山西省自然科学基金(20060110080)
- 作品数：5 被引量：31H指数：3
- 相关作者：王建明张宝俊李志岗张家榕郭明霞更多>>
- 相关机构：山西农业大学更多>>
- 发文基金：山西省自然科学基金山西省回国留学人员科研经费资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 镰刀菌基因组DNA的抽提及特异片段的扩增分析被引量：3
- 2006年
- 实验运用改良的SDS碱裂解法对30株镰刀菌基因组DNA进行了抽提，并对rDNA ITS区域进行了特异性扩增。结果表明：被测菌株DNA片段大于20 kb．其OD260，／OD280大都在1．6～2．0之间，可见用改进的方法抽提的基因组DNA比较完整，纯度较高。实验采用对镰刀菌属有特异性的寡聚核苷酸为引物，对镰刀菌基因组rDNA基因进行扩增，该引物可以扩增出18S、28S部分片段及ITS区域，电泳检测其片段大小在1 041～1 135 bp之间，且特异性良好，为进一步进行RFLP及核苷酸序列分析奠定了基础。
- 张宝俊李志岗王建明郭明霞徐玉梅
- 关键词：镰刀菌基因组DNAPCR扩增
- 镰刀菌rDNA ITS序列的克隆及序列分析被引量：7
- 2008年
- 【研究目的】为了利用rDNA ITS区的遗传变异的特点,为镰刀菌种内及种间的分类鉴定提供一定的分子技术辅助手段,【方法】试验以PMD18-T为载体,对10个不同镰刀菌菌株的rDNA的ITS区及28S部分片段进行了克隆、测序,用DNAMAN4.0软件进行序列分析,分析了菌株间的同源性及遗传距离,并建立了分子系统进化树。【结果】试验结果表明:所测各菌种间的亲缘关系在92.2%-99.9%之间,反映了种间较大的遗传差异,这与形态学上把它们鉴定为不同的种相吻合,而从不同地区、不同寄主上分离的同一菌种的不同专化型,其同源性高达96.6%-100%,说明同一菌种的不同专化型,在rDNA基因序列上碱基差异甚微,同源性很高。【结论】利用ITS对镰刀菌进行种间的分类鉴定是稳定可行的,但对于种内及专化型的鉴定存在困难。
- 张宝俊张家榕李志岗王建明
- 关键词：镰刀菌RDNA同源性
- 4种镰刀菌基因组DNA提取方法的比较研究被引量：10
- 2008年
- [目的]寻找一种简便、高效的基因组DNA提取方法,为进一步开展镰刀菌等丝状真菌的分子生物学研究提供科学基础。[方法]采用改良的CTABS、DS、高盐沉淀和SDS-CTAB 4种方法提取8个镰刀菌菌株的基因组DNA,并对其进行质量测定及PCR分析,比较不同提取方法的效果。[结果]4种提取方法均可提取到基因组DNA,其抽提质量优劣依次为SDS、SDS-CTAB法、高盐沉淀法和CTAB法。其中采用SDS法可成功提取到所有供试菌株基因组DNA,而且DNA浓度和纯度均较高,RNA及其他杂质污染少。而高盐沉淀法和CTAB法提取到的基因组DNA不够完整或浓度较低。[结论]SDS法更适合于镰刀菌等丝状真菌基因组DNA的提取。
- 张宝俊李志岗张家榕王建明
- 关键词：镰刀菌基因组DNA
- 枯萎病尖孢镰刀菌RAPD体系的建立被引量：3
- 2007年
- 通过对PCR退火温度、反应体系中Mg2+、TaqDNA聚合酶、dNTPs、引物浓度等因子的优化,成功建立了枯萎病菌(Fusarium oxysporum)RAPD分析技术,并对其稳定性进行检测。结果表明在退火温度36℃,体系为TaqDNA聚合酶1.5 U,dNTPs浓度0.15 mM,Mg2+浓度1.5 mM,随机引物浓度30 ng时可以建立稳定灵敏度较高的RAPD分析体系。
- 王小玮王建明
- 关键词：PCR尖孢镰刀菌RAPD
