吉林省重大科技攻关项目(20140204078NY)
- 作品数：10 被引量：27H指数：4
- 相关作者：贾立军张守发李男礼郭焕平兰岚更多>>
- 相关机构：延边大学凌海市动物疫病预防控制中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：吉林省重大科技攻关项目国家自然科学基金吉林省青年科研基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 犬新孢子虫NcAMA1基因重组腺病毒穿梭质粒的构建及其真核表达被引量：2
- 2014年
- 为构建犬新孢子虫NcAMA1基因重组腺病毒穿梭质粒,并在真核细胞中表达,以重组质粒pVAX1-NcAMA1为模板,PCR扩增了NcAMA1基因,以此构建了pMD18T-NcAMA1重组克隆质粒;对该重组克隆质粒进行双酶切鉴定后,将其亚克隆至腺病毒穿梭载体pCR259中。应用脂质体介导转染法将经PCR鉴定和酶切鉴定正确的pCR259-NcAMA1重组穿梭质粒转染293细胞,应用IFAT和Western-blot技术检测了AMA1基因在293细胞中的表达情况。结果显示,扩增的NcAMA1基因长度为1 695bp,构建的重组腺病毒穿梭质粒pCR259-NcAMA1能在293细胞中获得瞬时表达,表达蛋白的分子质量约为68ku。
- 郭焕平贾立军于龙政薛书江高洋李男礼张守发
- 关键词：犬新孢子虫
- 吉林省白山地区牛新孢子虫病流行病学调查被引量：5
- 2015年
- 为了解吉林省白山地区牛新孢子虫病的流行情况,本研究应用间接ELISA方法对采自吉林省白山地区5个县区193份牛血清样品进行了检测,并对不同地区、不同养殖方式、不同品种及不同年龄段牛新孢子虫病感染情况进行了比较分析。结果显示,检测样本的总体阳性率为35.8%(69/193);经统计学分析,不同地区、不同养殖方式及不同年龄段牛新孢子虫感染率差异显著(P<0.05);而不同品种牛新孢子虫感染率差异不显著(P>0.05)。调查表明,吉林省白山地区是牛新孢子虫病的流行区域,此次调查为该地区牛新孢子虫病的防控提供了科学的理论依据。
- 李男礼张守发李积旭张蕾贾立军
- 关键词：新孢子虫病流行病学
- 牛源犬新孢子虫AMA1基因亚单位疫苗的制备及免疫原性分析
- 引言新孢子虫病（Neosporiasis）是由犬新孢子虫（Neospora caninum）寄生于犬、牛、羊等多种哺乳动物细胞内而引起的一种原虫病[1]。全球范围内30多个国家都有发生[2],大多数牛场每年损失达2%5%...
- 郭焕平张守发李积旭李男礼贾立军
- 犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒I型转移载体的构建及真核表达
- 为构建犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-I)转移质粒pBS-TK-AMA1,并在真核细胞中表达,本试验以pBS-TK重组质粒为载体,插入犬新孢子虫AMA1基因。其中pBS-TK重组质粒是含有FHV-1 T...
- 郭焕平张守发高洋贾洪林贾立军
- 关键词：犬新孢子虫
- 文献传递
- 犬新孢子虫AMA1基因的生物信息学分析及原核表达载体构建
- 2015年
- 为了解新孢子虫AMA1基因的生物信息学特性,并构建重组原核表达质粒p GEX-4T-1-Nc AMA1。本试验对牛源犬新孢子虫吉林株AMA1基因进行分子克隆,利用生物信息学软件对该基因进行编码蛋白等电点、信号肽、跨膜区、糖基化位点及疏水性分析,并将该基因片段亚克隆至原核表达载体p GEX-4T-1,构建了重组表达质粒p GEX-4T-1-Nc AMA1。结果显示,克隆的Nc AMA1基因片段长1 695 bp,与GenBank(AB265823.1)上发表的基因序列同源性99.9%;Nc AMA1基因编码蛋白等电点为5.43,在其N端及C端分别存在一个跨膜区,为不溶性蛋白,且Nc AMA1蛋白抗原指数较高,有潜在疫苗研究价值。
- 李男礼贾立军郭焕平李积旭张守发
- 关键词：犬新孢子虫NC原核表达载体
- 牛源犬新孢子虫NcSRS2-NcGRA7复合基因核酸疫苗与重组腺病毒疫苗的免疫保护作用机制研究
- 为阐明牛源犬新孢子虫NcSRS2-NcGRA7复合基因核酸疫苗与重组腺病毒疫苗的免疫保护作用机制,本研究应用SOE-PCR技术获得1482 bp的NcSRS2-NcGRA7复合基因;制备了牛源犬新孢子虫pV AX1-Nc...
