卫生部临床学科重点项目(20012537)
- 作品数：17 被引量：140H指数：7
- 相关作者：龚建平冯永东谢大兴陶德定许培权更多>>
- 相关机构：华中科技大学浙江大学医学院附属第二医院河南大学更多>>
- 发文基金：卫生部临床学科重点项目国家自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- MOLT-4细胞凋亡不同阶段活性Caspase-3在细胞内的空间位相移行被引量：16
- 2004年
- 背景与目的:在细胞凋亡过程中,位于细胞浆中的Caspase-3酶原是由什么方式引起细胞形态序贯性变化的问题还没有完全阐明,本研究旨在探讨放射诱导的MOLT-4细胞凋亡不同阶段活性Caspase-3在细胞内的空间分布、细胞形态的变化以及二者的关系。方法:10GyX射线照射诱导MOLT-4细胞。亚G1峰法和凝胶电泳检测凋亡细胞中DNA变化。膜联蛋白V标记细胞膜,带荧光素的Caspase抑制剂(fluorochromeinhibitorofcaspase,FLICA)标记活性Caspase,并用流式细胞仪检测。应用共聚焦显微镜观察MOLT-4细胞凋亡形态及活性Caspase-3在细胞内的分布。免疫印迹检测Caspase-3的表达。结果:X射线10Gy照射后,MOLT-4细胞出现细胞膜翻转、凋亡小体等典型的细胞凋亡特征。其凋亡过程中Caspase-3激活,4h其活性明显增加。在细胞内,活性Caspase-3由靠近细胞膜的胞浆面向细胞浆、胞核移行,与细胞凋亡的形态学变化相吻合,在时间上早于细胞膜翻转。结论:X线照射后MOLT-4细胞中Caspase-3激活,且其亚细胞分布与细胞凋亡的形态学变化相吻合。活性Caspase-3在凋亡细胞中空间位相的移行是放射诱导的细胞凋亡机制之一。
- 冯永东谢大兴覃吉超钟以胜李小兰肖薇吴剑宏陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：细胞凋亡CASPASE-3细胞内定位激光扫描共聚焦显微镜MOLT-4
- Cyclins非时相性表达和MDR1与胃肠道恶性肿瘤分期的研究被引量：1
- 2007年
- 目的：研究胃肠道恶性肿瘤的4种主要Cyclins的表达规律，以此为依据对恶性肿瘤进行分型，并结合肿瘤标本中MDR1（多药耐药基因）的表达情况，与肿瘤TNM分期进行相关性研究。方法：使用流式细胞术分析新鲜手术获取的肿瘤标本的CyclinD1，E，A，B1及与MDR1表达情况，再记录术后病理报告进行TNM分期。结果：根据4种主要Cyclins的表达情况对恶性消化道肿瘤分为Ⅰ～Ⅳ型cyclin非时相性表达类型，此Ⅰ～Ⅳ型细胞周期类型与TNM分期有一致性（Kappa值为0．599，P〈0．01），Ⅰ～Ⅳ型细胞周期类型中MDR1的表达水平逐渐增高（Spearman相关系数0．495，P〈0．01）。结论：根据4种主要Cyclins（Cyclin D1，E，A，B1）的表达情况对胃肠肿瘤进行的分型具有与TNM分期相同的意义，可以说是对“分子分期”的一种探索。在消化道肿瘤中，MDR1与肿瘤细胞周期破坏类型有关，对治疗具有指导意义。
- 郭勇覃吉超周毅何小军李伟华谢大兴龚建平
- 关键词：胃肠肿瘤细胞周期蛋白类MDR肿瘤分期
- 全反式维甲酸对HL-60细胞分化和凋亡的影响被引量：30
- 2004年
- 背景与目的:用全反式维甲酸(alltransretinoidacid,ATRA)治疗早幼粒细胞性白血病(premyeloidleukemia,M3)在肿瘤治疗史上是一个重要里程碑。已有研究表明,ATRA治疗白血病的机理是诱导白血病细胞向成熟细胞方向分化,然而人们对分化的肿瘤细胞最终去向还不完全清楚。本实验进一步探讨ATRA诱导HL-60细胞分化和凋亡的关系。方法:以分化诱导剂ATRA(终浓度为10μmol/L)作用不同时间的HL-60细胞为检测对象,应用流式细胞仪分析细胞表面的分化标志物及细胞周期;经碘化丙啶(propidiumiodide,PI)染色后,激光共聚焦显微镜下对已分化细胞进行形态学确认;应用流式细胞仪检测药物诱导后不同时间点的细胞凋亡。结果:(1)随着药物诱导时间的延长,被诱导的HL-60细胞体积逐渐增大,在72h后,被诱导细胞开始表达分化标志物CD11b并出现细胞核型的变化;(2)在药物诱导96h后,细胞开始出现了凋亡峰,而在药物诱导72h后脱药培养8h,则可以出现高于96h的凋亡峰。结论:ATRA并不能诱导HL-60细胞完成终端分化,但是该药可以诱导白血病细胞向成熟方向分化,而且已分化的肿瘤细胞于发生凋亡。
