细胞的形态,并用角蛋白18免疫荧光染色的方法对细胞进行鉴定。结果表明:改良型混合酶消化法能获得较多的细胞团,且12 h后细胞团绝大多数已贴在细胞瓶壁,72h后细胞团完全铺开呈单层融合,细胞呈典型的铺路石样。免疫荧光鉴定结果显示,角蛋白18呈阳性反应。因此,应用改良型混合酶消化法能在短时间内获得大量较纯的乳腺上皮细胞。
- 易琼张毅李圆方王鲁
- 关键词:乳腺上皮细胞小鼠