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脂质体RNAiMAX介导siRNA转染沉默星形胶质细胞AQP4基因: 2014年; 目的明确脂质体RNAiMAX(lipofectamine RNAiMAX)是否可以介导小干扰RNA(siRNA)转染入原代培养星形胶质细胞并实现水通道蛋白4(AQP4)基因沉默。方法利用原代培养的Wistar大鼠大脑皮层星形胶质细胞,通过倒置荧光显微镜和Tecan酶标仪,观察lipofectamine RNAiMAX是否能介导Cy3标记的siRNA转染入细胞内,以及RNAiMAX浓度和siRNA浓度对转染效率的影响;利用Real-time PCR方法检测AQP4 siRNA转染的基因沉默效果。结果倒置荧光显微镜和Tecan酶标仪检测发现,随着siRNA和RNAiMAX浓度的增加,转染细胞荧光强度随之增加(n=6);Real-time PCR检测结果显示,3ml/L RNAiMAX和30nmol/L AQP4 siRNA以及6ml/L RNAiMAX和60nmol/L AQP4 siRNA转染星形胶质细胞24h、48h、72h时,AQP4 mRNA水平均降低80%以上(n=6)。结论 Lipofectamine RNAiMAX可以介导siRNA转染入原代培养星形胶质细胞中并实现AQP4基因的沉默,3ml/L RNAiMAX和30nmol/L AQP4 siRNA即可达到理想的沉默效果。; 张伟徐立新杨少华师忠芳董丽萍袁芳; 关键词：星形胶质细胞水通道蛋白4 SIRNA转染基因沉默实时定量聚合酶链反应

比较谷氨酸引起两品种大鼠培养星形胶质细胞肿胀的差异被引量：1: 2016年; 目的比较Wistar大鼠及SD大鼠培养星形胶质细胞(AST)对谷氨酸所致细胞肿胀的差异。方法利用新生1 d的Wistar大鼠和SD大鼠进行AST原代及传代培养,传代培养10 d分别给予1、10 mmol/L谷氨酸孵育48 h,通过乳酸脱氢酶释放率检测细胞活性,通过胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色、Image Pro Plus软件测量细胞周长表示细胞体积变化,通过逆转录实时荧光定量PCR法检测水通道蛋白4(AQP4)mRNA表达变化。结果谷氨酸对不同品种大鼠AST活性影响没有差异(P>0.05)。在正常情况下,Wistar大鼠AST周长小于SD大鼠,在给予谷氨酸处理后,均明显大于SD大鼠(P<0.05)。在给予1 mmol/L谷氨酸后,Wistar大鼠AST的AQP4mRNA表达明显高于SD大鼠(P<0.05)。结论 Wistar大鼠AST对谷氨酸所致细胞肿胀较SD大鼠明显,且谷氨酸对两品种大鼠AST上AQP4表达变化的影响存在差异。; 师忠芳徐立新卢易董丽萍闫旭杨少华袁芳; 关键词：谷氨酸星形胶质细胞水通道蛋白4

腺苷酸活化蛋白激酶在星形胶质细胞中的表达: 2017年; 目的通过检测腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)α1、α2、β1、β2、γ1及γ2亚基在培养大鼠星形胶质细胞中的表达,探讨AMPK在星形胶质细胞中以何种形式组成三聚体。方法取新生1 d的Wistar大鼠脑皮层进行星形胶质细胞培养,用胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和S100β免疫荧光染色鉴定星形胶质细胞。应用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测培养星形胶质细胞中AMPK各亚基的表达情况。结果 GFAP和S100β细胞免疫荧光染色显示,培养细胞95%以上为免疫荧光染色阳性细胞。RT-PCR实验结果显示培养的星形胶质细胞中有AMPKα1、α2、β1、γ1及γ2亚基的特异性目的条带出现,没有AMPKβ2亚基目的条带出现;在出现的5种特异性目的条带中,AMPKα2、β1及γ1亚基目的条带表达相对较多,而AMPKα1及γ2亚基只有微弱表达。结论星形胶质细胞中AMPK由α2、β1及γ1亚基组成三聚体,在星形胶质细胞能量代谢调节中发挥重要作用。; 师忠芳徐立新闫旭董丽萍袁芳; 关键词：腺苷酸活化蛋白激酶星形胶质细胞细胞培养缺血性脑损伤

实验教学对医学及护理研究生科研能力的影响被引量：6: 2014年; 随着医疗卫生事业的迅速发展，医学及护理研究生的培养受到广泛重视。医学及护理研究生科研能力的培养在整个研究生培养体系中占有重要位置，包括生物化学、分子生物学及细胞培养等在内的实验教学对医学及护理研究生科研能力的培养有重要影响。其中的细胞培养实验教学不仅使学生学到了细胞培养的相关知识，也使其认识到无菌观念的重要性，对其今后从事临床及护理工作非常重要；同时，细胞培养实验教学能提高医学及护理研究生创新能力、思维能力、观察能力、实际操作能力、统筹能力及协调能力等科研能力。; 师忠芳袁芳

利用高内涵成像分析系统研究谷氨酸引起星形胶质细胞内Ca2+浓度的变化: 目前测定细胞内钙的方法主要应用流式细胞仪或者激光共聚焦显微镜。高内涵成像系统分析系统是一种新的高通量检测细胞形态、功能等变化的方法,可以同时选取不同波长的荧光通道,对多种荧光探针标记的细胞进行检测,可以在细胞水平获取大量...; 卢易师忠芳徐立新董丽萍袁芳; 关键词：星形胶质细胞; 文献传递

