国家自然科学基金(30540005)
- 作品数：17 被引量：41H指数：4
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- 锰超氧化物歧化酶过量表达对食管癌细胞增殖的影响被引量：4
- 2011年
- 目的构建锰超氧化物歧化酶（MnSOD）基因重组慢病毒表达载体，并观察其对食管癌细胞增殖的影响。方法采用慢病毒转染法将MnSOD重组质粒转染食管癌TE-1细胞，建立MnSOD中、高表达的稳定转染细胞（TE-1Mm、TE-1Mh）及空载体细胞株（TE-1Mn细胞）。逆转录聚合酶链反应（RT．PCR）、免疫细胞化学法及Westernblot检测MnSOD在食管癌TE-1细胞中的表达；采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色实验、平皿克隆形成实验、AnnexinV-FITC／PI双染实验及流式细胞术（FCM）研究MnSOD过表达在体外对TE．1细胞的影响。结果RT-PCR检测显示，转染后的TE-1细胞含有不同表达水平的MnSOD。免疫细胞化学及Westernblot显示，TE-1Mm细胞和TE-1Mh细胞含有不同表达水平的MnSOD蛋白。MTT法显示，与对照细胞（TE-1细胞、TE-1Mn细胞）相比，培养48h者TE-1Mm细胞的存活率下降，TE-1Mh细胞的存活率升高，组间比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。TE一1Mm细胞平皿克隆集落形成能力为（23．0±2．7）％，TE-1Mh细胞为（45．3±4．5）％，而与TE一1细胞[（34．7±4．2）％]和TE．1Mn细胞[（33．7±4．7）％]相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。TE-1Mm细胞早期凋亡率为（10．6±1．0）％，TE-1Mh细胞为（1．0±0．1）％，与TE-1细胞[（2．6±0．2）％]和TE-1Mn细胞[（2．5±0．6）％]相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。TE-1Mm和TE-1Mh细胞线粒体凋亡荧光指数分别为0．948±0．019和1．076±0．022，与TE-1细胞（1．000±0．022）和TE-1Mn细胞（0．997±0．023）相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。TE-1Mm细胞内活性氧荧光指数（0．859±0．040）低于TE-1细胞（1．000±0．042）和TE-1Mn细胞（1．002±0．047），但高于TE-1Mh细胞（0．763±0．039），差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论MnSOD过表达对食管癌TE-1细胞增殖具有抑制和促进的双向作用。
- 孙国贵王雅棣李成林程云杰景绍武刘青王士杰
- 关键词：食管肿瘤细胞株锰超氧化物歧化酶重组慢病毒基因治疗
- 锰超氧化物歧化酶基因多态性与前列腺癌、食管癌及肺癌易感性关系的Meta分析被引量：1
- 2011年
- 目的:评价锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)基因多态性与前列腺癌、食管癌及肺癌易感性的关系。方法:计算机检索Cochrane Library和PubMed等数据库,并辅以手工检索,按照纳入与排除标准选择病例-对照研究。评价质量及提取资料后,采用STATA11.0软件对数据进行Meta分析。结果:共纳入22个病例-对照研究,其中病例组8181例,健康对照组11844例。对于前列腺癌,共纳入12个病例-对照研究,其中患者4182例,健康对照6885例,Meta分析结果显示MnSOD基因多态性明显增加了前列腺癌的发病风险[杂合子模型:比值比(odds ratio,OR)=1.11,95%可信区间(confidence interval,CI)=1.01～1.22;纯合子模型:OR=1.25,95%CI=1.03～1.51;显性模型:OR=1.15,95%CI=1.01～1.31)。