广东省自然科学基金(5100992)
- 作品数：5 被引量：18H指数：2
- 相关作者：徐令郭海霞李文益夏焱黎阳更多>>
- 相关机构：中山大学附属第二医院香港中文大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- siRNA对VEGFR_2的表达抑制及对HL60细胞和人内皮细胞的影响被引量：6
- 2006年
- 目的为探索治疗白血病的新思路研究了小干扰RNA(siRNA)对肿瘤细胞株HL60和人血管内皮细胞(EC)株EA.hy926血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)基因表达的抑制作用。方法制备并筛选VEGFR2基因的最有效siRNA,并据此设计shRNA寡核苷酸链,构建pENTRTM/U6干扰表达载体。瞬时转染细胞,采用MTT法、RT-PCR法及Westernblot测定VEGFR2表达抑制情况。结果VEGFR2siRNAa、b、c抑制HL60细胞效率分别为77.5%、45.0%、80.9%,以siRNAc最高,利用其shRNA和pENTRTM/U6构建的入门克隆转染HL60,抑制细胞效率达99.1%;此入门克隆对VEGFR2基因mRNA和蛋白的表达抑制在HL60和EA.hy926细胞均显著。结论在体外shRNA表达载体可有效抑制HL60细胞VEGFR2自分泌和旁分泌,有效抑制白血病细胞生长。
- 郭海霞薛红漫夏焱徐令徐宏贵李文益
- 关键词：SIRNAVEGFR2HL60细胞EC
- 人胚胎干细胞分化为心肌细胞的体外实验(英文)被引量：2
- 2007年
- 背景:体外诱导胚胎干细胞分化为心肌细胞国内外已做了大量研究。然而,在国内对胚胎干细胞分化为心肌细胞的研究只限于小鼠胚胎干细胞,还未见有将人胚胎干细胞诱导为心肌细胞的报道。目的:将人胚胎干细胞系H14诱导分化为心肌细胞。设计:体外人胚胎干细胞培养细胞,采用悬浮法让其形成拟胚体,在不同的分化时期观察出现有节律性收缩的拟胚体的比率以及心肌特异性基因的表达。单位:香港中文大学公共卫生学院何鸿燊防治传染病研究中心分子生物学实验室。材料:实验所用人胚胎干细胞株H14来源于美国威斯康星大学WiCell研究所并授权使用。方法:于2006-08/12在香港中文大学公共卫生学院何鸿燊防治传染病研究中心分子生物学实验室完成。采用悬浮法培养人胚胎干细胞株H14,让其形成拟胚体。4d后,将拟胚体培养在包被有明胶的6孔培养板内(5～10个胚胎体/孔),让其自发分化为跳动的拟胚体,显微镜下观察有节律性收缩的拟胚体;然后采用反转录聚合酶链反应方法检测心肌特异性基因的表达。主要观察指标:不同的分化时期有节律性收缩的拟胚体的比率以及心肌特异性基因的表达。结果:拟胚体形成8d后,大约有2%的拟胎体出现有节律性的收缩,随着时间的延长,产生收缩的拟胚体越多,到第16天,大约有10%的拟胚体出现节律性跳动,跳动频率为70～100次/min。反转录聚合酶链反应结果显示,有节律性收缩的拟胚体表达心肌特异性的转录因子GATA-4和Nkx2.5,心肌特异性基因Isl-1和α-MHC。结论:国内首次成功使人胚胎干细胞诱导分化为心肌细胞。
- 范新兰孟春玲麦友刚徐令
- 关键词：分化
- 慢病毒载体携带的VEGFR_2 shRNA对HL60的体外杀伤作用被引量：7
- 2007年
- 目的:为寻找高效低毒的选择性抗白血病药物,研究慢病毒载体携带的血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)基因短发夹RNA(shRNA)对肿瘤细胞株HL60的体外杀伤作用。方法:制备并筛选VEGFR2基因的最有效siRNA,并据此设计shRNA寡核苷酸链,构建pU6/shVEGFR2入门克隆。瞬时转染细胞,采用MTT法、RT-PCR法及Western blotting测定VEGFR2表达抑制情况。构建表达克隆,与ViraPowerTMPackaging Mix共转染到293FTTM细胞中,产生携带Lenti6/shVEGFR2的慢病毒载体。将病毒上清加入HL60细胞中转导,测定HL60细胞抑制率并与pU6/shVEGFR2入门克隆脂质体转染结果比较。结果:VEGFR2siRNAc抑制HL60细胞效率最高,利用其shRNA和pENTRTM/U6构建的入门克隆转染HL60,抑制细胞效率达84·9%;显著抑制HL60细胞VEGFR2基因mRNA和蛋白的表达。pU6/shVEGFR2入门克隆转染、Lenti6/shVEGFR2表达克隆转导HL60细胞后48h细胞抑制率相近,48h后入门克隆转染组细胞抑制率明显下降;而表达克隆转导组细胞抑制率变化缓慢,在96h达高峰,120h稍降,变化无显著差异。结论:在体外慢病毒载体携带的VEGFR2shRNA可有效阻断HL60细胞VEGF/VEGFR自分泌链,有效抑制白血病生长。
- 郭海霞李文益徐令苏浩彬黎阳夏焱梁立阳
- 关键词：HL60细胞
- 炎症刺激因子TNF-α诱导转录因子ESE-1在内皮细胞中的表达被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨炎症刺激因子TNF-α介导炎症时上调血管内皮细胞Tie2基因的机制。方法:采用RT-PCR、定量PCR以及Western blotting方法检测TNF-α作用于原代人主动脉内皮细胞株(HAECs)、原代人肺动脉内皮细胞株(HPAECs)时Tie2基因及ETS转录因子mRNA及蛋白的表达。结果:TNF-α可增加血管内皮细胞Tie2基因的表达。TNF-α不能增加内皮细胞HAECs和HPAECs的NERF-2、ELF表达;TNF-α刺激后约24h第1次检测到ESE-1 mRNA表达。延长刺激作用时间后,发现在18-36h之间可测到ESE-1 mRNA表达,24h为高峰,而蛋白质表达在18h极弱,36h达峰值。检测中所观察到ESE-1表达在Tie2表达之前且表达模式类似。结论:Tie2基因在TNF-α刺激时的上调与NERF-2或ELF介导无关,ESE-1可能在炎症因子刺激后Tie2的转录调节中起作用。
- 徐令郭海霞何波叶华
- 关键词：肿瘤坏死因子TIE内皮细胞转录因子
- 炎症刺激因子上调Tie 2基因在动脉内皮细胞中表达的研究被引量：2
- 2007年
- 目的探讨肺动脉和主动脉炎症发生时,血管生成的作用机制。方法采用定量PCR及Western blot方法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)刺激原代人主动脉内皮细胞(HAECs)和(或)原代人肺动脉内皮细胞(HPAECs)后,Tie 2基因的表达情况。结果TNF-α和IL-1β均能增加原代血管内皮细胞Tie2基因的表达。TNF-α作用于HAECs,HPAECs及IL-1β作用于HPAECs 24h后,Tie 2的表达明显增加;在HPAECs,两者的作用均在36h达高峰。结论炎症刺激因子TNF-α和IL-1β在人血管内皮细胞可诱导Tie 2基因的表达,它可能与炎症状态下的血管形成有关。
- 郭海霞冯淑英李文益徐令
- 关键词：肿瘤坏死因子-Α白细胞介素-1ΒTIE内皮细胞
