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施勤
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- 所属机构:苏州大学医学部
- 所在地区:江苏省 苏州市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:国家自然科学基金
相关作者
- 张学光
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- 顾巧丽杨惠林施勤
- 关键词：二甲双胍PMMA间充质干细胞
- 制备负载细胞可注射微球及体外评价被引量：2
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- 背景:利用生物材料作为细胞载体能够提供3D培养微环境,支持细胞活力和功能,并有可能扩大细胞治疗的数量和治疗效果,因此寻找一个合适的生物材料显得十分重要。目的:制备可注射甲基丙烯酰化明胶多孔水凝胶微球,探究其生物相容性及负载细胞用于组织工程的潜力。方法:利用微流控技术制备可注射甲基丙烯酰化明胶多孔水凝胶微球,表征微球的微观形貌与硬度。分别采用正常培养基(对照组)与微球浸提液(实验组)培养MC3T3-E1细胞,利用CCK-8法检测细胞增殖,活死细胞染色法检测细胞存活。将微球与CD3^(+)T细胞共培养,以单独培养的CD3^(+)T细胞为对照,光学显微镜下观察微球是否对T细胞活化产生影响,Dapi染色观察微球负载T细胞的形态,流式细胞术验证与微球共培养是否对CD4^(+)T细胞和CD8^(+)T细胞的比例产生影响。结果与结论:①倒置显微镜下可见,冻干前后的微球均保持高度分散且大小均一,直径大小满足可注射条件;扫描电镜下可见,冻干后的微球为多孔结构,孔隙均匀分布;微球的弹性模量为(9.76±2.04)kPa。②CCK-8检测与活死细胞染色显示,两组MC3T3-E1细胞的增殖趋势与增殖活性无明显差别。③光学显微镜下可见,培养2 d时微球未引起CD3^(+)T细胞的活化,也未干预CD3^(+)T细胞的活化,CD3^(+)T细胞分布于微球表面及孔隙内。④流式细胞术检测显示,微球未影响CD4^(+)T细胞和CD8^(+)T细胞的比例。⑤结果表明,通过微流控技术制备了一种可注射甲基丙烯酰化明胶多孔微球,其具有良好的生物相容性且不会对细胞产生不利影响,是一种在组织工程中具有广阔应用前景的生物材料。
- 何家辰刘畅陈迟迟施勤
- 关键词：微流控多孔微球可注射T细胞
- 重组人Flt3配体对微血管内皮细胞的抗辐射作用研究被引量：2
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- 目的 研究Flt3配体 (FL)对人微血管内皮细胞系细胞 (ECV)的抗辐射作用及其可能的作用机理。方法 用流式细胞仪分析ECV表面Flt3受体的表达 ;用MTT法观察FL对受照射ECV增殖的影响 ;用AnnexinV PI方法测定细胞凋亡 ,用RT PCR方法分析细胞凋亡基因bax和Bcl 2的改变。结果 ECV表达Flt3受体 ,FL能激发ECV增殖 ,ECV经 15Gy的照射后 ,FL能有效地拮抗照射对ECV增殖的抑制作用 ;同时照射后ECV的bax基因表达增加 ,bcl 2基因表达轻度降低。FL通过抑制bax基因的表达 ,降低辐射引起的ECV细胞凋亡。结论 FL通过抑制细胞凋亡 ,减轻辐射引起的ECV的损伤 ,可能在辐射损伤患者造血微环境的保护中具有应用价值。
- 许志祥张学光强亦忠徐颖施勤朱剑昆丁天
- 关键词：FLT3配体造血微环境微血管内皮细胞抗辐射作用细胞增殖
- 脑星形细胞瘤组织中VEGFi、NOS蛋白的表达及其意义被引量：3
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- 目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)、诱导性一氧化氮合成酶(iNOS)蛋白在脑星形细胞瘤中的表达及其意义。方法采用S-P免疫组织化学法,检测VEGFi、NOS蛋白在59例不同病理分级脑星形细胞瘤组织中的表达情况。结果VEGFi、NOS蛋白表达的阳性率分别为76.2%(45/59)、71.2%(42/59),VEGF与病理分级密切相关(P<0.05);VEGFi、NOS均与肿瘤单位视野中血管平均值(MVD)密切相关(P<0.05)。VEGFi、NOS的表达存在相关性。结论VEGF表达与脑星形细胞瘤的发生发展及肿瘤性血管的生成存在密切的相关性;iNOS通过协同和促进VEGF的表达及肿瘤性血管的生成,间接参与肿瘤细胞的恶性演化。
- 谢芳顾永平柴玉海任苏勤施勤张学光
- 关键词：星形细胞瘤血管内皮生长因子诱导性一氧化氮合成酶
- 人B7-H4重组蛋白在大肠杆菌中的有效表达及其对T细胞体外增殖和IL-2分泌的抑制作用
- 为了研究B7家族新成员B7-H4的生物学功能,采用PCR的方法,从cDNA片断FLJ22418克隆得到了人B7-H4的cDNA。以此为模板,克隆得到了编码人B7-H4胞外段功能区hB7-H4的基因 (IgV和。IgC区)...