对于食管癌,共纳入4个病例-对照研究,其中患者620例,健康对照909例,Meta分析结果显示MnSOD基因多态性亦明显增加其发病风险(杂合子模型:OR=1.58,95%CI=1.22～2.04;纯合子模型:OR=2.25,95%CI=1.61～3.15;隐性模型:OR=1.69,95%CI=1.07～2.67;显性模型:OR=1.74,95%CI=1.36～2.22)。然而,对于肺癌,共纳入6个病例-对照研究,其中患者3375例,健康对照4050例,Meta分析结果显示MnSOD基因多态性明显降低了肺癌的发病风险(纯合子模型:OR=0.68,95%CI=0.59～0.78;隐性模型:OR=0.71,95%CI=0.54～0.93;显性模型:OR=0.83,95%CI=0.75～0.92)。结论:MnSOD基因多态性可增加前列腺癌和食管癌的发病风险,但降低肺癌的发病风险。
- 孙国贵王雅棣刘青程云杰
- 关键词：前列腺肿瘤超氧化物歧化酶多态现象单核苷酸META分析
- 锰超氧化物歧化酶在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义被引量：6
- 2010年
- 目的 探讨锰超氧化物歧化酶（MnSOD）在食管鳞癌组织中的表达及其与食管鳞癌临床病理特征及生物学行为的关系.方法 采用免疫组织化学SP法和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）,检测45例食管鳞癌组织及距肿瘤组织边缘＞5 cm的正常组织中MnSOD蛋白和mRNA的表达水平,并分析其与食管癌临床病理特征及生物学行为之间的关系.结果 MnSOD蛋白在45例食管鳞癌组织中的阳性表达率为31.1%,明显低于正常食管组织中的阳性表达率（86.7%,P＜0.05）.MnSOD mRNA在45例食管鳞癌组织的相对表达量为0.310±0.036,亦明显低于其在正常食管组织中的相对表达量（0.482±0.053,P＜0.05）.MnSOD蛋白和mRNA的表达与食管鳞癌的病变长度、浸润深度和组织学分级有关,即病变长度越长、浸润深度越深、组织学分级越高者,MnSOD表达水平越低（均P＜0.05）.MnSOD蛋白和mRNA的表达与食管鳞癌的淋巴结转移状况、病变部位和病变类型均无关（均P＞0.05）.结论 食管鳞癌组织中,MnSOD蛋白和mRNA的表达水平均明显降低,检测MnSOD的表达对食管癌的临床治疗和预后判断有一定的参考价值.
- 孙国贵王雅棣于秀荣程云杰白硕刘青张钧杨香然万欣
- 关键词：锰超氧化物歧化酶食管肿瘤逆转录聚合酶链反应免疫组织化学
- 丁胱亚磺酰亚胺联合放射线对食管癌细胞株TE-1的增敏效应
- 2012年
- 目的研究丁胱亚磺酰亚胺(buthionine sulfoximine,BSO)联合放射线对食管癌细胞株TE-1放射增敏的影响。方法四甲基偶氮唑蓝比色实验(MTT法)观察BSO及放射线对细胞增殖的抑制作用及BSO对食管癌细胞株TE-1的放射增敏作用。流式细胞法观察BSO、放射线对细胞凋亡及细胞周期的影响。反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chine reaction,RT-PCR)、Western blot法观察BSO对锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)mRNA及蛋白表达的影响。结果 BSO能抑制食管癌TE-1细胞的增殖,具有明显的量效和时效关系;BSO对食管癌TE-1细胞有明显的放射增敏作用;BSO与放射线联合作用于TE-1细胞后,G2/M期细胞比例及凋亡率明显增加,MnSOD mRNA及蛋白表达下降。结论 BSO可能通过影响TE-1细胞周期,降低MnSOD mR-NA及蛋白的表达,从而抑制食管癌细胞增殖、诱导凋亡来增强放射线对食管癌细胞的杀伤作用。
- 孙国贵胡万宁于秀荣李成林杨从容王雅棣
- 关键词：丁胱亚磺酰亚胺锰超氧化物歧化酶食管肿瘤放射增敏
- MnSOD基因Val-9Ala多态性与乳腺癌易感性关系的Meta分析
- 2011年