- 贾立军张守发
- 关键词：犬新孢子虫PRIME-BOOST免疫保护作用
- 文献传递
- 犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒1型转移载体的构建及真核表达
- 2014年
- 为构建犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒1型(FHV1)转移质粒pBS-TK-NcAMA1,并在真核细胞中表达,以重组质粒pVAX1-NcAMA1为模板,扩增犬新孢子虫AMA1基因,并将其亚克隆至重组质粒pBS-TK。通过转染试剂PEI将pBS-TK-NcAMA1转移载体转染至293T细胞,以制备的小鼠抗犬新孢子虫AMA1蛋白的特异性抗体为一抗,应用间接免疫荧光试验和Western-blot对基因的表达情况进行鉴定。结果显示,构建的病毒转移载体pBS-TK-NcAMA1可以在293T细胞内获得表达,表达蛋白的分子质量为68ku。这一研究成果为犬新孢子虫AMA1基因的重组猫疱疹病毒1型载体疫苗的研制奠定了基础。
- 郭焕平张守发高洋贾洪林贾立军
- 关键词：犬新孢子虫
- 牛源犬新孢子虫IMP1基因的克隆与序列分析
- 2014年
- [目的]为了解牛源犬新孢子虫IMP1基因生物学特性,分析牛源犬新孢子虫IMP1基因的克隆与序列。[方法]应用PCR技术扩增IMP1基因,将纯化的PCR产物和pMD18-T Simple Vector连接,构建pMD18-IMP1重组克隆质粒,进行PCR鉴定和酶切鉴定,将鉴定为阳性的质粒进行测序分析。[结果]PCR扩增犬新孢子虫IMP1基因大小为762 bp,克隆质粒经测序分析与GenBank(XM_003879531.1)中IMP1基因的同源性为99.9%。[结论]该试验为犬新孢子虫IMP1基因的表达及后续研究奠定了基础。
- 张蕾贾立军鲁承
- 关键词：犬新孢子虫克隆
- 牛源犬新孢子虫对BABL/c孕鼠胎盘激素和细胞因子调节功能的影响被引量：1
- 2016年
- 旨在探讨牛源犬新孢子虫对孕鼠胎盘激素和细胞因子调节功能的影响。以牛源犬新孢子虫BABL/c孕鼠感染模型为研究对象,同时设置正常对照组孕鼠,在攻虫第12、14、16、18天分批处死孕鼠,采集孕鼠血清,制备孕鼠胎盘细胞悬液,采用ELISA方法对牛源犬新孢子虫感染孕鼠血清中CRH、CG、PRL及E3等胎盘激素水平,以及孕鼠胎盘细胞悬液中IFN-γ、IL-4及TGF-β等细胞因子水平进行检测。结果显示,与正常对照组孕鼠比较,牛源犬新孢子虫感染孕鼠模型随攻虫时间的增加,在孕鼠血清中,CRH水平在第12天时显著升高(P<0.05),在第18天时显著下降(P<0.01);CG水平在第12天时显著下降(P<0.01),在第16天时显著升高(P<0.05);PRL水平在第18天时显著下降(P<0.05);E3水平在第12天时显著升高(P<0.05),第16天时显著下降(P<0.05)。在孕鼠胎盘细胞悬液中,IFN-γ水平在第18天时显著升高(P<0.05);IL-4水平在第12天时显著升高(P<0.05);TGF-β水平在第12天时显著升高(P<0.05)。结果表明牛源犬新孢子虫感染导致孕鼠胎盘激素和细胞因子的调节功能失衡,严重影响胎盘血流、胎盘物质转运及胎儿生长发育,将导致不良妊娠的发生。
- 贾立军马莉张守发李男礼赵鹏李积旭
- 关键词：犬新孢子虫胎盘激素细胞因子
- 新孢子虫与弓形虫交叉抗原基因AMA1的克隆及原核表达载体构建被引量：9
- 2015年
- 为了解新孢子虫与弓形虫交叉抗原基因AMA1的生物学特性,应用PCR技术扩增新孢子虫/弓形虫AMA1基因,将PCR产物纯化回收后克隆于pMD18-T Simple Vector,构建pMD18-T-Nc/Tg AMA1重组克隆质粒,经PCR鉴定、酶切鉴定及测序分析后,亚克隆于原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组原核表达质粒pGEX-4T-Nc/Tg AMA1,经PCR鉴定、酶切鉴定表明,构建的原核表达载体正确。该试验为新孢子虫/弓形虫AMA1基因重组疫苗的研究奠定了基础。
- 孙婷婷金京顺贾立军
- 关键词：新孢子虫弓形虫
