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杨树木质部特异启动子诱导活性分析: 2016年; 以融合pMDCesAP-GUS、pJCesAP-GUS、pDMDCesAP-GUS的转基因杨树作为试验材料,分别对其根、茎、叶进行创伤及ABA(脱落酸)激素诱导处理,通过定量检测转基因杨树不同器官的GUS酶活性,分析不同启动子对创伤及ABA激素诱导的响应情况。结果表明,创伤处理转基因杨树12h时,PMDCesAP杨树根的GUS酶活力达到最高点。ABA激素处理转基因杨树,pBI121在根、叶中的GUS酶活力的趋势是先升高后降低;处理3h时,GUS酶活力最高;pBI121的茎在ABA激素处理前GUS酶活力是最高的;PMDCesAP的根、茎在ABA激素处理前GUS酶活力处于最大值。; 李杰雒雅婧张爽杜克久; 关键词：杨树 GUS活性

杨树组织特异性强启动子的筛选被引量：3: 2015年; 为了筛选到具有木质部组织特异性并有较强功能的启动子,将河北林木种质资源与森林保护重点实验室前期已获得的MDCes A启动子、JCes AP启动子、DMDCes AP启动子（含2个串联MDCes AP启动子）融合GUS报告基因的p MDCes AP-GUS、p JCes AP-GUS、p DMDCes AP-GUS这3个植物表达载体,通过农杆菌介导转化杨树,对转化后的杨树进行GUS活性的定性及荧光定量检测,以比较3个启动子在转基因植物中的表达能力和水平。筛选到的组织特异启动子与抗天牛基因融合,将提高毒蛋白在相应部位的表达量,这对天牛类蛀干害虫的防治具有重大意义。; 李丽翟文君吕文海; 关键词：GUS报告基因荧光定量检测

不同地理种群桑天牛的线粒体COⅠ基因序列变异与遗传分化: 2015年; 采用PCR技术扩增6个地理种群桑天牛的线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ（mt DNA COⅠ）基因序列,基于mt DNA COⅠ基因序列变异探讨不同地理分布桑天牛种群间的遗传距离、系统发育以及遗传分化程度。对6个地理种群的33个桑天牛样本的mt DNA COⅠ基因扩增产物的测序结果表明共有19个位点发生变异,占序列总长的4.0%,其中来自河南省济源的桑天牛有12个变异位点,来自浙江省的桑天牛有9个变异位点,来自河北省4个地区的桑天牛的变异位点较少;河北省的4个地理种群的遗传距离较小,在0.001 3-0.002 6之间,河北、河南、浙江种群间的遗传距离较大,其中河南种群与河北种群的遗传距离又远远大于浙江种群与河北种群的遗传距离,后2大地理种群分布区域的海拔更接近。利用MEGA4.1软件构建的NJ系统进化树显示,6个地理种群形成河北、河南和浙江3大地理分布格局;从遗传分化程度上来看,桑天牛种群的3大地理分布格局不存在共享的单元型,遗传分化系数（FST）在0.804 1-0.892 2范围内,遗传分化程度较高。综合分析认为,不同地理种群桑天牛存在分化的原因除地理分布外,更重要的是生态条件的差异。; 张爽苏筱雨黄大庄马向超; 关键词：桑天牛地理种群遗传分化

杨树木质部特异启动子5'端侧翼序列缺失表达载体构建及转化烟草的研究被引量：6: 2013年; 采用5'端系列缺失分析法,PCR扩增杨树木质部特异性启动子JCesAP中与转录起始位点距离不同的5'端缺失启动子片段ZU2、ZU3、ZU4。为鉴定缺失片段的功能活性,以β-葡糖醛酸酶基因(GUS)作为报告基因,分别构建JCesAP启动子3个缺失片段的表达载体,并通过农杆菌介导瞬时转化烟草。对转化烟草植株进行GUS活性检测的结果表明,缺失片段ZU3、ZU4有启动子活性,且ZU4启动子活性强度与CaMV35S启动子相当,转化烟草的叶片表面都呈现大面积蓝色,而ZU2没有启动子活性。木质部特异性核心启动子的筛选将有助于利用转基因技术治理桑天牛等天牛类蛀干害虫。; 赵金风李杰张爽杜克久; 关键词：杨树

4种植物次生物质对黄粉虫生长发育的影响及维生素B1的增效作用被引量：3: 2021年; 为了研究植物次生物质对鞘翅目昆虫生长发育的影响,为绿色防控害虫提供理论依据,本试验选取槲皮素、芦丁、京尼平、绿原酸4种植物次生物质,研究其对黄粉虫的触杀作用及生长发育的影响,并就维生素B 1对植物次生物质防御黄粉虫的增效作用进行了探索。研究结果表明,京尼平对黄粉虫生长发育的抑制作用较强,京尼平处理组黄粉虫的幼虫期显著延长,约为对照的1.3倍,幼虫活动缓慢,蛹重下降,化蛹率低且畸形蛹较多,成虫产卵量仅为对照40%。两两植物次生物质组合使用对黄粉虫的抑制作用比单独使用效果好,其中最佳组合为京尼平和槲皮素。在植物次生物质中添加0.3%的维生素B 1可以增强植物次生物质对黄粉虫的触杀效果。; 汪彤史东霞张爽杜克久; 关键词：植物次生物质黄粉虫杀虫活性维生素B1

