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张中林
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- 所属机构:中国农业科学院生物技术研究所
- 所在地区:北京市
- 研究方向:生物学
- 发文基金:国家自然科学基金
相关作者
- 沈桂芳
- 作品数：125被引量：743H指数：17
- 供职机构：中国农业科学院生物技术研究所
- 研究主题：叶绿体 转基因 叶绿体转化 衣藻 生物技术
- 山松
- 作品数：11被引量：156H指数：8
- 供职机构：中国农业科学院生物技术研究所
- 研究主题：叶绿体 烟草 衣藻 叶绿体转化 丙肝病毒
- 钱凯先
- 作品数：91被引量：735H指数：16
- 供职机构：浙江大学生命科学学院
- 研究主题：螺旋藻 C_ 叶绿体 基因工程 分离纯化
- 苏宁
- 作品数：30被引量：257H指数：11
- 供职机构：中国农业科学院作物科学研究所
- 研究主题：编码基因 相关蛋白 叶绿体 水稻 叶绿体转化
- 范国昌
- 作品数：26被引量：230H指数：8
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所
- 研究主题：磁小体 叶绿体 趋磁细菌 衣藻叶绿体 衣藻
- 叶绿体基因组及其编码的基因
- 1996年
- 高等植物细胞中,遗传物质存在于三种细胞器中,即核、叶绿体、线粒体。叶绿体遗传物质的研究源于1909年Bear & Correns对高等植物花斑病的研究,1962年Ris等首次证实了叶绿体中存在着DNA。1975年Kolodner & Tewari第一次得到纯化的完整的叶绿体基因组(ctDNA),1976年建立了玉米叶绿体DNA的物理图谱,到1986年,在叶绿体基因组上进行了多种RNA和蛋白质基因的定位。
- 沈燕新张中林沈桂芳
- 关键词：叶绿体基因组叶绿体DNAPSBA基因内含子高等植物RNA聚合酶
- nifH基因能够在高等植物叶绿体原核环境中表达被引量：2
- 2001年
- 以高等模式植物烟草为材料，对固氮酶铁蛋白基因ｎｉｆＨ在叶绿体中的表达进行了研究．构建了ｎｉｆＨ基因叶绿体转化载体，并利用基因枪轰击法对烟草叶片进行了转化．基因枪轰击后，共获得６株壮观霉素抗性再生植株．ＰＣＲ检测及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定结果表明，ａａｄＡ和ｎｉｆＨ等外源基因已整合进入受体植物叶绿体基因组中； Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫沉淀法的测定结果则证明，ｎｉｆＨ基因能够在叶绿体原核环境中表达．
- 张中林钱凯先沈桂芳
- 关键词：叶绿体NIFH基因高等植物原核表达烟草
- 丙型肝炎病毒融合抗原基因NS3CE对番茄的遗传转化被引量：14
- 2003年
- 丙型肝炎病毒是危害人类健康重要的病源之一 ,研制安全、经济、有效和易于推广使用的抗病毒疫苗是预防和控制 HCV的有效手段。本实验用 PCR方法克隆了 HCV中能够产生中和性抗体、具有很好免疫原性的非结构 N S3区基因片段及核心抗原 CE基因片段 ,并在两段基因之间加入连接肽 SPGS的密码子序列 ,构建成融合抗原基因 N S3- CE。将该融合基因连接到载体 p BI12 1上 ,构建植物表达载体 p BINS3CE。通过根癌农杆菌 EHA10 5介导获得转基因番茄。并进行了 PCR扩增、Southern杂交及 RT- PCR等分子检测 ,结果证明外源基因已整合到转基因番茄的基因组中 ,并在转录水平得到表达。
