国家自然科学基金(30400192)
- 作品数：8 被引量：23H指数：3
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- Myocardin在低氧诱导肺血管内皮向平滑肌样细胞转分化中的作用
- 目的探讨低氧条件下肺动脉内皮细胞（PAECs）向平滑肌样细胞的转分化及 myocardin在其转分化过程中的作用。方法经免疫磁珠法（用血小板内皮细胞粘附分子PECAM-1 做免疫分选标记）纯化分离的原代肺动脉内皮细胞,用...
- 何惠华黄磊卢玮朱朋成葛晓娜杜惠杨敖启林
- 关键词：MYOCARDIN平滑肌样细胞转分化低氧
- 文献传递
- TGF-β1在低氧诱导肺血管内皮向平滑肌样细胞转分化中的作用
- 目的研究低氧条件下肺动脉内皮细胞（PAEC）向平滑肌样细胞的转分化及转化生长因子β1（TGFβ1）在此转分化过程中的作用。方法将经免疫磁珠法（用血小板-内皮细胞粘附分子PECAM-1做免疫分选标记）纯化后的原代肺动脉内皮...
- 卢玮黄磊何惠华朱朋成葛晓娜杜惠扬敖启林孙红蕾
- 关键词：低氧平滑肌样细胞转分化转化生长因子Β1
- 文献传递
- 血浆游离FHIT基因杂合性缺失在非小细胞肺癌中的临床意义
- 2010年
- 目的探讨脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung canc-er,NSCLC)患者血浆及组织中杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)的特点,检测血浆游离FHIT基因的LOH在NSCLC研究中的临床意义。方法通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)-银染法检测69例NSCLC患者(手术前、后)血浆和新鲜癌组织标本中FHIT基因的3个微卫星位点D3S1300、D3S1234、D3S4103的LOH,并进行比较;15例肺良性病变患者静脉血、组织标本及5例健康志愿者的静脉血标本作对照。对应的组织病理切片进行FHIT蛋白的免疫组化染色。结果NSCLC患者术前血浆和组织FHIT基因的3个微卫星位点上LOH阳性率分别为53.6%(37/69例)、72.5%(50/69例),其共同检出率达74.0%(37/50例)。肺良性病变及健康人血浆中未检出该基因突变,两组相比差异有显著性意义(P<0.05)。不同病理类型的肺癌患者手术前后血浆FHIT基因LOH之间差异无统计学意义(P>0.05);有淋巴结转移的肺癌患者与无淋巴结转移者相比,血浆更易检测到FHIT基因的LOH,差异有统计学意义(P<0.05);不同临床分期患者术前血浆FHIT基因LOH之间差异无统计学意义(P>0.05),而术后同一患者血浆FHIT基因的LOH的检出率差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化染色发现在78.3%(54/69)NSCLC患者肿瘤组织中检测出FHIT蛋白表达缺失,而在FHIT蛋白表达缺失的54例肿瘤组织中,有39例患者血浆FHIT基因存在1个或2个上述微卫星位点的LOH。结论NSCLC患者血浆与肿瘤组织中FHIT基因LOH有较高的一致性变化;LOH可能是NSCLC肿瘤组织FHIT蛋白表达下调的重要机制之一,血浆FHIT基因的LOH检测对于评估肺癌的预后、转移具有潜在的价值和广阔的应用前景。
- 王敏徐钏铭黄磊刘卫硕敖启林
- 关键词：杂合性缺失血浆非小细胞肺癌
- 低氧诱导肺动脉内皮细胞间质细胞衍生因子-1的表达及其调控机制被引量：6
- 2006年
- 肺血管重塑（PVR）是低氧性肺动脉高压持续且难以逆转的主要原因，其主要病变表现为肺动脉壁细胞增多，但其来源和机制仍不清楚。研究表明骨髓和外周血中存在血管壁细胞的祖细胞，并且参与了PVR的形成。间质细胞衍生因子-1（SDF-1）是特异性介导干细胞归巢至骨髓，介导祖细胞归巢至损伤或缺血组织的关键因子。SDF-1表达在这些部位的血管内皮细胞，而低氧是这些部位的微环境特征，也是诱导SDF-1表达的主要原因。低氧诱导因子-1α（HIF-1α）是特异性介导细胞低氧反应的关键因子，直接调控脐静脉内皮细胞SDF-1基因的表达㈨。我们旨在探讨低氧对肺动脉内皮细胞SDF-1表达的影响及HIF-1α对其表达的调控作用。
- 敖启林朱朋成葛小娜卢玮何惠华
- 关键词：肺动脉内皮细胞细胞衍生细胞间质低氧性肺动脉高压
- 非小细胞肺癌患者外周血及组织中p53基因突变的研究被引量：3
- 2008年
