安徽省自然科学基金(KJ2010A116) 作品数:3 被引量:8 H指数:2 相关作者: 黄龙全 张剑韵 曾海彬 马娅萍 吴琼 更多>> 相关机构: 安徽农业大学 更多>> 发文基金: 安徽省自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 更多>>
烟草吡哆胺-丙酮酸转氨酶的部分纯化与表征 2013年 通过冷冻干燥、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析、Sephadex G-100凝胶过滤柱层析,SP葡聚糖凝胶C-25阳离子交换柱层析等分离纯化技术,对烟草吡哆胺-丙酮酸转氨酶进行分离纯化。采用苯肼衍生化方法检测活性,并对其基本酶学性质进行分析。结果显示:该酶被纯化了92.34倍;最适温度为70℃,最适pH为9.0。在pH7.0~9.0内稳定且热稳定性较好,80℃保温3h仍有51.55%的酶活力;在最适反应条件下,测得反应底物吡哆胺和丙酮酸的Km值分别为6.337mmol·L-1和0.867mmol·L-1。该结果为进一步研究烟草体内VB6代谢机制奠定了基础。 吴琼 黄龙全 张剑韵关键词:烟草 纯化 性质分析 采用高效液相色谱技术分析烟草体内的维生素B_6化合物 被引量:7 2011年 维生素B6(VB6)是一类化合物的总称。近年来研究发现VB6在植物体内发挥抗逆作用。烟草作为模式植物其体内VB6的存在形态还未见报道。本研究采用高效液相色谱结合荧光检测技术对烟草体内VB6的存在形态进行了分析。结果表明:土壤栽培烟草叶、茎和根中VB6的含量依次为2.9、1.7、3.0μg/g鲜重;组培烟草叶片的VB6含量为3.9μg/g鲜重,构成比为磷酸吡哆胺(PMP)7%、吡哆胺(PM)14%、磷酸吡哆醛(PLP)19%、吡哆醛(PL)29%、吡哆醇(PN)30%;组培烟草在连续3周的检测过程中,PLP和PL含量下降、PN含量上升,VB6总量保持相对稳定。研究结果有助于以烟草为材料,进一步开展植物体内VB6代谢机制和特殊生理机制的研究。 曾海彬 张剑韵 黄龙全关键词:烟草 高效液相色谱 维生素B6 烟草磷酸吡哆醛水解酶的分离纯化与表征 被引量:2 2012年 采用硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换、Sephadex G-100凝胶过滤和SP Sephadex C-25阳离子交换柱层析等步骤,对烟草磷酸吡哆醛水解酶进行了分离纯化。结果表明:该酶被纯化了119.6倍,得率为28.49%,经凝胶过滤和SDS-PAGE测得该酶的全分子量为49.6kDa,亚基分子量约为25kDa;该酶最适温度为50℃,最适反应pH为5.5;Mg2+、Ca2+、Mn2+等对该酶有激活作用,金属离子螯合剂EDTA对酶有抑制作用,加入Mg2+后抑制作用得到解除;在最适反应条件下,测得反应底物磷酸吡哆醛(PLP)和磷酸吡哆胺(PMP)的Km值分别为0.23mmol/L和0.56mmol/L。 马娅萍 黄龙全 张剑韵关键词:烟草 水解酶 纯化 酶性质