- 毛一香陈永井马泓冰郁剑锋吴鸿雅杨明峰葛彦施勤王勤张学光
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- 文献传递
- 肥胖小鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化被引量：2
- 2022年
- 背景:骨髓间充质干细胞分化受到多种因素的影响,肥胖小鼠骨髓间充质干细胞具有更佳的成骨分化能力。目的:探究正常饮食小鼠与高脂饮食诱导的肥胖小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的差异。方法:将4-6周龄Balb/c小鼠随机分为正常饮食组和高脂饮食组,饲养20周后,通过全骨髓培养法得到骨髓间充质干细胞,成骨诱导7 d后进行碱性磷酸酶染色以及qRT-PCR检测成骨相关基因的表达,成骨诱导14 d后进行茜素红染色。高脂饲养20周后,Micro-CT分析股骨骨量的变化,小鼠股骨切片进行苏木精-伊红染色。结果与结论:①与正常饮食组小鼠相比,高脂饮食饲养20周后小鼠体质量显著增加;②与正常饮食组小鼠骨髓间充质干细胞相比,高脂饮食组小鼠骨髓间充质干细胞中碱性磷酸酶阳性表达和钙结节数目显著增加,成骨相关基因碱性磷酸酶、骨桥蛋白和RUNT相关转录因子2表达水平升高;③Micro-CT重建和骨形态参数量化结果显示,与正常饮食组小鼠相比,高脂饮食组小鼠骨量显著增加,其中骨密度、骨体积分数、骨面积与骨体积比值、骨小梁厚度和骨小梁数目均显著增加,而骨小梁分离度显著减小,苏木精-伊红染色显示高脂饮食组小鼠股骨内含有较多的骨小梁;④结果表明,肥胖小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化能力增强,进一步导致小鼠的骨密度、骨小梁厚度和骨小梁数目显著增加,骨量显著升高。
- 陈迟迟张雨张雨施勤
- 关键词：干细胞骨髓间充质干细胞高脂饮食肥胖成骨诱导成骨分化小鼠
- 可溶性CD40配体酶联检测试剂盒的研制及其运用被引量：1
- 2004年
- 目的 :建立灵敏、特异和稳定的人可溶性CD4 0配体 (sCD4 0L)酶联检测试剂盒。方法 :采用鼠抗人CD4 0L单克隆抗体 1B1为包被抗体 ,识别人CD4 0L不同位点的单克隆抗体 4F1经琥珀酰羟基生物素 (BNHS)标记后为检测抗体 ,建立双抗体夹心的人sCD4 0L酶联检测方法。在此基础上 ,测定 2 0 0例健康供血员血清和血浆中sCD4 0L的含量。结果 :成功研制人sCD4 0L酶联检测试剂盒 ,灵敏度为 0 5ng ml。该试剂盒 4℃放置 3个月 ,离散度 (CV) <± 6 9% ,回收率为 94 7%～ 10 4 8% ,提示该检测系统具有良好的灵敏度、稳定性和准确性 ,与国外商品化试剂盒的分析结果相似。应用该试剂盒测得的健康供血员血清和血浆sCD4 0L含量分别为 9 5 6± 4 71、2 98± 1 13ng ml。结论 :研制成灵敏、特异和稳定的人sCD4 0L酶标检测试剂盒 ,能够对血清和血浆中sCD4 0L进行准确定量分析 ,并首次证实血清和血浆中sCD4
- 樊一笋朱华亭李文香顾国浩施勤张寄南束永前张学光
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- 2004年
- 为了构建稳定表达人OX4 0L基因的L92 9细胞株 ,初步研究OX4 0L信号通路对T细胞的共刺激效应。TRIzol一步法抽提人成熟DC总RNA ,RT PCR扩增出OX4 0L基因 ,双酶切装入逆转录病毒载体pEGZ Term ,与辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞 2 93T ,用其培养上清感染L92 9细胞 72h后 ,经Zeocin筛选出稳定表达OX4 0L分子的L92 9细胞株 ;采用3 H TdR掺入实验、细胞凋亡、细胞周期等方法研究OX4 0L信号对T细胞体外培养的共刺激作用。结果显示 ,成功地构建了含OX4 0L基因的重组逆转录病毒载体 ;经转染包装细胞 2 93T后 ,筛选获得能稳定高表达人OX4 0L蛋白的L92 9转基因细胞 ;OX4 0L转基因细胞对体外培养的T细胞具有促增殖、活化和抗凋亡的作用 ;同时 ,OX4 0 /OX4 0L信号与CD2
- 王勤孙建军施勤陈永井戴俊陈洁束永前张学光
- 关键词：T细胞脂质体免疫应答基因转染
- 人TACI-Fc融合蛋白对XG6细胞体外生长的调节作用被引量：1
- 2005年
- 目的建立人TACI-Fc基因转染细胞,获得该融合蛋白,研究其对多发性骨髓瘤细胞系XG6的生物学作用。方法利用RT-PCR方法从扁桃体细胞中克隆全长TACI cDNA片段,将该基因的胞外段sTACI与人IgG1Fc段连接到pcDNA真核表达载体上,使两者融合表达。脂质体法将重组质粒pcDNA-sTACI-Fc转入小鼠成纤维细胞系L929,ELISA法测定转染TACI-Fc基因的L929细胞培养上清中TACI2Fc的含量,培养上清经亲和层析柱纯化,获得纯化的融合蛋白TACI-Fc。然后应用台盼蓝染色活细胞计数和3H2TdR掺入法检测其对XG6细胞的生长和增殖的调节作用。结果经RT-PCR和ELISA方法检测表明,成功构建了稳定表达sTACI-Fc融合蛋白的基因转染细胞。基因转染细胞的培养上清经亲和层析柱纯化,得到TACI-Fc融合蛋白。体外检测其生物学活性结果表明,该融合蛋白可有效地阻断Blys对骨髓瘤细胞株XG6的促增殖作用。结论本实验成功地将TACI胞外段与人IgG1Fc段在真核细胞中进行融合表达,表达的蛋白质具有良好的生物学功能,这为进一步对TACI基因进行功能研究奠定了物质基础。
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