- 许培权龚建平
- 关键词：白血病HL-60细胞细胞分化全反式维甲酸
- 全反式维甲酸诱导HL60细胞分化的细胞周期时相性研究被引量：12
- 2004年
- 目的 探讨全反式维甲酸诱导分化的HL6 0细胞周期变化 ,进一步揭示细胞分化在细胞周期中的时相特异性。方法 以分化诱导剂全反式维甲酸 (终浓度为 10 μmol/L)影响下不同时间点的HL6 0细胞为检测对象 ,应用流式细胞术分析细胞的大小及细胞表面的分化标志 ;碘化丙啶 (PI)染色后用激光共聚焦显微镜观察细胞形态从而对已分化细胞进行确认 ;应用流式细胞术分析药物诱导的细胞周期变化 ,检测G1期的Ki6 7表达水平 ;再应用流式分选术结合激光共聚焦显微镜观察各期细胞形态。结果 ①随着药物诱导时间的延长 ,细胞的体积逐渐增大 ,被诱导的细胞出现髓系细胞表面的分化标志物CD11b。②全反式维甲酸导致HL6 0细胞周期的G0 /G1峰升高 ,S期水平下降。③随着药物诱导时间的延长 ,G1期的Ki6 7的表达水平逐渐下降。④只在G1期细胞中可见到已分化细胞。结论 全反式维甲酸可以诱导HL6 0细胞周期的G1早期→G1晚期阻滞 ,并诱导HL6 0沿着粒系方向分化 ,细胞分化完成于细胞周期中的G1早期。
- 许培权龚建平
- 关键词：全反式维甲酸HL60细胞细胞周期
- Calcein-AM和Annexin V在流式细胞术检测早期细胞凋亡的敏感性比较
- 2006年
- 目的比较Calcein-AM与Annexin V用于流式细胞术检测活细胞早期凋亡时的敏感性,建立新的检测细胞早期凋亡的方法。方法将人类急性T淋巴细胞白血病细胞株(Molt-4)经喜树碱(CPT)、紫外线(UV)诱导后,分别采用Calcein-AM及异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V(Annexin V)染色,然后用流式细胞仪分析凋亡率,通过比较诱导后不同时间点的凋亡率来分析Calcein-AM和Annexin V对于检测细胞早期凋亡的敏感性。结果在喜树碱诱导模型中,加药后2 h即可用Calcein-AM检测到明显的细胞凋亡,而3 h后才能用Annexin V检测到;在紫外线诱导模型中,照射后1 h即可用Calcein-AM检测到明显的细胞凋亡,而要在2 h后才能用Annexin V检测到。结论Calcein-AM用于检测活细胞早期凋亡比Annexin V更为敏感,是一种稳定、可靠、灵敏度高并且较为经济的检测细胞早期凋亡的活细胞染料。
- 王佳冯永东陶德定李小兰肖薇刘双又余从年龚建平
- 关键词：流式细胞术凋亡膜联蛋白V
- 二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化的评判
- 2007年
- 目的探讨一种可靠的肿瘤细胞分化模型,确立一套判定肿瘤细胞是否分化的简便、准确的方法。方法以分化诱导剂二甲基亚砜(dimethylsulphoxide,DMSO)影响下不同时间点的HL-60细胞为检测对象,应流式细胞术来分析细胞大小及细胞表面的分化标志物;经碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色后,用激光共聚焦显微镜观察对已分化细胞进行形态学确认。结果随着药物诱导时间的延长,被诱导的HL-60细胞体积逐渐增大;在48h后,被DMSO诱导细胞开始表达分化标志物CD11b并出现细胞核型的变化。结论DMSO能诱导HL-60细胞分化;应流式细胞术来分析细胞大小及细胞表面的分化标志物,再用激光共聚焦显微镜观察已分化细胞核的形态变化是判定肿瘤细胞分化的简便、准确的方法。
- 许培权龚建平
- 关键词：流式细胞仪分化激光共聚焦显微镜
- 膜受体介导的细胞凋亡与细胞周期的关系被引量：9
- 2006年
- 背景与目的:线粒体介导的细胞凋亡大部分与细胞周期相关,但膜受体介导的细胞凋亡是否与细胞周期有关尚不清楚。本研究旨在观察膜受体介导的人类细胞凋亡与细胞周期特异性,阐明膜受体介导的细胞凋亡与细胞周期的关系。方法:用肿瘤坏死因子-α、抗Fas抗体分别处理指数生长期的Molt-4、Jurkat以及健康人外周血淋巴细胞;应用AnnexinV/PI和API等方法,通过流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期特异性。结果:处于静止期的外周血淋巴细胞对凋亡诱导剂不敏感,凋亡率是6%～8%。Molt-4、Jurkat细胞以及加入植物血凝素刺激的外周血淋巴细胞经肿瘤坏死因子-α、抗Fas抗体诱导后出现了明显的细胞凋亡,凋亡率是15%～28%。膜受体介导的细胞凋亡主要发生在细胞周期的早G1期。结论:膜受体介导的细胞凋亡与细胞周期相关,具有细胞周期特异性。
