河北省科技攻关计划(04225505)
- 作品数：3 被引量：24H指数：3
- 相关作者：吴志明谢晓亮温春秀张庆良周巧梅更多>>
- 相关机构：河北省农林科学院河北科润种业技术有限公司更多>>
- 发文基金：河北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 河北省马铃薯S病毒株系的分子鉴定研究被引量：7
- 2007年
- 对张家口分离的马铃薯S病毒（Potato virus S,PVS-Hebei）的CP基因进行了克隆和序列分析。以提纯的马铃薯植物总RNA为模板,应用RT-PCR技术扩增目的基因,PCR扩增产物克隆到质粒pMD18-T上,并进行了序列分析。结果表明,克隆的cDNA片段由885个核苷酸组成,编码294个氨基酸组成的33 kD蛋白,与PVS外壳蛋白的大小一致,与国际基因库登记的几个株系相比,结果表明,PVS-Hebei与它们之间的核苷酸序列同源性为82.4%-95.6%,氨基酸序列的同源性为93.9%-98.0%,进化树分析表明,PVS明显存在2个组（组Ⅰ和组Ⅱ）,PVS-Hebei归类为Ⅰ组,与来自组Ⅰ的欧洲普通株系（PVS-Uk）的亲缘性要比来自组Ⅱ北美的Andean株系（PVS-A）株系的亲缘性要近。
- 周巧梅谢晓亮温春秀马恢尹江吴志明
- 关键词：马铃薯S病毒株系鉴定
- 以马铃薯ND2 mRNA为内对照双重RT-PCR法检测马铃薯纺锤块茎类病毒被引量：4
- 2007年
- 根据马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)基因序列设计特异引物,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术进行PSTVd检测研究。为避免由于提取的RNA降解或者RT-PCR反应质量不高所造成的假阴性问题,在检测过程中引入马铃薯线粒体NADH脱氢酶ND2亚基基因mRNA为内对照,该内对照的一个引物跨越了该基因内含子区域,只对剪接后的mRNA进行特异扩增而不扩增其本身DNA。利用内对照引物和PSTVd特异引物进行双重RT-PCR检测,分别扩增出190 bp的内对照基因特异片段和360 bp的PSTVd特异条带,与预期引物设计大小一致。引入的内对照可以较好地监控PSTVd的RT-PCR检测过程。
- 马恢谢晓亮尹江温春秀吴志明
- 关键词：马铃薯马铃薯纺锤块茎类病毒双重RT-PCRNADHMRNA
- 河北省马铃薯Y病毒株系分子鉴定及其RT-PCR检测被引量：14
- 2005年
- 根据马铃薯Y病毒(PotatovirusY,PVY)的外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物,从感染PVY的马铃薯田间病叶组织中提取出病毒的RNA,进行cDNA合成及PCR扩增,得到一条长度约800bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的基因片段大小一致,本试验建立了快速、灵敏、简便的PVY检测的方法。将RT-PCR扩增产物克隆到质粒pGEM-T上,并进行了序列分析。结果表明,克隆的cDNA片段由801个核苷酸组成,编码267个氨基酸组成的理论分子量为29kD蛋白,与PVY外壳蛋白的大小一致,与基因库登记的代表性株系相比,它们之间的核苷酸序列同源性为89 6%～98 8%,氨基酸序列的同源性为93 3%～98 5%,说明PVYCP基因具有高度的保守性(记为PVY-HBEI),与国内报道的PVY-CHU、PVY-ZHJ和PVY-ZHOU株系的氨基酸序列同源性分别为96 6%、98 5%和97 8%,与PVYN和PVYO株系的氨基酸序列同源性分别为93 6%和97 8%,从分子水平上确定PVY-HBEI归属于普通株系(PVYO株系)。
- 吴志明时星谢晓亮温春秀张庆良
- 关键词：马铃薯Y病毒反转录-聚合酶链式反应病毒检测株系鉴定
