广西壮族自治区科技攻关计划(0895003-4-1)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：许黎明韦星明黄日波杨祥开庞浩更多>>
- 相关机构：广西科学院广西大学更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科技攻关计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 大黄欧文氏菌蔗糖异构酶控制产物特异性基序的定点突变被引量：2
- 2011年
- 大黄欧文氏菌(Erwinia rhapontici)蔗糖异构酶催化蔗糖异构为异麦芽酮糖和海藻酮糖,具有一个可能控制产物特异性的325RLDRD329基序。本研究以定点突变方法对该基序的带电荷氨基酸进行突变,共构建R325D、R328A、R328D、R328Q和D329N5个突变体。通过对突变体的酶学特性及突变体转化蔗糖的产物组成分析,结果显示所构建突变体的Km值上升约2～5倍,比活力下降至野生型SI比活力的11.8%～25.3%。HPLC分析显示Arg325和Arg328分别突变为Asp,导致产物中异麦芽酮糖/海藻酮糖的比例从6.93分别降至0.96和2.92,并伴随一个未知寡糖出现。Arg328突变为Ala和Gln同样导致反应产物中海藻酮糖比例上升,异麦芽酮糖比例下降。但是突变体D329N反应产物比例没有变化。以上结果表明325RLDRD329基序对大黄欧文氏菌蔗糖异构酶的酶活具有重要作用,并对酶的产物特异性产生影响。本研究结果将为该酶的作用机理研究奠定基础。
- 周兴韦星明杨祥开郑元涛庞浩许黎明黄日波
- 关键词：定点突变
- 短小芽孢杆菌HZbp脂肪酶基因的克隆表达被引量：1
- 2010年
- 以短小芽孢杆菌HZbp总DNA为模板以PCR的方式获得512 bp的脂肪酶基因,并在该基因的两端引入了EcoR1和Sal1的酶切位点,将该基因与大肠杆菌表达质粒pSE380连接,获得重组质粒pSE380-BPL。重组质粒转入大肠杆菌表达细胞株BL21,获得工程菌株BL21-BPL。序列分析显示所克隆的基因具有脂肪酶的保守G-X-S-X-G序列,SDS-PAGE电泳显示该脂脂肪酶的分子质量约为20 kDa。在LB培养基中,IPTG诱导浓度为1.0 mmol/L,33℃诱导培养10 h后,发酵液酶活达到8 U/mL。
- 张搏朱绮霞
- 关键词：脂肪酶短小芽孢杆菌克隆