医学及护理研究生科研能力培养的探讨被引量：7: 2014年; 科研能力培养是医学及护理研究生培养的重要环节和主要目的，但目前关于医学及护理研究生的科研能力培养中尚存在许多欠缺和不足。本文结合我国医学及护理研究生科研能力培养中存在的具体问题，从增强科研意识、培养科研思维、注重文献阅读、提高动手操作能力和论文撰写能力等方面对医学及护理研究生科研能力培养途径进行深入探讨。; 袁芳张伟师忠芳; 关键词：护理

血清对大鼠星形胶质细胞形态和水通道蛋白-4表达的影响: 2018年; 目的通过比较培养大鼠星形胶质细胞在有血清培养基和无血清培养基中的形态及水通道蛋白-4(AQP-4)表达水平,探讨血脑屏障破坏对AQP-4表达的影响。方法取雌性Wistar大鼠大脑皮层细胞,分别在无血清培养基、DMEM培养基加10%胎牛血清(FBS)及无血清培养基加10%FBS中培养。倒置相差显微镜观察星形胶质细胞形态和大小,细胞免疫荧光染色及逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、AQP-4及代谢型谷氨酸受体5(m Glu R5)的表达水平。结果在无血清培养基中,星形胶质细胞的细胞核和胞体小且突起细长,折光性强;而在两种添加10%FBS培养基中,星形胶质细胞呈多角扁平形且突起短小,折光性弱。细胞免疫荧光及RT-q PCR结果分析显示,两种加10%FBS培养基中星形胶质细胞GFAP和AQP-4的蛋白和m RNA表达水平均低于无血清培养基(P<0.001),而m Glu R5蛋白和m RNA表达无显著性差异(P>0.05)。结论血清改变培养星形胶质细胞的形态,降低GFAP和AQP-4的表达。; 贾梅师忠芳王玉娇闫旭徐立新董丽萍李佳欣陈烨袁芳; 关键词：血清水通道蛋白-4 胶质纤维酸性蛋白代谢型谷氨酸受体5

体外培养大鼠星形胶质细胞水通道蛋白4的表达被引量：2: 2017年; 目的研究水通道蛋白4(AQP4)在体外培养大鼠星形胶质细胞中的表达规律。方法取新生1 d Wistar大鼠大脑皮层行星形胶质细胞原代培养,分别于原代培养3 d、5 d、7 d、9 d及传代培养9 d行胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色;实时荧光定量聚合酶链反应及AQP4免疫荧光染色检测AQP4 m RNA及蛋白的表达。结果原代及传代培养不同时间点95%以上细胞GFAP免疫荧光染色阳性,且GFAP表达量逐渐增加。原代培养3 d有AQP4 m RNA表达,3 d和5 d AQP4 m RNA表达水平无显著性差异(P>0.05),7 d AQP4 m RNA表达升高(P<0.05),9 d持续升高(P<0.05);传代培养9 d与原代培养9 d AQP4 m RNA表达无显著性差异(P>0.05)。AQP4蛋白表达与AQP4 m RNA表达一致。结论大鼠星形胶质细胞原代培养3 d即有AQP4表达,之后逐渐增加,9 d左右表达渐趋稳定。; 徐立新董丽萍师忠芳师忠芳杨少华闫旭; 关键词：水通道蛋白4 星形胶质细胞细胞培养

大鼠星形胶质细胞无血清培养方法的研究被引量：1: 2018年; 目的探索应用无血清培养基进行大鼠星形胶质细胞原代培养及传代培养的方法.方法取出生24 h内Wistar大鼠大脑皮质组织,机械吹打分散为单细胞后在无血清培养基中进行原代培养.细胞传代时分别使用乙二胺四乙酸（EDTA）-胰酶或胰酶作为消化液,浓度为0.2 mg/ml或1 mg/ml的大豆胰蛋白酶抑制剂（SBTI）终止消化作用,按照1∶2或1∶3的比例传代.显微镜下观察细胞生长状态,胶质纤维酸性蛋白（GFAP）细胞免疫荧光染色方法鉴定细胞表型,MTF法检测传代细胞增殖情况.结果细胞悬液静置15 min后更换新的无血清培养基培养,7d后显微镜下可见细胞生长良好,折光性强,胞体小而突起长;细胞免疫荧光染色鉴定显示＞95％的细胞为GFAP阳性细胞.与应用SBTI终止胰酶反应时未进行离心比较,低温、低速离心（4℃、3 000 ×g）3 min后,传代细胞可在无血清培养基中生长正常并增殖.MTT检测结果显示,EDTA-胰酶消化效果优于胰酶（A值分别为0.290±0.007、0.270±0.006,P＜0.010）;使用浓度为0.2 mg/ml或1 mg/ml的SBTI终止消化（A值分别为0.290 ±0.013、0.290±0.017,P=0.820）及以1∶2或1∶3比例传代（A值分别为0.340±0.070、0.320 ±0.030,P =0.770）,传代星形胶质细胞数量的差异均无统计学意义.结论本研究建立无血清培养基进行大鼠星形胶质细胞原代及传代培养的方法,为避免血清干扰更好地开展体外星形胶质细胞功能的研究提供了新的细胞模型.; 徐立新贾梅师忠芳董丽萍闫旭王玉娇陈烨袁芳; 关键词：星形细胞培养基无血清原代细胞培养

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国家自然科学基金(81271286)

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