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博士科研启动基金(505033)
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徐明恺
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肠毒素C2第20和22位氨基酸对其超抗原活性的影响
2014年
目的:揭示突变蛋白SEC2(T20L/G22E)超抗原活性较野生型SEC2显著增强的潜在机制。方法:WST-1法检测突变蛋白SEC2(T20L/G22E)在体外刺激小鼠脾淋巴细胞增殖活性,进一步应用流式细胞术和荧光定量PCR技术分别检测CD4+和CD8+T淋巴细胞增殖、特异性VβT淋巴细胞增殖以及相关细胞因子mRNA丰度变化。结果:与野生型SEC2相比,突变蛋白SEC2(T20L/G22E)能够在体外显著刺激小鼠脾淋巴细胞增殖,但二者具有相似的特异性VβT淋巴细胞增殖谱,并且SEC2(T20L/G22E)能够较rSEC2激活更多携带有Vβ5.3、Vβ8.1及Vβ8.3的T淋巴细胞;进一步体内实验发现SEC2(T20L/G22E)能够较rSEC2激活更多外周血和脾脏中CD4+和CD8+T淋巴细胞增殖及相关细胞因子的表达。结论:突变蛋白SEC2(T20L/G22E)超抗原活性增强的机制可能是用亮氨酸和谷氨酸替代原来20和22位上的氨基酸后提高了SEC2(T20L/G22E)与特异性TCR-Vβ的亲和力,进一步激活更多的SEC2特异性T淋巴细胞,最终引起T淋巴细胞亚型的显著性增殖,同时诱导更多与抗肿瘤、增殖相关的细胞因子的表达。
刘彦礼
牛荣成
徐明恺
李旭
苏振成
张惠文
关键词:
金黄色葡萄球菌肠毒素C2
超抗原
T淋巴细胞
细胞因子
Zn^2+及其谷氨酸结合位点突变对金黄色葡萄球菌肠毒素 C2超抗原活性的影响
2014年
目的:研究金黄色葡萄球菌(金葡菌)肠毒素C2(SEC2)中与Zn^2+结合相关的谷氨酸残基突变及Zn^2+自身对其超抗原活性的影响。方法应用定点突变技术将SEC2中与Zn^2+结合相关的谷氨酸残基突变成丙氨酸残基,分离纯化后获得突变蛋白rSEC2(E71A)、rSEC2(E80A)及rSEC2(E71A/E80A);突变蛋白的超抗原活性及Zn^2+对SEC2超抗原活性的影响通过MTT法检测其刺激小鼠脾淋巴细胞的增殖来验证,而结构稳定性通过对胃蛋白酶及胰蛋白酶的抵抗能力来检测。结果蛋白酶酶切结果与脾淋巴细胞增殖实验结果表明参与第2个Zn^2+结合的71位及80位谷氨酸残基突变对SEC2的酶解稳定性及超抗原活性没有显著影响;但微量Zn^2+(10μmol/L)却能显著增强rSEC2的超抗原活性,并且在EDTA存在下,仅有Zn^2+在一定浓度下才可完全恢复其超抗原活性。结论SEC2分子中的Zn^2+结合位点的突变对其自身结构稳定性和超抗原活性无显著影响,但SEC2超抗原活性发挥过程中Zn^2+可能通过其他途径间接影响其超抗原活性。
刘彦礼
牛荣成
徐明恺
李旭
孙健
张惠文
关键词:
ZN^2+
金黄色葡萄球菌肠毒素C2
超抗原
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