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生化工程国家重点实验室开放基金(KF2008-7)
作品数:
2
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相关作者:
余蓉
苏志国
高漫潞
张贵锋
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相关机构:
四川大学
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苏志国
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HV12p-rPA血栓靶向脂质体的制备及体内溶栓实验
2011年
将通过蛋白质工程获得的抗凝溶栓双功能蛋白水蛭素12肽-瑞替普酶(HV12p-rPA)制备成靶向脂质体,并考察其体内溶栓效果。用薄膜分散-超声法制备HV12p-rPA脂质体,通过正交设计优化处方,采用碳二亚胺法偶联抗纤维蛋白原单克隆抗体(McAbSZ-65)制备HV12p-rPA靶向脂质体,采用大鼠颈总动脉血栓模型,考察HV12p-rPA靶向脂质体的体内溶栓效果。结果:最佳处方中HV12p-rPA脂质体的粒径为(142.45±1.20)nm,Zeta电位为(-30.63±0.48)mV,平均包封率为(91.59±1.39)%。靶向脂质体组(0.48±0.083)mg在相同剂量下(80k IU/kg)与PBS空白对照组(2.04±0.114)mg、游离HV12p-rPA组(1.2±0.100)mg和普通HV12p-rPA脂质体组(0.74±0.089)mg分别比较,其血栓干重明显减轻(P<0.05);靶向脂质体组与5倍剂量(400k IU/kg)的游离HV12p-rPA组(0.52±0.084)mg比较,其血栓干重较之偏轻(P>0.05)。制备出的靶向HV12p-rPA脂质体具有体内靶向溶栓效果。
邓璇
梁兰
高漫潞
康丽梅
余蓉
苏志国
吴梧桐
关键词:
脂质体
层析辅助体外复性含有多对二硫键的融合蛋白质
2010年
为建立一种基于阴离子交换介质辅助的含多对二硫键的抗凝溶栓双功能水蛭素12肽.瑞替普酶融合蛋白质(HV12p—rPA)的复性方法,采用Q Sepharose XL作为层析复性介质,通过正交实验考察蛋白质上样量、流速、脲梯度、洗脱液中精氨酸浓度、脲浓度、pH、还原型及氧化型谷胱甘肽等因素对复性过程的影响,探索最佳层析复性条件。结果表明:脲梯度、上样量及精氨酸浓度是影响复性的3个主要因素。脲梯度是复性成功的关键,上样量增大时复性蛋白质比活降低,精氨酸辅助HV 12p—rPA复性的最佳浓度为1mol/L。创建了脲、pH双梯度下的阴离子交换层析辅助HV12p—rPA的复性方法,复性后蛋白质的溶栓比活达到46520IU/mg,抗凝比活达到9980ATU/mg,与稀释复性方法相比,该方法能使复性蛋白质的溶栓比活提高14~15倍,抗凝比活提高7~8倍。
谢伟全
张贵锋
高玲
刘永东
余蓉
苏志国
关键词:
复性
二硫键
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