上海市“科技创新行动计划”(10431903700)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：李宗海蒋华李雅婷石必枝孔娟更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：上海市“科技创新行动计划”国家科技重大专项国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 靶向EGFR隐蔽表位的免疫毒素的制备及其对肿瘤细胞的特异性杀伤被引量：2
- 2013年
- 目的:制备靶向表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)隐蔽表位(287-302)的免疫毒素,并鉴定其生物学功能。方法:通过基因工程方法将抗EGFR(287-302)的806单链抗体(806 single-chain antibody fragment,806scFv)基因经柔性肽与铜绿假单胞菌外毒素A(Pseudomonas exotoxin A,PEA)的截短形式PE38KDEL连接,构建原核表达载体pET-22b-806scFv-PE38KDEL并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经纯化获得该免疫毒素融合蛋白806scFv-PE38KDEL,ELISA和流式细胞术检测其与EGFR的结合活性,间接免疫荧光检测重组免疫毒素的内化作用,CCK-8法检测806scFv-PE38KDEL对人脑胶质瘤细胞U87MG和U87MG-EGFRvⅢ、表皮癌细胞A431、乳腺癌细胞MDA-MB-468、舌癌细胞CAL-27的细胞毒性。结果:成功构建重组免疫毒素806scFv-PE38KDEL,诱导表达的蛋白806scFv-PE38KDEL以包涵体形式存在,经纯化后的纯度>95%,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定为目的蛋白。806scFv-PE38KDEL能EGFRvⅢ胞外段蛋白结合,还能与外源性表达EGFRvⅢ的肿瘤细胞和高表达EGFR的肿瘤细胞相结合,而与表达低水平EGFR的肿瘤细胞不结合。806scFv介导了重组免疫毒素的内化。806scFv-PE38KDEL对靶细胞有明显的杀伤作用,对过表达EGFRvⅢ的U87MG-EGFRvⅢ细胞IC50值为(5.85±0.03)ng/ml,对EGFR高表达细胞MDA-MB-468、A431、CAL-27的IC50值分别为(162.80±0.06)、(75.72±0.04)、(123.70±0.03)ng/ml。在1μg/ml的质量浓度下,相比PBS对照组,806scFv-PE38KDEL对U87MG-EGFRvⅢ、MDA-MB-468、A431和CAL-27细胞增殖的抑制率均显著增高[(98.67±0.07)%vs(2.45±2.85)%、(86.26±1.01)%vs(0.48±1.76)%、(96.72±0.16)%vs(1.33±1.31)%、(96.29±0.30)%vs(2.00±0.60)%,均P<0.01],而对U87MG细胞几乎没有抑制作用[(3.59±2.09)%vs(0.19±0.95),P>0.05]。结论:本研究所制备的靶向EGFR(287-302)表位的重组免疫毒素806scFv-PE38KDEL能特异地结合并杀伤EGFRvⅢ或EGFR高表达的肿瘤细胞。
- 李雅婷石必枝孔娟李宗海
- 关键词：表皮生长因子受体免疫毒素单链抗体
- 单克隆抗体CH12抑制头颈部鳞状细胞癌裸鼠种植瘤的生长被引量：1
- 2012年
- 目的:观察嵌合型单克隆抗体CH12对头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinomas,HNSCC)裸鼠种植瘤生长的抑制作用,为进一步研究CH12单抗在肿瘤治疗中的作用提供参考数据。方法:Western blotting检测5种HNSCC细胞系A253、CAL27、Detroit 562、FaDu和RPMI 2650中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达,流式细胞术检测CH12单抗同这5种细胞系的结合能力。皮下接种CAL27和A253细胞,建立HNSCC裸鼠种植瘤模型。模型鼠腹腔注射CH12单抗,以PBS作为阴性对照,观察肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线。结果:EGFR在CAL27、A253、FaDu及Detroit 562细胞中均有不同程度的表达,其中CAL27细胞中EGFR的表达水平最高,A253细胞次之。CH12单抗与5种HNSCC细胞系的结合能力由高到低依次为CAL27、FaDu、A253、Detroit 562和RPMI 265细胞。CH12单抗对CAL27和A253细胞裸鼠种植瘤的生长均有显著抑制作用,抑瘤率分别为56.8%(P=0.022)和59.7%(P=0.015)。结论:单克隆抗体CH12对EGFR高表达的HNSCC细胞种植瘤的生长具有明显的抑制作用。
- 杨雅琼李宗海胡素文蒋华
- 关键词：单克隆抗体表皮生长因子受体头颈部鳞状细胞癌
- 双特异性单链抗体BiTE在肿瘤靶向治疗中的研究进展
- 2012年
- BiTE(bispecificTcellengager)是一种以T细胞作为效应细胞的双特异性单链抗体,它具有2个抗原结合部位,可以同时结合T细胞及病变细胞表面的抗原分子,从而有效地激活静止的T细胞,达到杀伤病变细胞的目的。其分子量小,易穿透肿瘤组织,缺乏Fc段,免疫源性低,是一种极具发展潜力的新型抗体形式。对BiTE的发展历程、结构和作用机制以及在肿瘤靶向治疗中的应用做简要综述。
- 董琼娜蒋华李宗海
- 关键词：双特异性抗体BITE肿瘤靶向治疗