- 目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中p53基因突变检测的可行性及其临床意义。方法应用PCR-SSCP分析技术,检测69例原发性NSCLC患者血浆(手术前、后)及对应新鲜肺肿瘤组织中p53基因5～8外显子的突变情况,以15例肺良性病变组织及血浆、5例健康献血员血浆作对照。并同时对相应的组织病理切片进行p53蛋白的免疫组化染色检测。结果NSCLC患者血浆(术前)和对应肿瘤组织中p53基因突变率分别为38%(26/69例)、54%(37/69例),其共同检出率达54%(20/37例);而对照组肺良性病变及健康人血浆中均未检出该基因突变。术后血浆中p53突变率明显低于术前,仅7例(10%)检测到p53突变,包括Ⅲ期3例,Ⅳ期4例,多为有远处转移的患者。免疫组化染色p53蛋白表达阳性率为64%(44/69例),PCR-SSCP分析与免疫组化染色两种方法检测符合率为81%(56/69例)。NSCLC患者血浆(术前)中p53基因突变在不同临床分期及有无淋巴结转移间差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤组织中该基因的突变及表达在有无淋巴结转移患者间差异有统计学意义(P<0.05),而在不同病理分型、分化程度及临床分期间差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论p53基因突变在NSCLC患者血浆与原发肿瘤组织中有较高的一致性和检出率,且其改变与NSCLC临床分期和转移相关;监测肺癌患者手术前、后血浆中p53突变具有一定意义,通过检测外周血中p53基因的改变可能对肺癌的诊断、预后判断及术后追踪具有一定价值。
- 刘卫硕高思海王敏敖启林
- 关键词：非小细胞肺癌基因突变P53基因血浆
- 西地那非抑制低氧肺血管内皮向平滑肌样细胞的转分化及其机制被引量：1
- 2007年
- 目的探讨低氧条件下肺动脉内皮细胞(PAECs)向平滑肌样细胞的转分化及西地那非(sildenafil)对其的作用和可能机制。方法经免疫磁珠法(用血小板内皮细胞粘附分子PECAM-1做免疫分选标记)纯化分离的原代肺动脉内皮细胞,分为常氧组(含21%O2,5%CO2和74%N2)、低氧组(含1%O2,5%CO2,94%N2)、常氧+sildenafil组和低氧+sildenafil组。分别培养1d和7d。免疫荧光检测平滑肌特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)的表达,结合形态学鉴定平滑肌样细胞的转分化;用逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测myocardin mRNA的表达。结果(1)免疫荧光结果显示低氧7d组PAECs中α-SM-actin阳性率(2.07‰±0.06)(P<0.05)明显增高,阳性细胞呈梭形或多角形,而常氧组和低氧1d组均未见α-SM-actin的阳性表达;(2)RT-PCR显示myocardin mRNA的表达在低氧7d组(0.23±0.03)(P<0.05)明显增高,常氧各组和低氧1d组均未检测出其表达。(3)用sildenafil后,平滑肌样细胞的转分化率明显低于对应低氧7d组(1.02‰±0.05;P<0.05);Myocardin mRNA水平也明显降低(0.09±0.02)(P<0.05)。结论低氧可促进PAECs向平滑肌样细胞的转分化,sildenafil在一定程度上可抑制其转分化,其可能机制是通过抑制myocardin基因的表达而实现的。
- 何惠华黄磊卢玮朱朋成葛晓娜杜惠扬敖启林
- 关键词：MYOCARDIN平滑肌样细胞转分化低氧西地那非
- TGF-β_1在低氧诱导肺动脉内皮细胞向平滑肌样细胞转分化中的作用被引量：5
- 2006年
- 目的研究低氧条件下肺动脉内皮细胞(PAEC)向平滑肌样细胞的转分化及转化生长因子β1(TGF-β1)在此转分化过程中的作用。方法将经免疫磁珠法(用血小板内皮细胞粘附分子1做免疫分选标记)纯化后的原代肺动脉内皮细胞分别在常氧(含21%O2、5%CO2、74%N2)和低氧(含1%O2、5%CO2、94%N2)条件下培养1、4、7 d,用核酸干扰法(RNAi)阻断TGF-β1的表达,用逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR)和Western blot分别检测各组细胞TGF-β1mRNA和蛋白的表达,并用免疫细胞化学法检测平滑肌细胞标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)的表达,结合形态学观察从而判定有无平滑肌样细胞的转分化。结果低氧可增加肺动脉内皮细胞TGF-β1mRNA和蛋白的表达(P<0.05),RNAi沉默TGF-β1基因表达后可明显降低其mRNA和蛋白含量(P<0.05),随着低氧培养时间的延长,肺动脉内皮细胞转分化为平滑肌样细胞的比率逐渐增加(P<0.05);阻断TGFβ-1表达后,平滑肌样细胞的转化率明显降低(P<0.05)。结论肺动脉内皮中存在具有转分化为平滑肌样细胞潜能的细胞;低氧可明显促进转分化,TGF-β1在此转分化过程中起重要作用。
- 卢玮黄磊何惠华朱朋成葛晓娜杜惠扬敖启林孙红蕾
- 关键词：低氧内皮细胞平滑肌样细胞转分化转化生长因子Β1
- Sildenafil下调Myocardin基因在低氧诱导的大鼠肺动脉高压中的表达
- Myocardin基因已被证明是平滑肌细胞分化过程中的一个关键调节因子,而平滑肌细胞则在低氧诱导的肺动脉结构重塑和肺动脉高压中扮演重要角色。本研究主要观察myocardin 基因在低氧诱导的重塑肺动脉中的表达情况以及磷酸...
