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黑龙江省科技攻关计划(CB02C111)
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HPV16地方分离株E6基因的克隆与原核表达研究
2007年
目的克隆人乳头瘤病毒(HPV16E6)基因并在大肠埃希菌中表达,对表达产物进行鉴定。方法用PCR方法从克隆质粒pUC19-HPV16E6E7中扩增HPV16E6基因,采用定向克隆构建pQE30-HPV16E6原核表达质粒.利用酶切和序列测定鉴定重组质粒。将pQE30-HPV16E6转化大肠埃希菌BL21(DE3),建立重组工程菌pQE30-HPV16E6/BL21(DE3)。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,SDS—PAGE分析蛋白表达情况,利用Western blot鉴定抗原特异性。结果PCR产物470bp,重组质粒经酶切和序列测定证实构建正确。SDS—PAGE分析在18×10^3处有蛋白条带出现,与预期一致。Western blot分析证实目的条带与HPV16E6抗体有特异性反应。结论成功构建了HPV16E6基因的基因工程菌株,能高效表达E6蛋白,表达蛋白具有良好的免疫反应性。
商庆龙
刘雪梅
王燕
李承刚
邵迪
陈思佳
韩聪
谷鸿喜
关键词:
大肠杆菌
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