- 李轶女张中林苏宁孙萌倪丕冲沈桂芳
- 关键词：丙型肝炎病毒番茄转基因番茄
- 丙肝病毒融合抗原基因导入烟草叶绿体及转化株同质化的研究被引量：13
- 2000年
- 植物生物反应器的研究已成为当前基因工程领域的一个新生长点。本实验用 PCR方法 ,从丙型肝炎病毒 c DNA文库中克隆了非结构 NS3区基因片段及核心抗原 C区基因片段 ,并在两段基因间加入连接肽 SPGS的密码子序列 ,构建成融合抗原基因 NS3- C。将该融合基因转入烟草叶绿体转化及表达载体中 ,通过基因枪转化法得到转基因植株。对 NS3- C融合基因转化植株进行 PCR及 Southern杂交试验分析 ,证明外源基因已整合到烟草叶绿体基因组中 ;对转化植株的 Southern杂交试验还表明 ,通过不断地分化筛选培养 。
- 山松张中林吴祥甫沈桂芳
- 关键词：烟草同质化
- 除草剂抗性基因bar导入烟草叶绿体被引量：29
- 1999年
- 将编码Phosphinothricin acetyltransferase的bar基因与水稻叶绿体psbA基因的启动子和终止子构建成表达盒,连同烟草叶绿体基因组同源片段rpl2-trnH-psbA和trnK-ORF509A以及选择标记基因aadA一起构建成烟草叶绿体转化载体pTZBA.基因枪法转化烟草叶片,经壮观霉素筛选获得转化再生植株.分别以1.0kb的叶绿体同源片段trnK-ORF509A和0.6kb的bar基因为探针,对转基因烟草叶绿体DNA进行Southern杂交检测,证明外源基因已整合入烟草叶绿体基因组中.抗性试验表明,转基因植株具备除草剂(PPT)抗性.
- 张中林山松陈曦刘春英钱凯先沈桂芳
- 关键词：BAR基因烟草除草剂叶绿体
- 烟草叶绿体转化载体的构建及转基因植株的获得被引量：14
- 1998年
- 选择烟草叶绿体基因组同源片段rp12-trnH-psbA和trnK-ORF509A,及aadA抗壮观霉素基因,构建烟草叶绿体转化载体pTRZ。制备pTRZ DNA金粉子弹,通过基因枪轰击烟草幼苗叶片,经壮观霉素筛选获得了愈伤组织和转化再生植株。对烟草叶绿体转化植株进行PCR和Southern分析,结果证明其中No.13、16、23为整入了外源aadA的叶绿体转基因植株,同时其子代呈现壮观霉素抗性,aadA基因得到稳定遗传。
- 邹竹荣张中林山松倪丕冲沈桂芳
- 关键词：烟草叶绿体转化转基因植株
- 油菜叶绿体基因组同源重组片段的克隆及phb基因定点整合载体的构建被引量：5
- 2001年
- 利用叶绿体基因组在进化过程中高度保守的特点 ,根据烟草、水稻和玉米叶绿体基因组全序列资料 ,设计合成引物 ,PCR扩增并克隆了油菜叶绿体两个重要的功能基因rbcL和atpB(GenBank登录号分别为AF2 67640和AF2 67641) ,并以此作为定点整合外源基因的同源重组片段。以来自叶绿体的强启动子PpsbA和Prrn等驱动PHB合成途径中 3个关键酶基因phbA、phbB和phbC ,分别构建表达盒 ,并将它们按照其在原始菌株中的自然转录顺序phbC phbA phbB相串联 ,最后连同选择标记基因aadA表达盒一起 ,克隆到油菜叶绿体同源片段中 ,构建成phb基因定点整合载体pRCABZ和pRCABF。酶切及Southern杂交结果证明所构建的转化载体符合预期设计。叶绿体转化及后续工作目前正在进行之中。