- 朱朋成黄磊葛晓娜晏菲吴人亮敖启林
- 关键词：MYOCARDIN平滑肌细胞肺动脉高压低氧
- 文献传递
- 脂多糖活化的大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α产生的新机制被引量：3
- 2006年
- 目的:探讨脂多糖(LPS)活化的肺泡巨噬细胞中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及其在肺泡巨噬细胞产生肿瘤坏死因子α(TNF-α)中的作用。方法:应用HIF-1α诱骗法(HIF-1αdecoy)抑制其作用,并用Westernblotting、半定量RT-PCR、酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测HIF-1α蛋白、mRNA的表达和TNF-α的产生。结果:HIF-1α蛋白含量在LPS组(1.95±0.57)和HIF-1αdecoy组(1.89±0.59)均明显高于对照组(0.41±0.14,P<0.05);HIF-1αmRNA的表达在对照组(0.7838±0.3183)、LPS组(0.7622±0.3387)和HIF-1αdecoy组(0.8155±0.3594)之间无显著差异(P>0.05);LPS刺激24h后,大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α的产生明显高于对照组(61ng/Lvs156ng/L,P<0.05),抑制HIF-1α后TNF-α的产生明显低于LPS刺激组(90ng/Lvs156ng/L,P<0.05),但HIF-1αdecoy组TNF-α的产生仍然高于对照组(61ng/Lvs94ng/L,P<0.05)。结论:大鼠肺泡巨噬细胞在LPS的刺激下HIF-1α蛋白的稳定性增强使其表达明显上调,并且促进TNF-α的产生,提示HIF-1α在肺部慢性炎症性疾病如COPD的发病机制中可能有重要作用。
- 敖启林黄磊朱朋成王伟王迪浔
- 关键词：脂多糖类缺氧诱导因子1肿瘤坏死因子肺泡
- 大鼠心肌素慢病毒RNA干扰载体的构建及其对血管平滑肌细胞分化的影响
- 2011年
- 目的:构建大鼠心肌素(myocardin)慢病毒RNA干扰(RNAi)重组质粒,分析该RNAi质粒的干扰效果及其对血管平滑肌细胞(VSMCs)分化的影响。方法:设计并合成3对针对大鼠myocardin的shRNA片段,退火后将双链oligo-DNA克隆入慢病毒质粒载体pGCSIL-GFP获得重组干扰质粒pGCSIL-GFP-shMyocd。以pEGFP-N1/X124G表达载体构建含Flag标签的myocardin表达质粒pEGFP-N1-Myocd。将重组干扰质粒和过表达质粒共转染293T细胞,Western blotting分析Flag标签蛋白的表达,筛选出干扰效率最好的干扰质粒并大量扩增。干扰质粒转染大鼠主动脉VSMCs,RT-PCR和Western blotting检测myocardin及分化标志物SM22α的表达。结果:成功构建大鼠myocardin的慢病毒干扰质粒pGCSIL-GFP-shMyocd和过表达质粒pEGFP-N1-Myocd。上述2种质粒共转染293T细胞后,1号干扰质粒转染组Flag标签蛋白表达下降最显著。将1号质粒进行大包装,获得滴度为1×10^(12)TU/L的慢病毒颗粒,该病毒转染VSMCs后,myocardin表达明显下调并伴随分化标志物SM22α表达的显著下降。结论:成功构建大鼠myocardin慢病毒重组干扰质粒pGCSIL-GFP-shMyocd;抑制基因myocardin表达后伴随VSMCs分化的表达下降,提示myocardin在VSMCs分化过程中的重要性。pGCSIL-GFP-shMyocd重组质粒的成功构建为后续研究特定病理条件下(如动脉粥样硬化)VSMCs表型转变的分子机制奠定了基础。
- 揭伟申志华王晓燕况东王国平敖启林
- 关键词：心肌素慢病毒血管平滑肌细胞细胞分化