- 目的评价锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因Val-9Ala多态性与乳腺癌易感性及经期状态的关系。方法计算机检索Cochrane Library(2010年第1期)、PubMed、CNKI、CBM和万方数据库,按照纳入与排除标准选择相关的病例对照试验,检索时限均为建库至2010年10月。在提取资料和评价质量后,采用RevMan 4.2.10软件进行Meta分析。结果共纳入14个研究,合计17842例患者。Meta分析结果显示,MnSOD基因Val-9Ala多态性与乳腺癌易感性无关[Val/Ala vs.Val/Val:OR=1.04,95%C(I0.93,1.17);Ala/Ala vs.Val/Val:OR=1.12,95%C(I0.95,1.33);Ala/Ala vs.Val/Ala+Val/Val:OR=1.06,95%CI(0.93,1.20);Val/Ala+Ala/Ala vs.Val/Val:OR=1.06,95%CI(0.94,1.10)]。进一步亚组分析结果显示,MnSOD Val/Ala及Ala/Ala基因型会增加绝经前妇女患乳腺癌的风险[Val/Ala+Ala/Ala vs.Val/Val:OR=1.15,95%CI(1.01,1.31)]。结论 MnSOD基因Val-9Ala多态性与乳腺癌易感性无关,但可能增加绝经前妇女患乳腺癌的风险。
- 孙国贵王雅棣王士杰郑明民程云杰李成林柴红
- 关键词：锰超氧化物歧化酶乳腺癌肿瘤易感性META分析
- 三氧化二砷对食管癌细胞株Eca109的放射增敏作用及机制被引量：5
- 2011年
- 目的探讨三氧化二砷(Arsenic trioxide,As2O3)及As2O3与放射线联合对食管癌Eca109细胞的增殖抑制作用;分析二者联合对Eca109细胞周期和凋亡的影响,为As2O3的临床应用提供理论依据。方法 MTT法观察放射线及As2O3单独及二者联合对食管癌Eca109细胞的增殖抑制作用,利用直线相关及直线回归拟合出照射组、As2O3组及联合组的直线,计算增敏比(sensitizing enhancement ra-tio,SER);流式细胞术检测As2O3联合放射线对Eca109细胞周期和凋亡的影响;Western blot印记技术观察As2O3联合放射线对锰超氧化物歧化酶(Manganese superoxide dismutase,MnSOD)和细胞色素C(cytochrome C,cyt-C)蛋白表达的影响。结果 As2O3能抑制食管癌Eca109细胞的增殖,具有明显的量效和时效关系;As2O3对食管癌Eca109细胞有明显的放射增敏作用;As2O3与放射线联合作用于Eca109细胞后,G2/M期细胞比例及凋亡率明显增加,MnSOD蛋白表达下降,而cyt-C蛋白表达未见明显变化。结论 As2O3可能通过G2/M期阻滞,降低MnSOD蛋白的表达,从而诱导细胞凋亡来增强放射线对细胞的杀伤作用。
- 景绍武王雅棣吴凤鹏卢付河韩春刘青程云杰
- 关键词：三氧化二砷凋亡细胞周期锰超氧化物歧化酶
- 锰超氧化物歧化酶与肿瘤被引量：2
- 2011年
- 活性氧(reactive oxygen species,ROS)作为肿瘤基因表达调控的重要信号分子,与肿瘤诱发的关系密切。锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)作为细胞内重要的抗氧化酶,对于清除ROS、维持氧化还原平衡起至关重要的作用。因此,本文对MnSOD的结构、作用机制以及MnSOD在肿瘤发生、发展及治疗中的作用进展作一简要综述。
- 孙国贵王雅棣郑明民
- 关键词：MNSODROS肿瘤基因治疗
- 锰超氧化物歧化酶过表达对食管癌TE-1细胞增殖及移植瘤生长的双向影响被引量：3
- 2011年