- 杨长永谢大兴周毅黄丹龚建平
- 关键词：膜受体细胞周期凋亡白血病JURKAT细胞株外周血淋巴细胞
- 全反式维A酸诱导HL-60细胞分化的判定
- 2005年
- 目的:建立一种可靠的肿瘤细胞分化模型,确立一套简便、准确判定肿瘤细胞是否分化的方法。方法:以分化诱导剂全反式维A酸(ATRA)影响下不同时间点的HL-6 0细胞为检测对象,流式细胞术分析细胞大小及细胞表面的分化标志物;经碘化丙锭染色后,用激光共聚焦显微镜观察对已分化细胞进行形态学确认。结果:随着药物诱导时间的延长,被诱导的HL-6 0细胞体积逐渐增大;72h后,被ATRA诱导细胞开始表达分化标志物CD11b并出现细胞核型的变化。结论:ATRA能诱导HL-6 0细胞分化;流式细胞术分析细胞大小及细胞表面的分化标志物,再用激光共聚焦显微镜观察已分化细胞核的形态变化是判定肿瘤细胞分化简便。
- 许培权龚建平
- 关键词：全反式维A酸流式细胞术细胞分化激光共聚焦显微镜
- 联合放/化疗对细胞周期特异性凋亡的影响被引量：6
- 2005年
- 目的 以急性T淋巴细胞白血病细胞株MOLT 4为模型,探讨作用于细胞周期相同或不同时相的放疗/化疗药物联合应用时是否具有抗癌增效作用、引起细胞凋亡的周期时相性是否发生改变及对细胞周期检测点(ckeckpoint)的影响。方法 分别将作用于G1 期的X ray(10Gy)及药物金克(JinKe) (2.0g/L);S期的喜树碱(CPT) (0.25μmol/L)及阿糖胞苷(Ara C) (1.00μmol/L);G2 /M期的药物威猛(Vm 26) (0.5μg/mL)及长春花碱(Vinblastine, Vin) (0.05μg/mL)分别联合分组应用对其进行不同时间段的培养,采用流式细胞术中的API法对凋亡细胞进行定量并对凋亡细胞的周期时相性进行定位检测。结果 G1 期的药物JinKe和X ray(10Gy)联合应用时,具有协同作用,其作用点仍以G1 期细胞为主。S期的两种药物CPT和Ara C联合应用时,两者也具有协同作用,其细胞周期作用点仍以S期为主。作用于G2 /M期的两种药物VM 26和Vin联合应用时,两者还是具有协同作用,但其细胞周期作用点几乎发生在细胞周期的所有时相。作用于G1 期的药物JinKe和作用于S期的药物CPT联合应用, 具有增强效应, 联合应用时其细胞周期作用点以G1 期和S期细胞为主。作用于G1 期的药物金克和作用于G2 /M期的药物VM 26联合应用,两者具有增强效应。作用于G2
- 喻春钊陶德定冯永东余源吴剑宏龚建平
- 关键词：MOLT-4细胞放射疗法细胞周期细胞凋亡
- 结肠癌细胞凋亡与增殖的平衡及其与预后的关系被引量：7
- 2005年
- 背景与目的:人体正常组织器官中,特定组织中凋亡与增殖细胞维持着动态平衡,一旦凋亡与增殖的平衡被打破,将导致细胞的恶性转化和肿瘤的发生。我们通过研究结肠癌细胞和淋巴细胞演进过程中凋亡与增殖平衡机制的变化,及其与患者生存的关系,探讨结肠癌的发生、发展规律。方法:采用低分子量DNA抽提后荧光染料染色法(Sub G1法)和Ki-67/DNA双参数法,分别定量分析凋亡群体和增殖群体。应用激光共聚焦显微镜对组织细胞的增殖进行形态学观察,Kaplan-M eier法分析生存率。结果:对照组细胞、腺瘤细胞、肿瘤组Dukes蒺A期、B期、C+D期细胞中,凋亡指数/增殖指数(apoptosis index/proliferating index,AI/PI)分别为0.45±0.19、0.30±0.07、0.29±0.11、0.28±0.10和0.26±0.07。对照组的AI/PI大于其余4组(P<0.01)。在结肠癌细胞的大小、类型、分化程度、Dukes蒺分期和淋巴结转移等临床病理特征中,AI/PI总体呈下调的趋势。正常人和肿瘤患者外周血淋巴细胞AI/PI分别为0.49±0.12和0.64±0.11。肿瘤患者淋巴细胞的AI/PI大于对照组(P<0.01)。用激光共聚焦显微镜可观察到结肠对照组、腺瘤和肿瘤组织中Ki-67的表达。根据AI/PI的中位数值0.285,将结肠癌患者分为≥0.285组和<0.285组。经log-rank检验两组患者生存时间无显著性?
- 陈金明李伟华王家顿冯永东吴剑宏龚建平
- 关键词：结肠肿瘤凋亡预后流式细胞术激光共聚焦显微镜