农杆菌介导木本植物遗传转化的研究进展被引量：15: 2018年; 农杆菌介导法是目前应用较广泛的转基因技术。该研究对农杆菌介导木本植物遗传转化的发展状况、转化方法进行了综述,重点分析了在木本植物中,外植体类型、农杆菌浸染时间、共培养条件和筛选转化等主要因素对农杆菌转化效率的影响,以期为提高木本植物的转化效率和转基因技术提供参考依据。; 王栋鑫彭棣张爽; 关键词：农杆菌木本植物

木质部特异性启动子缺失片段的克隆及功能分析被引量：1: 2016年; 木质部特异性启动子可使外源基因在木质部中进行高效表达,本试验采用5'端系列缺失分析法,通过PCR扩增出杨树木质部特异性启动子MDCes AP中与其转录起始位点距离不同的5'端缺失的启动子片段MU2、MU4。将扩增片段替换植物特异性表达载体p BI121中的Ca MV35S启动子,使每个基因片段与载体中GUS报告基因相连得到重组质粒并转入农杆菌。通过烟草瞬时转化检测结果表明,缺失片段MU2、MU4均具有启动子功能,且两者活性均显著高于Ca MV35S启动子,并具有木质部组织特异性。木质部特异启动子结构特征和功能的深入研究将为确定其中决定木质部组织特异性的必要元件以及其他具有诱导活性的顺式作用元件奠定基础,从而为利用这些顺式作用元件调控外源基因在特定的时间、特定的组织器官高效表达提供可能。; 雒雅婧王良杜克久张爽; 关键词：启动子

植物启动子研究进展被引量：13: 2015年; 植物启动子是植物基因转录所需的重要调控元件。现结合近几年对启动子的相关研究,从启动子的结构及其功能、分类、克隆和功能分析方法等方面对其进行概述。重点归纳了植物组织特异性启动子的分类及其近期研究应用进展,并提出了植物启动子未来的研究重点。; 雒雅婧李杰张爽杜克久; 关键词：植物启动子组织特异性启动子克隆方法

杜仲半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因EuCPI的克隆及功能分析被引量：2: 2021年; 【目的】以杜仲种仁为试材,克隆EuCPI基因全长序列并分析其结构特征,探究该基因的抗逆功能及对黄粉虫生长发育的影响,为今后深入研究其抗逆机制提供理论基础。【方法】提取杜仲种仁的RNA并反转录成cDNA,采用RACE技术扩增EuCPI基因的全长cDNA序列;利用生物信息学网站对其所编码蛋白的理化性质及结构功能进行分析预测;利用pET28a质粒构建原核表达重组载体,对重组蛋白进行SDS-PAGE、Western Blot及蛋白纯化试验;利用重组的原核表达系统探究在盐胁迫和高温胁迫下含有EuCPI基因的大肠杆菌和对照组之间生长曲线的不同,初步鉴定该基因对大肠杆菌的影响;此外,利用诱导后的重组菌液饲喂黄粉虫,探究EuCPI基因对黄粉虫生长发育的影响。【结果】EuCPI基因具有547 bp的全长序列(GenBank登录号:MT702592),开放阅读框(ORF)为309 bp,编码蛋白由102个氨基酸组成,理论等电点(pI)为6.41,分子质量为11.17 kDa,不稳定指数为27.73,属于稳定蛋白,总平均亲水性为-0.416,属于亲水蛋白。氨基酸序列分析结果表明,EuCPI蛋白无跨膜结构,无信号肽,主要由50%的α-螺旋、36.27%的无规则卷曲、11.76%的延伸链和1.96%的β-折叠组成,属于半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族。系统进化树分析结果表明,该蛋白与欧洲栓皮栎CPI编码蛋白同源性较高。通过构建的原核表达载体pET28a-EuCPI,诱导表达并纯化出15.29 kDa大小的重组蛋白。高温胁迫试验生长曲线结果表明,在37℃条件下前10 h含有EuCPI基因的BL21(DE3)大肠杆菌与对照组长势基本一致,而在42℃和50℃条件下前10 h含有EuCPI基因的菌生长速度明显大于对照组,且对照组出现明显的生长抑制情况。固体培养基盐胁迫试验结果表明,随着培养基中NaCl浓度增加,试验组和对照组菌落均出现生长抑制现象,但含有EuCPI基因的菌落数量明显多于对照组,尤其在0.75 mol·L^(-1)时,前者有较多�; 张普邵文靖杜克久张爽; 关键词：基因克隆耐盐抗虫

杨树组织特异性强启动子的筛选: 2014年; 为了筛选到具有木质部组织特异性并有较强功能的启动子,将河北林木种质资源与森林保护重点实验室前期已获得的MDCes A启动子、JCes AP启动子、DMDCes AP启动子(含2个串联MDCes AP启动子)融合GUS报告基因的p MDCes AP-GUS、p JCes AP-GUS、p DMDCes AP-GUS这3个植物表达载体,通过农杆菌介导转化杨树,对转化后的杨树进行GUS活性的定性及荧光定量检测,以比较3个启动子在转基因植物中的表达能力和水平。筛选到的组织特异启动子与抗天牛基因融合,将提高毒蛋白在相应部位的表达量,这对天牛类蛀干害虫的防治具有重大意义。; 李杰赵金风张爽杜克久; 关键词：GUS报告基因荧光定量检测

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