- 目的:通过体内外实验探讨锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)过量表达对食管癌TE-1细胞增殖的影响。方法:采用病毒感染法将不同剂量构建有MnSOD基因的重组质粒转入食管癌TE-1细胞,建立中、高表达MnSOD的TE-1细胞pLenti6-mMnSOD/TE-1(TE-1Mm)和pLenti6-hMnSOD/TE-1(TE-1Mh);采用RT-PCR法及Western印迹法检测转染MnSOD重组质粒的TE-1细胞中mRNA和蛋白水平的表达变化情况;应用平皿克隆形成实验及FCM法观察细胞增殖、凋亡和周期变化的情况;将MnSOD转染后的TE-1细胞接种到裸鼠皮下检测成瘤及肿瘤生长情况,采用免疫组织化学和Western印迹法检测移植瘤中MnSOD蛋白的表达水平。结果:建立稳定表达MnSOD蛋白的TE-1细胞株;RT-PCR及Western印迹法检测结果均证实,感染不同剂量的MnSOD重组质粒的TE-1细胞中,MnSOD的表达水平随感染剂量的增加而上升;细胞平皿克隆检测结果提示,TE-1Mm和TE-1Mh细胞的集落形成能力为(23.0±2.7)%和(45.3±4.5)%,分别低于和高于TE-1细胞的(34.7±4.2)%及TE-1n细胞的(33.7±4.7)%,实验组间比较及与对照组进行比较,差异均有统计学意义(P<0.05);AnnexinV-PI双染FCM检测结果显示,TE-1Mm和TE-1Mh细胞的早期细胞凋亡率为(10.6±1.0)%和(1.0±0.1)%,分别高于和低于对照组TE-1细胞的(2.6±0.2)%和TE-1n细胞的(2.5±0.3)%(P<0.05);细胞周期检测结果显示,MnSOD过量表达使G0/G1期细胞数在TE-1Mm细胞中增多,而在TE-1Mh细胞中减少,G2/M期和S期细胞数则在TE-1Mm细胞中减少,在TE-1Mh细胞中增多;与亲本TE-1细胞和感染空载体TE-1n细胞相比,TE-1Mm细胞处在增殖期细胞少,而TE-1Mh细胞处在增殖期细胞多(P<0.05)。TE-1Mm细胞接种裸鼠后,肿瘤生长慢,体积小,而接种TE-1Mh细胞则相反,肿瘤生长速度明显加快;瘤组织中的MnSOD蛋白的表达水平,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:MnSOD过量表达通过改变细胞周期和凋亡,对食管癌TE-1细�
- 孙国贵王雅棣郑明民于秀荣景绍武程云杰刘青
- 关键词：食管肿瘤转染锰超氧化物歧化酶
- 单核苷酸多态性与肿瘤易感性被引量：2
- 2010年
- 程云杰王雅棣
- 关键词：多态性单核苷酸易感性肿瘤
- 一氧化氮对食管癌细胞放射增敏效应及其机制的探讨被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨一氧化氮(NO)对食管癌细胞株TE-1的放射增敏影响及其可能的机制。方法:四甲基偶氮唑蓝比色实验(MTT法)观察NO及放射线对细胞增殖的抑制作用,并分析NO、TE-1的放射增敏作用。流式细胞法(FCM)观察NO、放射线对细胞凋亡及周期的影响。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法研究NO对锰超氧化物歧化酶(MnSOD)mRNA及蛋白表达的影响。结果:0.1～4mmol/L NO及1、2、4、6和8Gy放射线处理后,TE-1细胞生长抑制率明显增加。1.0mmol/L NO联合1、2、4和6Gy放射线处理后,放射增敏比值为2.68,说明NO有放射增敏作用。细胞凋亡实验显示,NO联合放射线作用的凋亡细胞比率为(10.7±0.7)%,与NO、放射线单独作用相比,差异有统计学意义,P<0.05。细胞周期实验显示,NO联合放射线使G0+G1期〔(29.00±1.20)%〕、S期〔(29.80±1.10)%〕细胞数减少,G2+M期〔(41.20±2.50)%〕细胞数增加,与NO、放射线单独作用相比,差异有统计学意义,P<0.05。RT-PCR显示,NO联合放射线作用的TE-1细胞MnSOD mRNA表达量为0.12±0.03,与NO、放射线单独作用相比,差异有统计学意义,P<0.05。蛋白质印迹法结果显示,NO联合放射线作用的TE-1细胞MnSOD蛋白表达量为0.13±0.1,与NO、放射线单独作用相比,差异有统计学意义,P<0.05。结论:NO可能通过影响TE-1细胞周期,降低MnSOD mRNA及蛋白的表达,从而抑制食管癌细胞凋亡,增强放射线对食管癌细胞的杀伤作用。
- 孙国贵王雅棣杨从容李成林胡万宁
- 关键词：一氧化氮超氧化物歧化酶食管肿瘤放射增敏