- 张中林张景昱李轶女苏宁宋艳茹沈桂芳
- 关键词：叶绿体转化油菜
- 丙肝病毒融合抗原基因NS_3-C定点整合入衣藻叶绿体基因组的研究被引量：26
- 1999年
- 用ＰＣＲ 方法从丙型肝炎病毒（ＨＣＶ） ｃＤＮＡ 文库中克隆了两段ＤＮＡ 片段，即ＨＣＶ 基因组非结构ＮＳ３区抗原基因（约０．７ ｋｂ）和核心抗原Ｃ区抗原基因（约０．６ ｋｂ）的ｃＤＮＡ 片段。在两段ｃＤＮＡ 间加入连接肽Ｓｅｒ－ Ｐｒｏ－ Ｇｌｙ－ Ｓｅｒ 的密码子序列，构建成融合抗原基因ＮＳ３－ Ｃ。将该融合基因与衣藻叶绿体基因ａｔｐＡ 的启动子和ｒｂｃＬ 基因的３′末端连接，得到丙肝病毒融合抗原基因ＮＳ３－ Ｃ表达盒，再将该表达盒与选择标记基因ａａｄＡ 表达盒和衣藻叶绿体基因组同源片段连接，构建成衣藻叶绿体转化载体ｐＳＳ６。基因枪法转化衣藻叶绿体，经壮观霉素筛选获得转化再生的单藻落，对转基因衣藻的ＰＣＲ 和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交分析表明，融合抗原基因ＮＳ３－ Ｃ已整合到衣藻叶绿体基因组中。
- 张中林山松陈曦苏宁吴祥甫钱凯先沈桂芳
- 关键词：基因融合叶绿体转化衣藻
- 油菜叶绿体定点转化载体的构建及其杀虫性被引量：24
- 2000年
- 首先从油菜叶绿体基因组克隆得到包含rps7基因在内的 1.0kbDNA片段和包含ndhB基因在内的 2 .4kbDNA片段 ,同时从苏云金芽孢杆菌质粒上克隆得到一个全长 3.5kb的Bt杀虫蛋白基因cry1Aa。然后以rps7和ndhB基因作为同源重组片段 ,成功构建了包含Bt杀虫蛋白基因和aadA抗壮观霉素基因的油菜叶绿体定点转化载体 ,并对克隆菌体总蛋白进行了生物杀虫试验。结果表明 ,Bt杀虫蛋白基因能够得到表达 ,并且对棉铃虫幼虫有很强的毒杀作用。含抗虫基因的油菜叶绿体转化载体的构建在国内外为首次报告 。
- 侯丙凯张中林周奕华章银梅沈桂芳陈正华
- 关键词：油菜叶绿体转化杀虫试验
- 苏云金芽孢杆菌(Bt)晶体毒蛋白基因在烟草叶绿体中的表达被引量：47
- 2000年
- 将全长３．５ｋｂ的Ｂｔ基因３'端缺失，得到长为２．１ｋｂ、１．８ｋｂ的基因。分别将这３个长度 （１．８ｋｂ２．１ｋｂ、３．５ｋｂ）的基因置于水稻叶绿体ｐｓｂＡ基因的启动于和终止子调控之下，并与选择 标记基因ａａｄＡ（编码氨基糖苷－３'－腺苷酸转移酶，具壮观霉素抗性）表达盒相连５以烟草叶绿 体基因ｔｒｎＨ－ｐｓｂＡ－ｔｒｎＫ为同源片段，构建成叶绿体转化载体ｐＢＴ３、ｐＢＴ８和ｐＢＴ２２。用基因枪 把Ｂｔ基因导入烟草叶绿体中，以壮观霉素筛选，获得转化再生植株。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ、Ｗｅｓｔｅｒｎ检测 分析证明Ｂｔ基因已整合进入烟草叶绿体基因组中并得到表达。且子代呈现壮观霉素抗性，即 外源基因得到稳定的遗传。利用转基因植株叶片对棉铃虫进行杀虫实验，有些转化植株表现 出较强的抗虫性。总体上来说，转Ｂｔ全长基因的烟草植株，其杀虫效果最好，其余两种差异不 大。首次报道将Ｂｔ基因成功转入高等植物叶绿体并获得表达。
- 张中林任延国沈燕新山松范国昌吴祥甫钱凯先沈桂芳
- 关键词：BT基因叶绿体烟草苏云金芽孢杆菌
